استنساخه سحق الفأر العصب الوركي وتقييم لاحق للتجديد من قبل الجامعة جبل تحليل العضلات

الهدف العام من هذا الإجراء هو توضيح طريقة بسيطة وقابلة للتكرار لسحق العصب الوركي وتحليل العينة الكاملة لإعادة تعصيب العضلات بعد سحق العصب الوركي. ويتم تحقيق ذلك من خلال كشف العصب الوركي أولاً، بما في ذلك الترتيب المناسب للمباعدات الجراحية لضمان الوصول الجيد إلى العصب. بعد ذلك، يتم سحق العصب باستخدام ملقط مرقئ، ثم وضع علامة على العصب باستخدام الفحم.

بعد ذلك، قم بإزالة العضلات الفردية التي يغذيها العصب الوركي من الطرف الخلفي. وتتمثل الخطوة النهائية في تشريح العضلات الفردية لإجراء تحليل العينات الكاملة بعد الصبغ المناعي. وفي النهاية، تظهر النتائج أنه يمكن تنفيذ سحق العصب الوركي القابل للتكرار ببساطة، كما يمكن استخدام العينات الكاملة للعضلات لتحليل عملية التجدد اللاحقة.

تكمن الميزة الرئيسية لهذا الإجراء في توفيره لتقنية بسيطة وقابلة للتكرار لسحق العصب الوركي ومن ثم تقييم تجدد المحاور العصبية. ابدأ هذا الإجراء بتخدير الفأر للجراحة باستخدام خليط من 100 milligrams per kilogram من ketamine و 10 milligrams per kilogram من xylazine عبر حقن داخل الصفاق لتقليل الآلام التي تلي الجراحة. كما يتلقى الفأر حقنة تحت الجلد من 10 milligrams per kilogram من meloxicam.

بعد ذلك، قم بحلاقة كلا الوركين بعناية باستخدام مقص جراحي. ثم ضع كريم إزالة الشعر على المنخرين لضمان الإزالة الكاملة. نظف الجلد باستخدام مسحة قطنية معقمة ومحلول Betadine الجراحي.

بعد ذلك، ضع مرهم العيون على العينين باستخدام مسحة قطنية معقمة. ضع الفأر على لوح نظيف من الفولاذ المقاوم للصدأ فوق بطانية حرارية مسبقة التسخين، وحافظ على درجة حرارة الحيوان عند 37 °C. ثم قم بتثبيت جميع الأطراف باستخدام شريط لاصق.

ضع الطرف الخلفي بعناية وبشكل متماثل بحيث يشكل مفصل الركبة زاوية قائمة مع الجسم. بعد ذلك، قم بتغطية المجال الجراحي بغطاء معقم تحت المجهر. قم بإجراء شق نصف دائري عبر الخط المتوسط.

افصل الجلد برفق عن العضلات الكامنة تحته وقم بطيه من حين لآخر. ضع حوالي 0.1 milliliters من المحلول الملحى المعقم للحفاظ على رطوبة الموقع الجراحي أثناء الإجراء. بعد ذلك، افتح المستوى اللفافي بين العضلة الألوية الكبرى والرأس الأمامي للعضلة ذات الرأسين الفخذية.

لكشف العصب الوركي من أجل مجموعة ضابطة جراحية. يجب كشف العصب الوركي في الجانب المقابل وتحريكه، مع تركه سليمًا. بعد ذلك، يتم إعادة العضلات الألوية إلى موضعها وخياطتها.

قم بكشف العصب الوركي التجريبي بنفس الطريقة باستخدام المباعدات. ولتسهيل الرؤية، قم بتحرير العصب الوركي برفق من النسيج الضام المحيط به باستخدام مقص استئصال القزحية.

بعد ذلك، استخدم ملقط 5 45 الدقيق لوضع العصب عند الفك السفلي لملقط إرقاء فائق الدقة، مع محاذاة اللفافات الثلاث بشكل متجاور وليس فوق بعضها البعض. لقد تم نقش علامة على ملقط الإرقاء على بُعد 1.5 مليمتر من طرفه. ضع الجزء الخارجي من العصب الوركي بمحاذاة هذه العلامة قبل عملية السحق.

يضمن ذلك الحصول على سحق بعرض موحد، وعدم امتداد العصب خارج فكي ملقط الإرقاء عند تسطحه نتيجة قوة السحق. فإذا امتد العصب خارج أطراف الملقط، فسيتم سحق جزء منه فقط. استخدم زوجاً ثانياً من ملقط الإرقاء، يكون قد غُمس مسبقاً في مسحوق الكربون، لتحديد موقع السحق.

قم بسحق العصب في نفس موقع السحق لمدة 15 ثانية عند ثلاث نقرات. يجب ألا يمتد أي تعليم بالكربون خارج حدود السحق الأولي. وهذا أمر مهم بشكل خاص إذا كان مطلوباً تحديد موقع السحق بدقة، وذلك عن طريق غمس الملاقط مسبقاً في الكربون لمنع انتشار الكربون على نطاق واسع في الموقع الجراحي.

افتح الملقط في مسحوق الكربون، ثم أغلقه بلطف. استخدم شاشاً معقماً لمسح الكربون من على السطح الخارجي للملاقط المرقئة.

افحص الملقط تحت تكبير لا يقل عن 3x للتأكد من أن أسطح السحق مغطاة بالتساوي بكربون مسحوق. إذا لزم الأمر، يتم غمسها ومسحها مرة أخرى، ثم يتم إعادة وضع وخياطة العضلات الألوية بنفس طريقة الجانب المقابل. وأخيرًا، أغلق شق الجلد باستخدام مشابك ريفلكس مقاس 9 ملم.

إذا تبين أن مشابك الارتجاع بحجم تسعة مليمتر تقيد الحركة، يمكن استخدام مشابك ارتجاع أصغر أو ست غرز خياطة ذاتية. وبدلاً من ذلك، بعد التضحية بالفأر، قم بإزالة أربع عضلات: العضلة باسطة الأصابع الطويلة والظنبوبية الأمامية، والعضلة الشظوية الطويلة، والعضلة النعلية في الطرف الخلفي، بعناية عن طريق تثبيتها عبر أنسجتها الضامة إلى طبق مطلي بـ black sard.

ثم يتم شطفها باستخدام PBS. بعد ذلك، يتم تثبيتها في 4%Paraform aldehyde لمدة 30 دقيقة. ولتشريح كل عضلة على طبق بتري مطلي بالسخام الأسود، يتم إزالة الأوتار منها باستخدام مقص استئصال القزحية.

بعد ذلك، قم بترقيق العضلات عن طريق تقشير الألياف العضلية الداخلية. حافظ بعناية على السطح الخارجي للعضلة، بما في ذلك نطاقات الصفيحة النهائية. ثم قم بتثبيت العضلات الناتجة على شرائح موجبة باستخدام vector shield وأغطية زجاجية مقاس 22 في 40 مليمتر، مع ختم جانبين باستخدام طلاء أظافر شفاف. وعندما يتم تثبيتها بشكل صحيح على الشريحة، يجب أن تكون نطاقات الصفيحة النهائية في حالة تلامس مع الأغطية الزجاجية.

يوضح هذا الشكل مثالاً لموقع سحق في موضعه الأصلي في الطرف الخلفي الأيسر. تمت الإشارة إلى موقع السحق باستخدام الكربون الأسود. وتشير النجمة إلى فرع من العصب الظنبوبي الذي يغذي عضلات الفخذ ويعمل كعلامة تشريحية مفيدة.

خلال جراحة السحق، يتم تحديد القسم الظنبي للعصب الوركي باللون الأزرق، والعصب الشظوي باللون الأخضر، والعصب السرجياطي باللون الأصفر. يوضح هذا المقطع شبه الرقيق عملية سحق كاملة أُجريت باستخدام ملقط إرقاء الدم. تشير رؤوس الأسهم إلى الألياف المسحوقة هنا.

يظهر سحق غير مكتمل تم تنفيذه باستخدام الملقط الزاوي في مقطع عرضي آخر شبه نهائي. تشير رؤوس السهام مرة أخرى إلى الألياف المسحوقة بينما تشير السهام إلى المحاور العصبية السليمة. هذه هي الصور الناتجة من عضلات الحمولة الكاملة.

بعد إزالة النسيج الضام والترقيق اللاحق، يتم تحديد نطاقات nplate على كل عضلة. الموضح هنا هو تحضير كامل لعضلة sous. بعد 14 يوماً من سحق العصب الوركي.

تشير الأسهم إلى مناطق في الوصلة العصبية العضلية التي تمت إعادة تعصيبها بواسطة محور عصبي. هذا عرض للوصلة العصبية العضلية منزوعة التعصيب. وتشير رؤوس الأسهم إلى استطالات خلايا شوان الإيجابية لـ gap 43.

لا تظهر أي محاور عصبية في هذا التشابك العصبي العضلي منزوع التعصيب. بعد مشاهدة هذا الفيديو، سيكون لديك فهم جيد لكيفية سحق العصب الساكن بطريقة قابلة للتكرار وتحضير شرائح عضلية هرمونية لتحليل التجدد.