تحديد التفاعل وعيار من المصل باستخدام الفحص Haemagglutination

تحديد التفاعلية والعيار للمصل باستخدام مقايسة التلازن الدموي. التلازن هو تفاعل يحدث بين الأجسام المضادة الذائبة والمستضدات الجسيمية، والتي قد تشمل الخلايا أو الجزيئات الحاملة.

تسمح الحاتمات الموجودة على سطح الحامل للأجسام المضادة بالارتباط والربط التشابكي بين الحوامل، مما يؤدي إلى تكوين شبكة معقدة تسمى معقد المستضد والجسم المضاد. التلازن الدموي هو شكل محدد من التلازن حيث ترتبط الأجسام المضادة بخلايا الدم الحمراء، والتي تعمل كمستضد جسيمي. وتعد خلايا الدم الحمراء أهدافاً مفيدة نظراً لتوفرها بسهولة وإمكانية رؤية النتائج بوضوح بالعين المجردة.

يتم تخفيف عينات المصل تسلسلياً ثم وضعها في طبق ubo ذي 96 بئراً. بعد ذلك، يُضاف معلق من خلايا الدم الحمراء Riva cells. وعندما تكون الأجسام المضادة موجودة بتركيز عالٍ، يحدث ارتباط بخلايا الدم الحمراء مما يؤدي إلى تكوين شبكة كبيرة.

مع استقرار هذه الشبكة بفعل الجاذبية، فإنها تتخذ شكل صفيحة ubo. وعندما يُنظر إليها من الأعلى، تظهر طبقة عريضة من خلايا الدم الحمراء. وهذا يشير إلى تفاعل تراص دموي إيجابي.

عندما تكون مستويات الأجسام المضادة منخفضة، لا يمكن أن تتشكل شبكة، وتتخذ خلايا الدم الحمراء شكل طبق UBO وتتركز في القاعدة مكونةً رسباً صغيراً. يُعد هذا تفاعلاً سلبياً للتلازن الدموي. يوضح هذا المخطط تفاعلاً إيجابياً.

تُشكل الخلايا شبكة أثناء ترسيبها، حيث تتكيف مع شكل الصفيحة ذات القاع على شكل حرف U. نرى في الجهتين اليسرى واليمنى المنظور العلوي حيث تظهر طبقة عريضة من كرات الدم الحمراء. وفي حال وجود كمية متوسطة من الأجسام المضادة، سيُلاحظ تشكّل بعض الحروف.

يسمح تلازن الدم أيضاً باختبار تفاعلية عينات مصلية مختلفة مقابل مستضد معروف. كما يمكن تحديد عيار عينة المصل، حيث يمثل العيار آخر تخفيف ظهر عنده تفاعل إيجابي.

عادةً ما تكون العيارية أعلى كلما زاد تركيز الأجسام المضادة في عينة المصل. يوضح هذا المخطط تفاعل تراص دمي سلبي، حيث لا توجد كمية كافية من الأجسام المضادة للقيام بالربط التشعبي لخلايا الدم الحمراء.

بينما تترسب الخلايا بفعل الجاذبية، فإنها تنزلق على جانب البئر مكونةً كريّة متراصة في القاع. يوضح المخطط الموجود على اليمين كرات الدم الحمراء عند عرضها من الأعلى. لهذا الاختبار، ستحتاج إلى طبق واحد بـ 96 بئرًا من النوع U bottom.

من الضروري استخدام أطباق ذات قاع على شكل حرف U، حيث إن الأطباق ذات القاع المسطح لن تسمح للخلايا بالترسب في شكل كريّة، مما يجعل التفسير مستحيلاً. يتم استخدام ماصة لنقل 50 µL من المصل واختبار تعليق بنسبة 1% من خلايا Riva ومحلول لمرة واحدة من منظم saline الفيروني إلى كل بئر من الصف. ومن 1 إلى 12، يتم نقل 50 µL من منظم saline الروال.

يُستخدم هذا كمخفف. الآن، ضع 50 µL من المصل في البئر A1. هذا هو التخفيف الأول بنسبة 1 إلى 2.

باستخدام جهاز الرج (perpet)، تأكد من خلط عينة المصل جيداً. وبمجرد الخلط، اسحب 50 microliters من البئر A1 وانقلها إلى البئر A2. يمثل هذا التخفيف الثاني بنسبة 1 إلى 2، مما يمنحك تخفيفاً بمقدار أربعة أضعاف.

استمر في هذه السلسلة من التخفيفات باستخدام الآبار من الثالث وحتى الحادي عشر. لا تضع أي مصل في البئر 12، حيث يمثل هذا البئر الضابط السالب باستخدام المحلول الملحي المنظم (roal buffer saline). الآن، خذ المعلق بنسبة 1% من خلايا Riva، والذي تم خلطه جيداً، وانقل 50 µL إلى الآبار من A1 وحتى A12.

بمجرد إضافة الخلايا، قم بتغطية الطبق والنقر عليه برفق لضمان اختلاط العينات والخلايا. الآن، قم بالتحضين عند 37 °C لمدة 60 دقيقة. ويُعد المحضن الرطب مناسباً لهذا الغرض.

خلال فترة الحضن التي تستغرق 60 minute، ستحدث تفاعلات بين المستضد والأجسام المضادة وستبدأ الخلايا في الترسيب. إن المقطع المرئي الذي تشاهده هو تصوير بفاصل زمني للفترة الكاملة التي تبلغ 60 minute. لقطة مقربة هذه للآبار من 5 إلى 10.

لقد فحصنا بالفعل البئر 12، والذي كان بمثابة التحكم في محلول VBS في هذه التجربة. لقد شكلت الخلايا كتلة متراصة تشير إلى أن المقايسة قد عملت بشكل مناسب. أما البئران الخامس والسادس فهما مثالان على التلازن الدموي الإيجابي.

تُظهر البئر السابعة مثالاً لنتيجة تراص متوسطة، بينما تكون الآبار الثامنة والتاسعة والعاشرة سلبية بالنسبة للتراص الدموي. وبناءً على هذه النتيجة، يتم تحديد العيار استناداً إلى التخفيف في البئر السابعة، كونها كانت آخر بئر لوحظ فيها تفاعل إيجابي.