الشريان المساريقي تقلص والاسترخاء عن طريق الدراسات الآلي Myography أسلاك

تستخدم هذه العملية جرذان "doll" الحساسة للملح والمقاومة للملح لمقارنة تفاعلية الشرايين المقاومة المساريقية تحت شد الفينيل-إيفرين تجاه الكالسيوم خارج الخلية. يتم تحقيق ذلك أولاً عن طريق عزل القوس المساريقي من الحيوانات وتشريح فروع الشرايين المقاومة. بعد ذلك، يتم تمرير السلك الأول من سلكين من الفولاذ المقاوم للصدأ عبر قطعة قصيرة من الشريان الذي تم تشريحه، ثم يتم تثبيت الوعاء في غرفة الرسم البياني.

ثم يتم تمرير السلك الثاني من الفولاذ المقاوم للصدأ عبر تجويف الوعاء بشكل موازٍ للسلك الأول. بعد ذلك، يتم شد الوعاء المثبت للوصول إلى محيط داخلي معياري. وتتمثل الخطوة النهائية من الإجراء في إعادة تنشيط الوعاء عن طريق تحفيزه بتطبيقات متكررة من phenylephrine وإرخائه بتطبيقات تراكمية من الكالسيوم.

وفي النهاية، تظهر النتائج تغيرات في توتر الوعاء، والتي يمكن تحويلها إلى منحنى استجابة للكالسيوم واستخدامها لتحديد قيم EC 50. وللمقارنة، جاءت فكرتنا الأولى لاستخدام هذه الطريقة عندما اكتشفنا أن الشبكة العصبية في البطانات المخاطية للجرذ تعبر عن مستقبل حساس للكالسيوم من نوع gpro.

يمكن دراسة ذلك بنفس طريقة دراسة مستقبلات AIC المرّة، والتي يتم تنشيطها بواسطة مادة محفزة. وبشكل عام، قد يواجه الأشخاص المبتدئون في هذه الطريقة صعوبة بسبب صغر حجم طبقات البطانة الداخلية والعضلات الملساء، مما يجعل الأوعية عرضة للتلف بسهولة.

إذا حدث ذلك، فقد تضعف الخصائص الميكانيكية لهذه الأوعية. في البداية، قم بتجهيز منطقة العمل والأدوات الجراحية. ضع الحيوان المخدر على ظهره وامسح منطقة البطن بالكحول.

بعد إجراء فتح بطن في الخط الناصف، استخدم المقص لاستئصال حوالي 85 سنتيمتر من الأمعاء، بما في ذلك الشريان المساريقي العلوي. اقطع الطرف القريب بالقرب من البواب الطرفي والطرف البعيد بالقرب من الوصل المعوي الأعوري. ضع الجزء المستأصل في طبق بتري مطلي يحتوي على محلول ملحي فسيولوجي أو PSS في درجة حرارة الغرفة.

ثبّت الطرف القريب من الأمعاء إلى جهة اليمين، ثم ثبّت بقية الأمعاء في اتجاه عكس عقارب الساعة. بعد ذلك، قم بتشريح جزء من الشريان المساريقي يحتوي على الفرعين الثاني والثالث مع قطعة من الأمعاء من الطرف القريب. حدد نقطة التفرع التي تتخذ شكل حرف V في الشريان المساريقي وافصلها عن الوريد عن طريق التشريح.

استخدم الملاقط لسحب الأنسجة الدهنية والضامة برفق لتجنب التلامس المباشر مع الشريان. ولبدء تثبيت الوعاء الدموي، اقطع قطعتين من الشريان بطول حوالي 2 mm لكل منهما. ويمكن استخدام طرف سلك من الفولاذ المقاوم للصدأ الخالي من التنجستن بطول 4 cm وقطر 40 µm لفتح تجويف الشريان.

بعد ذلك، استخدم ملاقط دقيقة لإدخال السلك في تجويف كل شريان. مع الحرص على عدم إتلاف البطانة الغشائية، املأ غرفة تطعيم العضلة بـ PSS عند درجة حرارة 37 °C. استخدم الملاقط لنقل قطعة الوعاء الدموي الممرر بها السلك إلى الغرفة.

بعد ذلك، انقل قطعة الوعاء الدموي القريب المستأصلة إلى غرفة جهاز قياس التقلص العضلي (myograph)، واسحب الطرف على طول السلك لإدخاله في الوعاء. تجنب شد الوعاء. قم بتثبيت الطرف القريب من السلك عكس اتجاه عقارب الساعة تحت برغي التثبيت القريب في الفك الأيمن المتصل بالميكرومتر.

أمسك الطرف الحر للسلك باستخدام ملقط وثبته في اتجاه عقارب الساعة تحت مسمار التثبيت البعيد في الفك الأيمن، مع التأكد من أن قطعة الوعاء الدموي الممتدة على طول السلك تقع في الفجوة بين الفكين دون ملامسة الفك نفسه. قم بفك الفكين عن بعضهما. قم بمحاذاة السلك الثاني بشكل موازٍ للوعاء الدموي وأدخله في الطرف البعيد من التجويف.

مرر السلك برفق عبر تجويف قطعة الوعاء الدموي بحركة واحدة، مستخدماً السلك المثبت مسبقاً كدليل. أمسك السلك على بُعد سنتيمتر واحد تقريباً من الوعاء الدموي لتجنب شده أثناء المناورة وتجنب لمس البطانة الغشائية. اربط الفكين معاً وتأكد من أن سلك التثبيت الثاني يتحرك أسفل السلك الأول المثبت في اليد اليمنى.

ثبّت الطرف القريب من السلك الثاني في اتجاه عقارب الساعة تحت برغي التثبيت القريب في الفك الأيسر المتصل بالمحول. ثبّت الطرف البعيد من السلك تحت برغي التثبيت في الفك الأيسر وأحكم ربطه لشد السلك. بمجرد اكتمال عملية التركيب، اترك الجهاز لمدة 30 دقيقة للوصول إلى حالة التوازن عند 37 °C.

بعد عملية التوازن، يتم إعادة ضبط المحرك من قائمة التثبيت وبدء إجراء التطبيع، الذي يعمل على تمديد الوعاء للوصول إلى محيط داخلي معياري. للبدء، افتح قائمة التطبيع واضبط ضغط عبر الجدار المستهدف على 13.3 kilopascals. بعد ذلك، اضبط مدة كل خطوة من خطوات التطبيع على 60 seconds.

يجب أن تكون نسبة IC one إلى IC 100 مساوية لـ 0.9، ويجب ضبط معايرة IP على وضع star delta بنجمتين. قم بقياس طول الشريان المساريقي المثبت باستخدام قراءات عدسة المجهر عندما تكون الخطوط الشعرية فوق الطرفين البعيد والقريب من قطعة الوعاء الدموي. بعد عملية التطبيع، يتم إعادة تنشيط الأوعية عن طريق إجراء بداية قياسية تتكون من سلسلة من التحفيزات وفترات الغسيل.

أولاً، استبدل غطاء غرفة القياس العضلي وابدأ عملية التهوية باستخدام 95%air و 5%carbon dioxide. املأ الغرفة بمحلول PSS طازج يحتوي على 100 micromolar من حمض الأسكوربيك. قم بتقليص الوعاء باستخدام خمس micromolar من الفينيل، أو rine، أو PE لمدة خمس دقائق، ثم اغسله أربع مرات باستخدام محلول PSS buffer. بعد الغسلة الأخيرة، أعد ملء الغرفة بمحلول PSS وانتظر ثلاث دقائق قبل إعادة ملء الغرفة بمحلول PSS والتقليص باستخدام PE. وكما تم توضيحه سابقاً، أصبح الشريان الآن جاهزاً للتجربة.

قم بقياس ارتخاء الأوعية المنقبضة عن طريق الإضافة التراكمية لتركيزات متزايدة من كلوريد الكالسيوم. يوضح هذا الجدول أن التوترات الأساسية التي تلت تطبيق الفينيل-إيفرين تباينت بين جرذان wistar DS (أو جرذان doll الحساسة للملح) وجرذان DR (أو جرذان doll المقاومة للملح). يظهر هذا المخطط من جرذ wistar ارتخاء الشرايين المنقبضة بـ PE عن طريق الإضافات التراكمية للكالسيوم، حيث يكون الارتخاء ضعيفاً بشدة في أنسجة جرذان DS مقارنة بجرذان Wistar ومقارنة بجرذان DR؛ وكما هو موضح هنا، يمكن ملاحظة الاختلافات في الحساسية للكالسيوم في منحنيات الاستجابة للكالسيوم وأيضاً عند حساب قيم EC 50.

وأخيرًا، تظهر جرذان DS انخفاضًا في تعبير مستقبل استشعار الكالسيوم في الشرايين مقارنة بجرذان Dr.Rats. وبمجرد إتقان هذه التقنية، يمكن تنفيذها في غضون ساعتين إذا أُجريت بشكل صحيح. بعد مشاهدة هذا الفيديو، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية مقارنة التفاعلية الوعائية للشرايين المعوية الصغيرة تجاه المركبات الخارجية تحت ظروف القياس متساوي الطول.