إعداد والتعطيل من العوامل الممرضة جرعة مزدوجة منتجات صفائح الدم معطف بافي باستخدام نظام الدم INTERCEPT

في هذا الفيديو، سيتم تحضير تركيز صفائح دموية بجرعة مزدوجة من تجمع لسبع طبقات بافي (Buffy coats)، ومن ثم معالجتها باستخدام Intercept. بعد مشاهدة هذا الفيديو، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية إنتاج تركيز صفائح دموية بجرعة مزدوجة ومثبط لمسببات الأمراض. سنقوم أولاً بتقديم نظرة عامة تخطيطية يتبعها عرض توضيحي.

يتم طرد أول سبع وحدات من الدم الكامل المتبرع به مركزياً وفصلها للحصول على سبع وحدات من الطبقة الغنية بالخلايا (buffy coat) التي تستوفي أهداف الحجم ونسبة الهيماتوكريت. ثم يتم توصيل هذه الطبقات وجمعها وطردها مركزياً. بعد ذلك، يتم فصل معلق الصفائح الدموية عن خلايا الدم الحمراء المتبقية لإنتاج مركز صفائح دموية بجرعة مزدوجة لتعطيل الممرضات وكريات الدم البيضاء.

تتم معالجة مركز الصفائح الدموية بجرعة مزدوجة باستخدام نظام intercept، الذي يعمل على ربط الأحماض النووية تشابكياً. وفي النهاية، ينتج عن هذا الإجراء جرعتان علاجيتان من الصفائح الدموية بجودة مقبولة في المختبر على مدار سبعة أيام من التخزين، وذلك وفقاً لتقييم pH glucose lactate، و PO2 و PCO2، و shallot doru. وسيقوم فني من مركز الدم الخاص بي بشرح الإجراء، بينما سنقوم نحن بوصف متطلبات المعالجة.

أولاً، تأكد من أن مركز الصفائح الدموية بجرعة مزدوجة يستوفي مواصفات معالجة Intercept التي تتراوح بين 300 إلى 420 milliliters. وحجم جرعة الصفائح الدموية يتراوح بين 2.5 إلى 7 × 10¹¹، وأقل من 4 × 10⁶ من الخلايا الحمراء لكل milliliter. ابدأ هذا الإجراء بسبع وحدات من الدم الكامل التي تم جمعها في مجموعات جمع علوية وسفلية سعة 450 milliliter.

ضع وحدات الدم في أكواب جهاز الطرد المركزي وأجرِ عملية طرد مركزي قوية بسرعة 4,880 RCF لمدة 11 دقيقة في درجة حرارة الغرفة مع ضبط المكبح على الإعداد B five وفقاً لتعليمات الشركة المصنعة. بعد عملية الطرد المركزي، سينفصل الدم إلى ثلاث طبقات: خلايا الدم الحمراء، والطبقة الميضية (buffy coat)، والبلازما. قم بتصريف البلازما في الكيس التابع العلوي وخلايا الدم الحمراء في الكيس التابع السفلي، مع ترك الطبقة الميضية التي تبلغ حوالي 48 milliliters بنسبة 37%hematocrit في حاوية التجميع.

ضع الطبقات البافية (Buffy coats) على جهاز رج الصفائح الدموية في درجة حرارة الغرفة طوال الليل، وقم بالتوصيل المعقم لسبع طبقات بافية مع 300 milliliters من محلول SSP مضافاً إليه محلول إضافي للصفائح الدموية. في تكوين متسلسل يكون فيه المحلول الإضافي في الأعلى، قم بتثبيت الخط بين المحلول الإضافي وأول طبقة بافية كما هو موضح هنا. افتح نقاط اللحام بين وحدات الطبقة البافية واسمح لها بالتصريف في حاوية الطبقة البافية الأخيرة.

بعد ذلك، افتح الملقط واللحام الموجود بين المحلول المضاف والطبقة الكريمية الأولى، واسمح بمرور حوالي ثلث المحلول المضاف (حوالي 100 milliliters) للشطف عبر كل من حاويات الطبقة الكريمية بالتتابع قبل إغلاق الملقط، كرر عملية الغسل مرتين إضافيتين باستخدام حوالي 100 milliliters من المحلول المضاف في كل مرة. افصل حاوية تجميع الطبقة الكريمية عن الحاويات الفارغة. يجب أن يكون حجم تجمع الطبقة الكريمية، بما في ذلك المحلول المضاف، حوالي 600 milliliters.

ضع طبقات البافي المجمعة (Buffy coats) على جهاز هزاز لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك، قم بتوصيل حاوية تخزين صفائح دموية مزودة بمرشح لتقليل اللوكوسيتات (leco reduction filter) مدمج بالكيس الذي يحتوي على مجمع طبقات البافي. ضع طبقات البافي المجمعة وحاوية تخزين الصفائح الدموية في جهاز طرد مركزي، ثم قم بالتدوير بسرعة 462 RCF لمدة تسع دقائق و20 ثانية.

بعد عملية الطرد المركزي، قم بتمرير معلق الصفائح الدموية عبر مرشح ليوكا (Luca) المختزل إلى حاوية تخزين الصفائح الدموية. والنتيجة هي مركز صفائح دموية بجرعة مزدوجة يحتوي على ما يقرب من 7 × 10¹¹ صفيحة دموية في 420 milliliters، والتي يمكن أن تخضع لعملية تعطيل المسببات المرضية باستخدام نظام intercept لتعطيل المسببات المرضية. يتم معالجة مركز الصفائح الدموية ذو الجرعة المزدوجة باستخدام مجموعة معالجة intercept، والتي تتكون من حاوية antoin وحاوية إضاءة وحاويتي تخزين مزدوجتين.

قم بتوصيل وعاء معلق الصفائح الدموية بوعاء Amin الموجود في مجموعة معالجة الاعتراض. ثم قم بتعليق الصفائح الدموية. اكسر الكانيولا السفلية في وعاء Amin للسماح للمحلول بالتدفق إلى وعاء الإضاءة.

بعد ذلك، اكسر الكانولا العلوية في حاوية Amin للسماح للصفائح الدموية بالتدفق عبر حاوية Amin إلى حاوية الإضاءة. اخلط مزيج الصفائح الدموية و am tosin برفق. اضغط بخفة على حاوية الإضاءة لإخراج الهواء منها.

أغلق الأنابيب بين وعاء الإضاءة ووعاء amato بحيث لا يتجاوز طول الجزء الممتد من وعاء الإضاءة أربعة سنتيمترات. قم بإزالة الأوعية الفارغة والتخلص منها. ضع مجموعة المعالجة في جهاز الإضاءة، بحيث يكون وعاء الإضاءة في القسم الكبير جهة اليسار والمنظم في القسم الأصغر جهة اليمين.

امسح معرف التبرع. رمز المنتج والمعالجة. أدخل رقم التشغيلة في جهاز الإضاءة.

أغلق الغطاء المعدني والدرج. اضغط على زر البدء لبدء عملية الإضاءة. يوفر جهاز الإضاءة جرعة محكومة من أشعة UVA لخليط الأمين الصفائحي الموجود في حاوية الإضاءة.

يرتبط الأمين بين أزواج القواعد الحمضية النووية لمسببات الأمراض، والتي قد تكون موجودة في وحدة الصفائح الدموية. وعند التعرض للإضاءة، تتشكل روابط متقاطعة دائمة تربط الـ DNA أو الـ RNA معاً، بحيث لا تعود مسببات الأمراض قادرة على التكاثر والتسبب في المرض لدى متلقي المنتج الدموي. بعد الإضاءة، قم بإزالة مجموعة المعالجة.

بعد ذلك، أخرج الحاويات من المنظم، وقم بتعليق الصفائح الدموية وطقم المعالجة. اكسر القنية عند مخرج حاوية الإضاءة واسمح للصفائح الدموية بالتدفق إلى حاوية CAD. توجد داخل حاوية CAD رقاقة تحتوي على حبيبات بوليسترين كبيرة المسام مثبتة تعمل على تقليل مستويات الأمين المتبقية في المنتج الدموي.

مع الحرص على عدم ثني رقاقة CAD. قم بتفريغ الهواء من حاوية CAD إلى حاوية الإضاءة. أغلق الأنابيب بالقرب من منفذ الدخول في حاوية CAD.

قم بإزالة حاوية الإضاءة الفارغة والتخلص منها. ضع حاوية CAD مع حاويات التخزين الملحقة بها على جهاز رج الصفائح الدموية لمدة تتراوح من ست ساعات إلى 16 ساعة. سيؤدي ذلك إلى خفض كمية amlin المتبقية إلى تركيز أقل من أو يساوي 2 µM.

بعد المعالجة بـ CAD، قم بإزالة وحدات الصفائح الدموية من جهاز الرج، وعلق الصفائح الدموية، ثم اكسر الكانيولا عند مخرج وعاء CAD واسمح للصفائح الدموية بالتدفق إلى وعاءَي التخزين. بعد ذلك، قم بتفريغ الهواء من وعاءَي التخزين. أحكم إغلاق الأنابيب فوق وصلة Y وقم بإزالة وعاء CAD.

تكون النتيجة عبارة عن مركزين من الصفائح الدموية تم تثبيط الممرضات فيهما لتقييم وظيفة الصفائح الدموية في المختبر. تم تحديد جرعة الصفائح الدموية، وpH، وPO2، وO2، وإنتاج اللاكتات، واستهلاك الجلوكوز في العينات. تم تقييم مركزات الصفائح الدموية حتى اليوم السابع من التخزين.

يوضح هذا الشكل متوسط جرعة الصفائح الدموية الأولية لمركز الصفائح الدموية مزدوج الجرعة قبل علاج التقاطع، ومتوسط جرعة الصفائح الدموية في كل من المنتجات المنقسمة المعالجة حتى اليوم السابع من التخزين. وكما يتضح هنا، بلغت خسارة الصفائح الدموية أثناء التخزين 9% تقريباً. ولا يختلف هذا الانخفاض عن الخسارة المتوقعة للصفائح الدموية أثناء تخزين الصفائح الدموية التقليدية. ووفقاً للمتطلبات الأوروبية، يجب أن تظل قيمة pH للصفائح الدموية أعلى من 6.4 حتى نهاية مدة الصلاحية.

أثناء المعالجة، ينخفض الرقم الهيدروجيني pH لمركزات الصفائح الدموية قليلاً بناءً على حجم تركيز الصفائح الدموية ونفاذية الغاز في وعاء تخزين الصفائح الدموية. يوضح هذا الشكل الرقم الهيدروجيني pH لمنتجات الصفائح الدموية المقسمة على مدار سبعة أيام من التخزين؛ حيث يظل الرقم الهيدروجيني pH مستقراً ومحافظاً عليه جيداً ضمن متطلبات المعالجة. ينبغي أن يستمر التمثيل الغذائي الهوائي في الصفائح الدموية المخزنة، وهو مؤشر على قدرة الصفائح الدموية على أداء وظيفتها داخل الجسم الحي بعد نقلها إلى المريض.

يشير استهلاك الصفائح الدموية لـ O2 وإنتاج CO2 إلى استمرار عملية التنفس بواسطة الصفائح الدموية الموجودة في حاوية PL 24 10 خلال سبعة أيام من التخزين. وبالمثل، يجب أن يستمر التمثيل الغذائي اللاهوائي في الصفائح الدموية المخزنة. وبالتالي، فإن استهلاك الجلوكوز وإنتاج اللاكتات يعدان أيضاً من مؤشرات قدرة الصفائح الدموية على أداء وظيفتها بعد نقل الدم.

يوضح هذان الشكلان مستويات اللاكتات والجلوكوز على مدار سبعة أيام من التخزين. يتوافق استهلاك الصفائح الدموية للجلوكوز مع إنتاجها للاكتات. وخلال أيام التخزين السبعة، سجلت خمس وحدات مستويات جلوكوز أقل من 1.11 millimoles per liter، وهو الحد الأدنى لمقايسة الجلوكوز.

أدت عملية تحضير طبقة البافي (Buffy coat) والتحقق من صحة التجميع إلى إنتاج مركزات صفائح دموية تستوفي معايير المدخلات المطلوبة لمعالجة الاعتراض (intercept treatment)، وبالتحديد من حيث الحجم، وعدد الصفائح الدموية، ونسبة البلازما، وتلوث كرات الدم الحمراء. كما استوفت الوحدات النهائية معايير التحقق على مدار سبعة أيام من التخزين، بما في ذلك جرعة الصفائح الدموية و pH. وتتمثل الميزة الرئيسية لهذه التقنية مقارنة بطريقة تحضير طبقة البافي التقليدية، التي تنتج مركز صفائح دموية بجرعة واحدة، في أنها تزيد من إنتاجية المكونات من مجموعات الدم، وتقلل من النفقات التشغيلية باستخدام تقنية الجرعة المزدوجة، وتعزز سلامة المرضى عن طريق تثبيط مسببات الأمراض المنقولة عبر نقل الدم.