قياس التغيرات في حساسية اللمس في المخلب الخلفي للفئران باستخدام جهاز فون فراي الإلكتروني

الهدف العام من هذا الإجراء هو قياس عدم وجود استجابات حساسة للضغط الميكانيكي في المخلب الخلفي للفئران. يتم تحقيق ذلك عن طريق وضع أولا على أرضية سلكية والسماح لها بالتعود عندما تكون جاهزة. يتم تطبيق طرف من مادة البولي بروبلين على الجانب السفلي من المخلب الخلفي ، ويزداد الضغط تدريجيا.

عندما يتم ملاحظة الاستجابة السلوكية المناسبة ، يتم سحب التحفيز. بمجرد جمع قيم خط الأساس ، تتلقى تدخلا تجريبيا قبل إجراء مزيد من الاختبارات. في النهاية ، تتم مقارنة التغييرات في عتبات انسحاب المخلب الخلفي عبر مجموعات العلاج لتحديد تأثير علاج معين على التغيرات في حساسية اللمس للضغط.

الألم هو عنصر أساسي للالتهاب. من المهم قياس وتوصيف الألم في سياقات مختلفة. يمكن تطبيق هذه الطريقة البسيطة نسبيا لتقييم الألم على العديد من نماذج الالتهاب المختلفة.

توضيح الإجراء تيانا وف فني أبحاث في مختبري ، ماديسون ماك ، الذي شارك في هذا العمل كطالب جامعي وأكيلا سايكس. حاليا طالب جامعي في مختبري. ابدأ بإعداد جهاز الاختبار لسهولة الوصول إلى الكفوف الخلفية.

ضع الغرف الفردية فوق أرضية شبكية. يجب أن تكون الأرضية الشبكية على ارتفاع مريح وعلى سطح قوي. بعد ذلك ، ضع جهاز Von Frey الإلكتروني على سطح الطاولة.

تأكد من توصيل المسبار والكابل بشكل مناسب بوحدة العرض وقم بتشغيل الجهاز في وضع الإعداد. اضبط القراءة على الصفر وضع وزن الاختبار المقدم برفق على مخروط مسبار فون فراي. سجل القراءة وكرر هذا الإجراء مرة أخرى في نهاية الاختبار ، إذا كان هناك تناقض بين القيمتين ، فقد يحتاج الجهاز إلى إعادة المعايرة.

حدد طرف مادة البولي بروبلين بالحجم المناسب للأنسجة المراد اختبارها. تعمل الأطراف الصلبة بشكل جيد مع أنسجة المخلب الخلفي الأقل حساسية والأكثر صلابة. قم بتركيب الطرف برفق على مخروط المسبار.

قم بالتبديل التالي من وضع الإعداد إلى وضع التشغيل. سيعرض هذا الحد الأقصى للضغط المطبق عند سحب المسبار. هناك حاجة إلى اثنين من المحققين لقياس عتبات سحب المخلب الخلفي.

أحدهما ، لتشغيل الجهاز وإجراء القياسات ، والآخر لتسجيل تلك القياسات من أجل تقليل التحيز. يجب أن يكون الباحث الذي يقوم بتشغيل جهاز التخدير TER أعمى عن العلاجات وكذلك عن قيم عتبة الانسحاب المسجلة. علاوة على ذلك ، لضمان الاتساق بين القياسات ، يجب على نفس الفرد تسجيل جميع قيم خط الأساس وعتبة السحب.

قبل 48 ساعة من العلاج ، يتم تسجيل المجموعة الأولى من قياسات خط الأساس. ضع مادة ماصة أسفل الحامل لجمع النفايات المفرزة. بعد تركيب الطرف وتصفير المسبار ، يجب على المجرب الذي يسجل القياسات وضع الفئران في غرف فردية.

قم بتغطية الغرف بأغطية مثقبة ، وضع جسما ثقيلا في الأعلى. لمنع الفئران من الهروب ، اسمح للفئران بالتأقلم مع الغرفة لمدة 15 دقيقة قبل المتابعة. بشكل عام ، سيكافح الأفراد الجدد في هذه التقنية من التطبيق التدريجي للضغط المتزايد ، ومع إنشاء الاتساق الداخلي مع قياساتهم الخاصة ، فإن الممارسة ضرورية لتوليد نتائج قابلة للتكرار.

عندما تكون جاهزا ، استخدم يديك لرفع المسبار ببطء وتحفيز وسادة القدم للمخلب الخلفي الأيسر أو الأيمن. قم بزيادة الضغط تدريجيا حتى يتم ملاحظة سلوك الألم. يتم تحديدها عن طريق تراجع المخلب الخلفي أو لعق المخلب الخلفي أو القفز على المخلب.

اطلب من المحقق الآخر تسجيل الضغط الذي أثار السلوك المرصود. أثناء القياس ، من المفيد تشجيع الفأر على البقاء ثابتا عن طريق وضع حنك الطعام خارج الغرفة مباشرة أو إحداث ضوضاء طفيفة مثل النقر اللطيف قبل أخذ القياس. استمر في الماوس التالي حتى يتم اختبار كل منها مرة واحدة وكرر هذا الإجراء أربع مرات أخرى.

بعد جمع خمس قيم أساسية ، احصل على متوسط لكل ماوس. كرر قياسات خط الأساس بعد 24 ساعة واستخدم هذه القيم لحساب متوسط آخر. للتأكد من أن جميع الفئران لديها استجابات أساسية متسقة ، استبعد التي يقل متوسط عتبة الانسحاب الأساسية فيها عن 3.5 جرام أو مع عتبات خط الأساس تختلف بمقدار جرامين أو أكثر.

أخيرا ، قم بتعيين الفئران في مجموعات علاج منفصلة بحيث يكون متوسط خط الأساس للانسحاب لكل منها متشابها قدر الإمكان هنا ، تم قياس عتبات الانسحاب بعد المخلب الخلفي ، وإعطاء السم ، ROS raca. التحكم المعالج بالمحلول الملحي. أظهرت الفئران تغيرا طفيفا مقارنة بخط الأساس في جميع الأوقات.

الحفاظ على استجابات النقاط التي تم اختبارها في الفئران المعالجة بوضوح لمدة تصل إلى ست ساعات. بالإضافة إلى ذلك ، كانت وذمة الأنسجة ، وهي سمة من سمات الالتهاب ، واضحة في السم ، ولكن ليس الكفوف الخلفية المعالجة بالمحلول الملحي. كانت التغيرات الناجمة عن السم في حساسية اللمس مصحوبة بتدفق عدلات يبلغ حوالي 1000 ضعف.

بالمقارنة مع الكفوف الخلفية المعالجة بالمحلول الملحي في الكفوف المعالجة بالمحلول الملحي ، كانت الخلايا البدينة الأخمصية في أنسجة المخلب الخلفي سليمة إلى حد كبير أو أظهرت تحبيبا خفيفا. في المقابل ، أظهر الخلف المتزاوج 15 إلى 20٪ تحلل معتدل وواسع النطاق للخلايا البدينة. يمكن تكييف هذه التقنية لتقييم الحساسية الميكانيكية أو اللمسية في مجموعة واسعة من الأنسجة بخلاف المخلب الخلفي.

لذلك ، يمكن دمج هذه التقنية في العديد من نماذج القوارض المختلفة للالتهاب والألم.