الفئران عقدة اللمفاوية السطحية جراحة
مايو 21, 2012
لمتابعة تطور استجابة مناعية أكثر من مرة داخل الماوس نفسه، ويمكن إزالة الغدد الليمفاوية بشكل متتابع عن طريق الجراحة. هنا، نحن تصف كيف يمكن تنفيذ هذه التقنية.
الهدف العام من هذا الإجراء هو إزالة العقد اللمفاوية جراحيًا من فأر تحت التخدير. ويتم تحقيق ذلك أولاً عن طريق تحديد موقع العقد اللمفاوية، ثم استئصال هذه العقد، وبعد ذلك يتم إغلاق الشق الجراحي.
وفي النهاية، يمكن الحصول على معلق خلوي أحادي للتحليل التجريبي. وفي الختام، يمكن تقييم مجموعات الخلايا اللمفاوية الحية عن طريق قياس التدفق الخلوي. ويعد العرض المرئي لهذه التقنية أمراً بالغ الأهمية، حيث يجب مشاهدة تحديد موقع العقدة اللمفاوية وإزالتها لإتقان هذه العملية.
بعد تخدير الفأر، ضع مرهم العين، واحقن مادة البوبرينورفين وتأكد من التهدئة عن طريق قرص إصبع القدم، ثم أدر الفأر على جانبه. أولاً، حدد موقع العقدة اللمفاوية العضدية ثم احلق المنطقة المراد تشريحها. بعد إزالة الشعر السائب بالفرشاة، ضع مطهراً على المنطقة ثم قم بعمل شق صغير بطول خمسة مليمترات تقريباً على ظهر الساق الخلفية.
استخدم زوجين من الملاقط لتوسيع الشق حتى تظهر العقدة اللمفاوية العضدية، والتي قد تبدو رمادية أو أدكن من الدهون المحيطة بها. ثم قم بقرص اللفافة التي تغطي العقدة اللمفاوية باستخدام زوج واحد من الملاقط. ضع الزوج الثاني من الملاقط في أقصى نقطة ممكنة تحت العقدة اللمفاوية، واسحب الغشاء برفق دون تمزيق الأنسجة المحيطة.
بعد ذلك، استخدم زوج الملاقط الأول لتمزيق اللفافة واستخراج العقدة اللمفاوية. إذا تم استئصال العقدة اللمفاوية بنجاح، ستظهر بقعة من الدم في الموضع الذي كانت تشغله العقدة اللمفاوية سابقاً. ضع العقدة اللمفاوية المستأصلة في محلول متساوي التوتر؛ وإذا غطست العقدة، فإن ذلك يؤكد أن النسيج المستأصل هو عقدة لمفاوية وليس دهوناً.
بعد ذلك، تحقق من عدم وجود أي شعيرات داخل الجرح وأغلق الشق عن طريق لصق الجانبين الداخليين للجلد معاً وتثبيتهما بدباسة جراحية باستخدام مشبك واحد أو مشبكين، وذلك حسب حجم الشق. الآن، حدد موقع عقدة لمفاوية إربية وقم بحلاقة المنطقة المراد تشريحها. بعد إزالة أي شعيرات سائبة بالفرشاة، ضع مطهراً على المنطقة ثم قم بعمل شق صغير يبلغ حوالي خمسة مليمترات فوق الطرف الخلفي بالقرب من البطن.
بعد فتح الشق باستخدام زوجين من الملاقط كما تم توضيحه للتو في حالة العقدة اللمفاوية العضدية، حدد موقع العقدة اللمفاوية الأربية المستقرة ضمن نسيج الدهون المحيط. ثم قم بإزالة العقدة اللمفاوية باستخدام زوجي الملاقط كما تم استعراضه للتو. ومرة أخرى، تأكد من نجاح استئصال العقدة اللمفاوية من خلال ملاحظة بقعة الدم التي تظهر في الموضع الذي كانت تتواجد فيه العقدة اللمفاوية سابقاً، ثم ضع العقدة اللمفاوية الأربية في وعاء منفصل يحتوي على محلول متساوي التوتر.
بعد استئصال جميع العقد اللمفاوية، ضع الفأر في القفص وأضف طعاماً رطباً لتمكينه من التغذية بسهولة. بعد مرور حوالي ست إلى ثماني ساعات من الجراحة، افحص الفأر للتأكد من عدم شعوره بالألم. لاحظ بعناية أن الوضعية، وطريقة المشي، والتفاعل مع أقرانه، ومظهر الفراء تماثل حالة الفأر السليم الطبيعي.
أخيرًا، قم بتفكيك العقدة اللمفاوية عن طريق ضغطها مقابل شرائح زجاجية مطفأة في طبق بتري، ثم انقلها إلى أنبوب للحصول على معلق من الخلايا المفردة. بعد صبغ الخلايا بمضادات مستضدات سطح الخلية المطلوبة، قم بتحليل الخلايا باستخدام قياس التدفق الخلوي. تظهر هنا عينات من مخططات التشتت الأمامي والجانبي للعقد اللمفاوية التي تم جمعها من حيوانات تم تخديرها أو تضحيتها.
تعتبر الملامح والنسب المئوية للخلايا في بوابات اللمفاويات الحية في كلا المخططين المبعثرين متماثلة. وهذا يثبت أن جراحة العقد اللمفاوية هي تقنية مناسبة لحصد الخلايا؛ وبمجرد إتقانها، يمكن إجراء جراحة العقد اللمفاوية في غضون خمس إلى 10 دقائق لكل فأر إذا تم تنفيذها بشكل صحيح.
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية
نظرة عامة
تصف هذه المقالة تقنية جراحية لإزالة العقد اللمفاوية بالتسلسل من فأر تحت التخدير لتتبع الاستجابة المناعية بمرور الوقت. تتضمن العملية تحديد موقع العقد اللمفاوية، واستئصالها، وإغلاق الشق الجراحي، يلي ذلك الحصول على معلق خلوي أحادي للتحليل.
المكونات الرئيسية للدراسة
مجال العلوم
- علم المناعة
- التقنيات الجراحية
- التحليل التجريبي
خلفية علمية
- يعتبر فهم الاستجابات المناعية أمراً بالغ الأهمية في الأبحاث.
- تلعب العقد اللمفاوية دوراً رئيسياً في الجهاز المناعي.
- يسمح الإزالة المتسلسلة بالتحليل الزمني للاستجابات المناعية.
- تعزز التقنيات المرئية التعلم وإتقان الإجراء.
الغرض من الدراسة
- لتوضيح الإزالة الجراحية للعقد اللمفاوية في الفئران.
- لتسهيل دراسة تطور الاستجابة المناعية.
- لتوفير دليل مرئي للباحثين.
الطرق المستخدمة
- تحديد موقع العقد اللمفاوية في فأر مخدر.
- الإزالة الجراحية للعقد اللمفاوية.
- إغلاق الشق الجراحي بعد العملية.
- تحضير معلق من الخلايا المفردة للتحليل.
النتائج الرئيسية
- تم تحقيق استئصال ناجح للعقد اللمفاوية.
- تم الحصول على مجموعات من الخلايا اللمفاوية الحيوية.
- استُخدم قياس التدفق الخلوي لتقييم الخلايا اللمفاوية.
- ساهمت التوضيحات المرئية في تحسين فهم هذه التقنية.
الاستنتاجات
- تتيح هذه التقنية التتبع الفعال للاستجابات المناعية.
- تعد الوسائل المساعدة البصرية أساسية لإتقان الإجراءات الجراحية.
- يمكن للدراسات المستقبلية الاعتماد على هذه الطريقة لتحقيق رؤى أكثر عمقاً.
الأسئلة الشائعة
الأهمية الصناعية التنفيذية
تتيح جراحة العقد الليمفاوية المتسلسلة التتبع الطولي للاستجابات المناعية داخل الحيوان نفسه، مما يقلل من التباين التجريبي ويدعم الحد من المخاطر الميكانيكية في عملية التحقق من الهدف. ويوفر هذا النهج عدداً كافياً من الخلايا الليمفاوية الحية لإجراء المقايسات المظهرية والوظيفية، مما يعزز الثقة التنبؤية في الدراسات المناعية قبل السريرية. ومن خلال تسهيل تجارب السلاسل الزمنية، تدعم هذه التقنية الاستمرارية الانتقالية بدءاً من مرحلة الاكتشاف وصولاً إلى التحقق قبل السريري.
التطبيقات الاستراتيجية في البحث والتطوير في مجال الأدوية الحيوية
الاكتشاف المبكر والتحقق من الهدف
- القيمة العلمية: تتيح استقصاء الفرضيات العلاجية من خلال التحليل الزمني لتوسع الخلايا اللمفاوية في العقد اللمفاوية.
- القيمة التشغيلية: تقلل من استخدام الحيوانات والتباين التجريبي عن طريق إجراء أخذ عينات متكرر من الفأر ذاته.
- القيمة العلمية: تدعم الحد من المخاطر البيولوجية من خلال توصيف أنماط الخلايا اللمفاوية المقيمة في العقد اللمفاوية بمرور الوقت.
الفحص وتطوير المقايسة
- القيمة العلمية: ينتج عن هذه العملية 1-2x10⁶ خلية لكل عقدة لمفاوية، وهي كمية كافية للتوصيف المظهري والمقايسات الوظيفية.
- القيمة التشغيلية: توفر معلقات خلوية معيارية وقابلة للتكرار لتحليل قياس التدفق الخلوي اللاحق.
- القيمة العلمية: تتيح تحضير أنظمة بيولوجية مصادق عليها لتقييم المركبات بشكل موثوق في فحوصات علم المناعة.
الأبحاث الانتقالية وقبل السريرية
- القيمة العلمية: يدعم نمذجة الأنظمة ذات الصلة بالأمراض من خلال تتبع ديناميكيات الخلايا المناعية في العقد اللمفاوية بمرور الوقت.
- القيمة التشغيلية: يسهل مواءمة المؤشرات الحيوية الانتقالية من خلال المراقبة المناعية الطولية.
- القيمة العلمية: يعزز الثقة التنبؤية في النماذج قبل السريرية من خلال تمكين تقليل المخاطر الآلية للمسارات التي تتوسطها المناعة.
تكامل تدفق العمل والمسار التحليلي
تتكامل هذه الطريقة ضمن سلسلة الاكتشاف بدءاً من اختبار الفرضيات وصولاً إلى التحقق من الصلاحية قبل السريرية، مما يدعم تتبع الاستجابة المناعية والتحليل الوظيفي للخلايا اللمفاوية.
- بيولوجيا الاكتشاف: يدعم اختبار الفرضيات وتوضيح المسارات من خلال التنميط الزمني للاستجابة المناعية.
- الفحص: يتيح الجاهزية للمقايسة من خلال تعليقات خلوية مفردة قابلة للتكرار مستمدة من العقد اللمفاوية المحصودة.
- التحليلات: يُنتج مجموعات كمية من الخلايا اللمفاوية للمقارنة القائمة على قياس التدفق الخلوي عبر نقاط زمنية مختلفة.
- الأبحاث الانتقالية: يربط الاكتشاف بالتحقق قبل السريري من خلال المراقبة المناعية المستمرة في الأنظمة ذات الصلة بالمرض.
- إعادة الاستخدام المؤسسي: يمثل قدرة جراحية قابلة لإعادة الاستخدام للدراسات المناعية الطولية عبر مشاريع متعددة.
التأثير التشغيلي والمؤسسي
- القيمة العلمية: ثقة تنبؤية في التحقق من صحة الهدف من خلال تتبع الاستجابة المناعية الطولية.
- القيمة التشغيلية: التوحيد القياسي وقابلية التكرار في حصاد الخلايا اللمفاوية ومعالجتها.
- القيمة الاستراتيجية: تحسين قرارات المضي قدماً أو التوقف (go/no-go) عبر تقليل الغموض الميكانيكي في البرامج المناعية.
- تأثير المحفظة: تحديد الأولويات المعدلة حسب المخاطر بناءً على بيانات الاستجابة المناعية الزمنية من أخذ العينات المتسلسل.
اعتبارات التنفيذ
- يتطلب خبرة في تقنيات الجراحة للفئران وبروتوكولات التخدير.
- يستلزم استخدام أدوات معقمة ومحاليل متساوية التوتر للحفاظ على الأنسجة.
- يتطلب توحيد المعايير بين الفرق لضمان اتساق تحديد مواقع العقد اللمفاوية واستخلاصها.
- يتضمن اعتبارات التكييف لمواقع العقد اللمفاوية المختلفة (العضدية، الإربية) وسلالات الفئران.
- يتقيد بفترات التعافي بعد الجراحة، مما يسمح بأخذ العينات كل يومين لكل عقدة.
