التكيف Videofluoroscopic طرق دراسة السنونو الإنسان لكشف وتوصيف عسر البلع في نماذج الفئران الأمراض

الهدف العام من هذا الإجراء هو دراسة وظيفة البلع في القوارض التي تتصرف بحرية ، ويشار إليها باسم دراسة البلع بالفيديو بالمنظار أو VFSS أولا. تم إنشاء غرفة تغذية لحصر القوارض في مساحة صغيرة أثناء الاختبار. الخطوة الثانية هي إجراء التكييف السلوكي باستخدام حل اختبار لضمان أقصى قدر من المشاركة.

الخطوة التالية هي إجراء اختبار VFSS مع الفئران المكيفة مسبقا. أخيرا ، تخضع مقاطع الفيديو لتحليل إطار تلو الآخر لتحديد معلمات البلع. في النهاية ، يمكن استخدام أداة التقييم الجديدة هذه للكشف عن عسر البلع وتوصيفه في نماذج المرض المتطابقة وتوفير مؤشرات حيوية وظيفية لاستخدامها في التجارب قبل السريرية.

خطرت لنا فكرة استخدام غرف المراقبة في البداية لأن اختبار VFSS للبشر طوعي وغير مقيد ، وأردنا تقليد الإجراء السريري البشري عن كثب. الميزة الرئيسية لهذه التقنية على الطرق الحالية المماثلة هي أنها تثير بسرعة سلوكيات التغذية الطوعية في القوارض للسماح بإجراء اختبار سريع لجميع مراحل البلع. بشكل عام ، سيعاني الأفراد الجدد في هذه الطريقة من تحليل الفيديو لأنه يصعب تمييز الحركات الصغيرة والسريعة للبلع والفئران.

ابدأ بتجميع غرف المراقبة بعد ذلك ، قم بتجميع نظام توصيل الحقنة لتقديم محلول لربط الأوعية أثناء الاختبار. بمجرد تجميعها ، ضع غرفة المراقبة على رافعة مقصية آلية لتحديد المواقع عن بعد. تتمثل الميزة الرئيسية لطاولة الرفع المقصية التي يتم التحكم فيها عن بعد في تحسين السلامة الإشعاعية للباحثين مع الحفاظ على القوارض التي تتصرف بحرية في مجال رؤية التنظير الفلوري.

قم بإعداد الفئران عن طريق تعويدها على غرفة المراقبة وإخضاعها لفترة تنظيم المياه طوال الليل. عندما تكون جاهزا للاختبار ، أخرج الغرفة من القفص ونظفها جيدا. استخدم علامة مسح جافة لتسمية كل أنبوب تم تنظيفه قبل وضعه مرة أخرى في قفص المنزل.

بعد ذلك ، قم بإعداد محلول iohexol بنكهة الشوكولاتة لإعداد بيئة التنظير الفلوري. استخدم غرفة مراقبة احتياطية ووعاء ربط لتحديد الارتفاع والموضع الأمثل داخل شعاع المنظار الفلوري الذي يسمح بتصور الشرب في المستوى الجانبي. اضبط معدل إطارات التنظير الفلوري على 30 إطارا في الثانية.

يمكن استخدام معدلات إطارات أعلى إذا كانت متوفرة. تأكد من وضع علامة معايرة الدبال الإشعاعي بشكل مناسب على كاميرا المنظار الفلوري بحيث تكون مرئية على شاشة العرض أثناء الاختبار بأكمله. هذه الخطوة ضرورية للسماح بمعايرة قياسات الطول لتقليل الضغط الناتج عن المناولة.

راقب القفص حتى يدخل الفأر بحرية إلى غرفة المراقبة. بمجرد الدخول ، ارفع الغرفة من القفص وقم بتوصيل غطاء الطرف الثاني برفق. من خلال الاختبار المتكرر ، يمكن إقناع الفئران بسهولة بدخول الغرفة عندما يتم وضعها أمامها داخل القفص ، أو عند تعليقها بواسطة الذيل فوق فتحة الغرفة.

ضع غرفة المراقبة داخل جهاز التنظير الفلوري لبدء اختبار VFSS في المستوى الجانبي. بعد ذلك ، استخدم نظام توصيل الحقنة لملء وعاء الوتد بمحلول iohexol بنكهة الشوكولاتة. ابدأ تسجيل التنظير الفلوري للفيديو.

عندما يبدأ الفأر في الشرب أثناء الاختبار ، استخدم طاولة الرفع التي يتم التحكم فيها عن بعد لضبط موضع غرفة المراقبة بحيث تكون آلية البلع مرئية في مجال الرؤية. أوقف التسجيل مؤقتا في كل مرة يبتعد فيها الماوس عن وعاء الوتد لتقليل مدة التعرض للإشعاع. استأنف التسجيل عندما يعود الماوس إلى وعاء الوتد ، وأعد ملء وعاء الوتد حسب الحاجة.

الهدف هو تسجيل عدة نوبات طويلة من الشرب المستمر ، وهو أمر نموذجي لمعظم الفئران. خلال أول دقيقتين من الاختبار ، توقف عن الاختبار إذا لم يشرب الفأر في غضون خمس دقائق ، وأعد الفئران غير المتوافقة إلى القفص المنزلي لإعادة الاختبار في وقت لاحق في نفس اليوم. لا تتجاوز تنظيم المياه لمدة 24 ساعة.

عند اختبار عدة فئران من نفس القفص المنزلي. نظف وعاء الوتد والأنبوب بمنشفة ورقية جافة بين الفئران. قم بقص طرف أنبوب البولي إيثيلين حسب الحاجة.

إذا تم مضغها أثناء الاختبار ، فقم بتنظيف غرفة المراقبة حسب الحاجة لإزالة أي إيوهكسول متنااثر على جدران الغرفة. شطف الغرفة بماء الصنبور وجففها بمنشفة ورقية. استخدم برنامجا لتحرير الفيديو يسمح بتحليل كل إطار لتسجيلات التنظير الفلوري للفيديو.

لتحديد معلمات الابتلاع ذات الأهمية ، يجب على اثنين على الأقل من المراجعين المدربين تحليل كل مقطع فيديو بطريقة عمياء. يشاهد المراجع الأساسي كل مقطع فيديو لتحديد وتحليل ثلاث إلى خمس نوبات شرب طويلة. يعتمد هذا المعيار على دراسات الابتلاع غير الشعاعية المنشورة التي تظهر أن هذه المعلمة كافية للتحليل الإحصائي.

ثم يقوم المراجع الثانوي بتحليل المقاييس الثلاثة إلى الخمسة لكل معلمة ابتلاع لكل فأر والتي تم تحديدها وتحليلها في البداية من قبل المراجع الأساسي. ثم يتم تحديد تناقضات المراجعين لكل فأرة وإعادة تحليلها حتى يتم التوصل إلى إجماع بنسبة 100٪. ثم يتم حساب متوسط القيم غير المتنازع عليها لكل معلمة ابتلاع للحصول على متوسط القيمة لكل فأر.

عند الحصول على أقل من ثلاثة مقاييس لمعلمة ابتلاع ، أدخل قيمة مفقودة في قاعدة البيانات الإحصائية لهذا المقياس. تم الحصول على هذه الأمثلة باستخدام موضع نظام التنظير الفلوري منخفض الطاقة. يسمح أحدهما بتصور الرأس بأكمله والمنطقة الصدرية القريبة.

تتركز نقطة زناد الابتلاع داخل مجال الرؤية. يسمح الموضع الثاني بالتصور من نقطة زناد السنونو إلى الوصلة المعدية المريئية. لاحظ أن البلعة تمر عبر المريء البعيد حتى عند أدنى إعداد تكبير.

يمكن رؤية الهياكل العظمية للرأس والرقبة بسهولة باستخدام نظام التنظير الفلوري منخفض الطاقة. يتم فحص الهياكل التشريحية أيضا بتكبير أعلى للسماح بالقياس الكمي للعديد من معلمات الابتلاع الإضافية. يوضح هذا الشكل النتائج الأولية التمثيلية لمعلمتين من معلمات ابتلاع VFSS ، ومعدل البلع ، ومعدل البلع بين فترات البلع كان أبطأ بكثير بالنسبة للفئران SOD مقارنة بعمر C 57.

يكن الفئران والضوابط بين فترات البلع مختلفا بشكل ملحوظ بين المجموعات. بمجرد إتقان ، يمكن إكمال التقاط الفيديو في أقل من دقيقتين لكل كتلة إذا تم إجراؤه بشكل صحيح. أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر استخدام محلول الاختبار بنكهة الشوكولاتة في غضون ساعات قليلة من التحضير لمنع التغيرات في اللزوجة والاستساغة التي يمكن أن تؤدي إلى سلوكيات التجنب.

تمهد هذه التقنية الجديدة الطريق للباحثين في مجال علم الأعصاب لاستكشاف سلوكيات التغذية والبلع الطبيعية في القوارض الصحية ونماذج الأمراض. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية إجراء اختبار VFSS بنجاح للقوارض التي تتصرف بحرية لتحديد سلوكيات التغذية النموذجية ووظيفة البلع ، لا تنس أن العمل مع معدات انبعاش الإشعاع يمكن أن يكون خطيرا للغاية ، ويجب دائما اتباع احتياطات الإشعاع للوقت والمسافة والتدريع أثناء تنفيذ هذا الإجراء.