تشريح والتركيب الجانبي من اسماك الزرد الأجنة: تحليل التنمية الحبل الشوكي

الهدف العام من هذا الإجراء هو تشريح أجنة الزرد وتركيبها للحصول على التصور المجهري الأمثل للحبل الشوكي. يتم تحقيق ذلك عن طريق تشريح كرة البلوط أولا وإزالتها. الخطوة الثانية هي إزالة حطام البلوط وماصة الأجنة على شريحة.

بعد ذلك ، تتم إزالة السائل الزائد بعناية باستخدام منديل Kim ، متبوعا بإضافة وسيط تثبيت. الخطوة الأخيرة هي توجيه الأجنة على الشريحة باستخدام لعبة البوكر الجنينية متبوعا بتطبيق قسيمة الغطاء. في النهاية ، يتم استخدام الفحص المجهري الفلوري أو المجال الساطع لإظهار توزيع أجسام الخلايا بعد الانقسامية ومسار المحاور النامية.

يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال علم الأعصاب ، مثل الآليات المسؤولة عن الزخرفة والتمايز وتوجيه المحور العصبي. على الرغم من أن هذه الطريقة يمكن أن توفر نظرة ثاقبة للعديد من جوانب تطور الجهاز العصبي ، إلا أنه يمكن تطبيقها أيضا على الأنسجة الأخرى مثل تطوير العضلات. بشكل عام ، سيكافح الأفراد الجدد في هذه الطريقة لأن التشريح تحت المجهر مطلوب قبل بدء التجربة.

اصنع لعبة بوكر جنينية عن طريق لصق طرف ماصة بماصة سابقة ثم لصق خيط الصيد بطرف الماصة. لبدء تشريح الجنين ، ضع ما يصل إلى 30 جنينا من أسماك الزرد. العمر 24 ساعة بعد الإخصاب في طبق بتري 35 ملم مليء ب PBS.

تحت مجهر تشريح ، قم بتأمين رأس الجنين بزوج من الملقط أثناء سحب البلوط بعيدا باستخدام دبوس حشرات. ثم استخدم لعبة البوكر الجنينية لنقل الأجنة إلى جزء من طبق بتري لا يحتوي على الكثير من بقايا الصفار. بعد ذلك ، استنشق الأجنة في ماصة مرعى زجاجية تسحب أقل قدر ممكن من السوائل.

ثم قم ببرفق بعمل ما يصل إلى 21 جنينا على شريحة. تخلص من السوائل الزائدة بحذر باستخدام منديل مختبري مع تجنب لمس الأجنة ، ثم أضف قطرة واحدة من وسط التركيب إلى الأجنة. بعد ذلك ، استخدم لعبة البوكر الجنينية لتوجيه الأجنة على جوانبها في صفين إلى ثلاثة صفوف.

الآن ، أضف القليل من الفازلين إلى كل ركن من أركان زلة الغطاء. اقلب زلة الغطاء بحيث يكون الجانب الذي يحتوي على الفازلين متجها لأسفل وضع زلة الغطاء فوق الأجنة. يعمل الفازلين على منع تلف الأجنة من الضغط المفرط.

اضغط برفق على زلة الغطاء في كل زاوية حتى تلامس وسائط التثبيت زلة الغطاء إذا لزم الأمر، باستخدام ماصة في حدود 20 إلى مائة ميكرولتر. أضف المزيد من وسائط التثبيت بجوار زلة الغطاء واترك الوسائط المضافة تتماسك أسفل زلة الغطاء. الآن ، استخدم منديل مختبري للتنظيف المحيط بللة الغطاء.

لا تضغط على زلة الغطاء لأن ذلك قد يؤدي إلى إتلاف الأجنة عند تنظيفها بشكل صحيح ، والمنطقة جافة ولا تحتوي على فازلين أو وسائط تصاعد. انتهي باستخدام طلاء الأظافر لإغلاق حواف زلة الغطاء. بعد تركيب أجنة الزرد ، تم تصور العديد من أجزاء HEMI فوق امتداد كيس البلوط.

يوضح هذا الشكل تعبير NK X 6.1 في الحبل الشوكي البطني لجنين الزرد. يتم توزيع NK X 6.1 mRNA في النصف البطني تقريبا من الحبل الشوكي بعد 24 ساعة من الإخصاب. ضمن مجال السلف ، يمكن تمييز الخلايا السلفية عن خلايا ما بعد الانقسام بسبب وجود صفيحة الأرضية الموجودة في الجزء الإنسي من الحبل الشوكي.

ينظر إليه ببصريات DIC. يمكن تمييز الخلايا الفردية بوضوح وهناك حدود محددة بين الخلايا الشفطرة وغير المعبرة واضحة. يصاحب خروج دورة الخلية السلفية تغييرات في التعبير الجيني.

تظهر هذه الصورة تعبيرات روبو ثلاثة في الخلايا العصبية بعد الانقسام. عائلة مستقبلات الروبوت هي مستقبلات توجيه محورية يسمح تعبيرها بتعداد دقيق للخلايا العصبية بعد الانقسام. لاحظ أن لوحة الأرضية ومنطقة السلف غير واضحة في هذا المستوى البؤري الجانبي.

تم استخدام الفحص المجهري متحد البؤر لتصوير znp واحد التألق المناعي ، والذي يصنف المحاور الحركية كما هو موضح في هذا الجنين المركب جانبيا. تخرج الخلايا العصبية الحركية من الحبل الشوكي بطنيا بعد 24 ساعة من الإخصاب لتعصيب العضلات النامية المحيطة. بمجرد إتقانها ، يمكن القيام بهذه التقنية في 30 دقيقة إذا تم إجراؤها بشكل صحيح.

أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر الحفاظ على سلامة الأنسجة من خلال التشريح المجهري الدقيق. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية استخدام تقنيات التشريح المجهري لإزالة صفار أجنة الزرد للتركيب والتصور المجهري.