ضوء الفحص ميول لدراسة الساعة البيولوجية الفطرية وPhotobehavior الخاضعة للرقابة في ذبابة الفاكهة يرقات

الهدف العام من التجربة التالية هو اختبار سلوك الصورة الفطري واليومي لذبابة الفاكهة الحمم البركانية عن طريق اختبار تفضيل الظلام الفاتح. يتم تحقيق ذلك عن طريق تربية اليرقات التجريبية أولا في ظل ظروف مظلمة فاتحة محددة لإنشاء ساعة يومية أولية في اليرقات. بعد ذلك ، يتم تحويل اليرقات إلى الظلام المستمر ، مما يسمح للساعة البيولوجية اليرقية بالركض بحرية.

بمجرد الوصول إلى مرحلة التغذية الثالثة L ، يتم فرز الحمم البركانية إلى مجموعات لاختبار تفضيلها للضوء في نقاط زمنية يومية مختلفة. تم الحصول على النتائج التي تظهر تفضيل الضوء الفطري واليومي بناء على حساب مؤشر التفضيل والمقارنة بين النقاط الزمنية والمجموعات التجريبية. على الرغم من أن هذه الطريقة يمكن أن توفر نظرة ثاقبة للتنظيم الفطري واليومي لاستشعار الضوء ومعالجة سلوك الصورة ، إلا أنه يمكن تطبيقها أيضا على أنظمة أخرى مثل حاسة الشم والنقض والعلاج الكيميائي وسيارات الأجرة الحرارية.

وبالمثل ، يمكن تعديله لاختبارات التعلم والذاكرة. وسيتم توضيح الإجراء ألينا و BMA لتخريج طلاب من مختبري لجمع البيض ، والسماح للذباب البالغ المتزاوج بوضع 12 ساعة على ملفات جديدة ونقلها إلى قوارير جديدة. استمر في نقل البالغين كل 12 ساعة لمدة 12 ساعة من الضوء و 12 ساعة من دورة الظلام.

احتفظ بمجموعات البيض لمدة 12 ساعة في الحاضنة. للتجربة ، قم بتربية في مرحلة L المبكرة الثلاثة. هذه هي تغذية الدليل المتاحة من 84 إلى 108 ساعة من البيض.

يعد وضع التدريج الصحيح ل LAE أمرا بالغ الأهمية لنجاح التجربة. منذ أواخر L الثالثة ، غيرت LAE سلوك الصورة لاختبار المكونات اليومية للسلوك البصري. قبل 48 ساعة من الاختبار وقبل اليرقات الذاتية مباشرة ، الفجر ، ضع اليرقات المجمعة في صندوق من الورق المقوى.

ثم انقل الصندوق إلى حاضنة ظلام مستمرة لمدة 48 ساعة حتى التجربة ، يجب أن تظل هذه اليرقة دون إزعاج في مساحتها المخصصة. قم بإعداد غطاء طبق بتري بطول تسعة سنتيمترات باستخدام مربع 20 سم مقسم إلى أربعة أرباع. كدليل.

قم بلصق مربعات 10 سم من رقائق الألومنيوم على أرباع متقابلة وقم بتغطيتها بشريط أسود. تأكد من تغطية حدود الغطاء. الغراء التالي ، مربع 20 سم مقسم إلى أربعة أرباع تحت مصدر الضوء على الطاولة.

ضع علامة على محيط طبق الاختبار على الورقة ليكون بمثابة دليل للإزاحة المتسقة. قم بتثبيت مصباح LED فوق طبق بتري باستخدام حامل دعم حديدي. اضبط الارتفاع بطريقة تضيء لوحة الاختبار بأكملها بشكل متجانس.

اضبط شدة الضوء في موقع الاختبار على ما بين 350 و760 لوكس إما عن طريق ضبط ارتفاع المصباح بشكل أكبر أو باستخدام مصدر طاقة قابل للتعديل. تحتاج غرفة التجربة إلى إضاءة الضوء الأحمر ويجب أن يكون لها نفس درجة الحرارة التي تربى منها. نشأت القوارير يومين في ظل ظلام مستمر.

اجمع الحمم البركانية في طعامهم باستخدام ملعقة من أعلى خمسة ملليمترات من الطعام. انشر الطعام على الجانب الخارجي من غطاء طبق بتري. أضف بعض الماء إلى الطعام واخلطه برفق مع الملعقة.

أضف قطرة من ماء الصنبور إلى طبق جديد باستخدام فرشاة الرسم. انقل اليرقات إلى قطرة الماء لغسلها. ثم استخدم فرشاة رسم مبللة لجمع اليرقات باستخدام فرشاة الرسم المبللة.

حدد فقط التغذية المبكرة L ثلاث يرقات وتجنب التجول المتأخر L ثلاث يرقات. انقل اليرقات المختارة إلى وسط لوحة الاختبار. التغذية L ثلاث يرقات لها كرويات أمامية مفتوحة وبارزة إلى الخارج.

في شكل يشبه الإصبع. تحتوي الكرات الخلفية على ثلاث فتحات لكل منها وأربع مجموعات من الشعر المتفرع الكبير. تمتد الغدد اللعابية إلى الجزء الثاني من البطن.

بمجرد وضع 30 يرقة في وسط لوحة الاختبار ، قم بتغطيتها بالغطاء المجهز. قم بتشغيل مصباح LED. ابدأ مؤقتا واترك اليرقات تتحرك بحرية على الطبق لمدة خمس دقائق.

ثم قم بإزالة الغطاء بسرعة واحسب عدد اليرقات في الظلام وفي أرباع الضوء. يمكن أن يؤدي تحديد موضع كل حمم بركانية إلى تسهيل العد. يمكن أن تساعد الصورة السريعة أيضا اليرقات التي تظهر تفضيلا غير واضح للضوء مثل اليرقات التي تزحف على الجدران أو تقترض في أجار على أنها تفضيل محايد وإضافتها إلى العدد الإجمالي لليرقات عند حساب مؤشر تفضيل الضوء.

بعد عد اليرقات ، تخلص من اللوحة واستخدم لوحة اختبار جديدة للتجربة التالية. بعد إجراء 10 إلى 15 تجربة لكل نمط جيني ، تابع التحليل باتباع البروتوكول. تمت مقارنة تفضيل الظلام الفاتح للحمم البركانية في وقتين مختلفين من الساعة البيولوجية.

CT zero و CT 12 ، ذاتيا ، يرقات الفجر والغسق أو تأوه لمدة 48 ساعة في ظل الظروف القياسية ثم التحول إلى الظلام المستمر لمدة ثلاثة أيام. كشف اختبار الظلام الفاتح تحت 350 لوكس أن حساسية الضوء كانت أعلى في اليرقات التي تم اختبارها عند CT صفر مقارنة باليرقات التي تم اختبارها في CT 12. باستخدام هذه الصيغة ، كان تفضيل الظلام للحمم القصوى صفر 0.52 مقارنة ب 0.36.

تنتج يرقات CT 12 التي تقارن الفهارس باستخدام اختبار ويلكوكسون قيمة P كبيرة تبلغ 0.023. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية اختبار تفضيل الضوء ليرقة troph في دائرة ونقاط زمنية مختلفة لهذا الهدف. يجب أن تكون قادرا على الاحتراك في المرحلة F الثالثة من يرقة oph ، واختبار سلوكها المضاد للضوء وحساب مؤشر تفضيل الضوء للمقارنة الإحصائية.