الجلدي إزالة التعصيب الجراحي: هناك طريقة لاختبار شرط لالأعصاب في نماذج الماوس من الأمراض الجلدية

الهدف العام من هذا الإجراء هو فحص تأثير الأعصاب على الجلد الطبيعي والمرضي. ويمكن استخدام هذه الطريقة للإجابة على أسئلة جوهرية في بيولوجيا الجلد الطبيعي، مثل ما إذا كانت الأعصاب الجلدية تؤثر على التوازن الداخلي والمرض. وتكمن الميزة الرئيسية لهذه التقنية في إمكانية مقارنة عينات من الجلد السليم والجلد المنزوع الأعصاب من نفس الحيوان.

يعد العرض المرئي لهذه التقنية أمراً بالغ الأهمية، حيث يمكن أن يكون من الصعب التعرف على الأعصاب وإزالتها مع إلحاق حد أدنى من الضرر بالأنسجة المحيطة. أولاً، قم بتخدير الفأر وتحقق من وصوله إلى المستوى المناسب من التهدئة باستخدام قرصة إصبع القدم. كما يجب التأكد من أن الفأر يظهر تنفساً وضربات قلب طبيعية.

ضع الحيوان الآن على وسادة تدفئة في منطقة جراحية معقمة. وباستخدام ماكينة حلاقة كهربائية، قم بإزالة الشعر بعناية من الجانب الظهري حيث ستُؤخذ الخزعة. ثم امسح المنطقة المحلوقة باستخدام مسحات Betadyne ومسحات كحولية.

تأكد من إزالة جميع قصاصات الشعر من الموقع. والآن، قم بتحديد موقع الخزعة باستخدام قلم تحديد أسود. وللحصول على مقاطع طولية لبصيلات الشعر، يجب أن تمتد الحافة الأطول للخزعة في اتجاه من الأمام إلى الخلف بموازاة الخط الناصف الظهري.

باستخدام المشرط، قم بإجراء استئصال كامل السماكة دون إتلاف اللفافة العضلية الكامنة. وعادةً ما يكون النزيف في حدوده الدنيا. يجب أن تتضمن عينة الخزعة البشرة، والأدمة، والدهون تحت الجلد، والصفاق العضلي (panniculus carnosus).

قم بفرد عينة الجلد المستأصلة على منشفة ورقية جافة، بحيث يكون جانب الأدمة للأسفل. قم بقص المنشفة الورقية الزائدة، واحفظ العينة في محلول TBS بارد لمدة تصل إلى ساعة واحدة إذا لزم جمع عينات أخرى. وبالعودة إلى الفأر، قم بخياطة موقع الخزعة باستخدام خيوط نايلون 60 على مسافة حوالي ثلاثة مليمترات بين كل غرزة وأخرى.

بعد ذلك، راقب الفأر في قفص التعافي حتى يستعيد وعيه. استخدم المسكنات وفقاً لبروتوكولات رعاية الحيوان المؤسسية المعتمدة، واتبع إرشاداتها إذا بدا على الفأر ظهور علامات الضيق. قم بإزالة الغرز الجراحية في غضون سبعة إلى 10 أيام من الجراحة.

باشر بمعالجة الخزعات من أجل الفحص النسيجي أو الصبغ الشامل. قم بتخدير الحيوان، وحلق كامل الجلد الظهري، ونظف المنطقة بطريقة مشابهة لإجراء الخزعة. الآن قم بعمل شق باستخدام مشرط معقم على طول الخط الناصف الظهري من قاعدة الرقبة إلى ما يقرب من نصف سنتيمتر فوق الذيل.

باستخدام ملقط غير مدبب ومعقم، قم بإزاحة الجلد برفق من الجانب الأيسر بعيداً عن الخاصرة لرؤية الأنسجة الكامنة من الوسائد الدهنية الكتفية بالقرب من الرقبة وصولاً إلى المنطقة التي تعلو الطرف الخلفي مباشرة. حدد الآن العصب الجلدي الظهري تحت مجهر تشريحي ضوئي. تظهر هذه الأعصاب كخيوط بيضاء تمتد ذيلياً عبر اللفافة الشفافة لجدار الجذع قبل أن تنحني بشكل حاد وتدخل في النسيج الضام الرخو الموجود تحت الجلد.

بعد ذلك، وباستخدام ملقط دقيق للغاية، قم بإزالة العصب من الجانب الأيسر للحيوان حصرياً، والموجود في المواقع التشريحية من T3 إلى T12، وذلك عن طريق سحبها من حيث تنثني قطاعاتها عند جدار الجذع وصولاً إلى مواقع دخولها في الجلد. وجه الملقط رأسياً وأمسك الأعصاب على بعد حوالي نصف سنتيمتر أسفل مواقع انثنائها. وبمجرد الإمساك بها، اسحب للأعلى لتمديد الأعصاب وفصلها عن الأنسجة المحيطة لإزالتها.

تجنب إتلاف الأوعية الدموية المجاورة. احرص على إبقاء الأنسجة رطبة طوال فترة الإجراء عن طريق وضع قطرات من محلول ملحي 0.9% بشكل دوري. استمر في إزالة جميع الأعصاب الممتدة من جدار الجذع إلى الجلد، ولكن لا تعبث بالأعصاب الموجودة داخل اللفافة الكثيفة لجدار الجذع.

بعد ذلك، قم بإزالة أي أعصاب من سديلة الجلد المكشوفة. تتكون هذه الألياف من الفروع الطرفية للعصب الجلدي الظهري، وتظهر كخيوط بيضاء متفرعة موزعة بشكل متفرق داخل النسيج الضام على الجانب الأدمي من سديلة الجلد. لإزالة هذه الفروع الدقيقة، ضع الملقط بشكل موازٍ تقريبًا للسطح الأدمي، ثم أمسك العصب واسحبه للأعلى.

قم بإزالة جميع الأعصاب المرئية بهذه الطريقة. تجنب ثقب الأوعية الدموية والجلد. ومن المهم خلال هذه الخطوة تجنب تمزيق الأوعية الدموية المجاورة.

إذا وجدت عصباً بجوار وعاء دموي، فاستمر في تتبعه حتى تصل إلى منطقة لا يوجد بها وعاء دموي مجاور، ثم قم بإزالته عن طريق النزع. الآن، قم بإرخاء الجلد على الجانب الأيمن من شق الخط الناصفي الظهري، ولكن لا تقم بإزالة أي أعصاب. سيعمل هذا الجزء كعينة تحكم جراحية وهمية في الجانب المقابل.

وأخيراً، قم بخياطة جرح الحيوان ومراقبته في مرحلة ما بعد الجراحة كما في السابق. لاحقاً، وللتأكد من الفقدان المستقر للأعصاب، وبعد مرور أسابيع على الجراحة، قم بوخز المنطقة المنزوعة العصب بلطف باستخدام إبرة تحت الجلد معقمة. لاحظ ما إذا كان الحيوان يستجيب، والذي يظهر عادةً على شكل ارتجاف أو تحريك الرأس.

إذا كانت منطقة الجلد قد فقدت التعصيب بشكل مستقر، فسوف يظهر الحيوان استجابة ضئيلة أو معدومة. قم بجمع خزعات جلدية من منطقة عدم الاستجابة ومن الجانب المقابل الذي خضع لعملية وهمية للحصول على عينات تجريبية وضابطة متطابقة. ومن المهم أخذ عدة مقاطع نسيجية من الخزعات لتحديد الاختلافات المحتملة في وفرة أو مورفولوجيا القباب اللمسية بين العينات الوهمية والعينات المفقودة التعصيب.

تسمح سلالة فئران glebe one cree ERT2 باستهداف إعادة التركيب الجيني المستحث بالتاموكسيفين في مناطق الجلد التي تظهر نشاطًا عاليًا لمسار hedgehog، مثل ظهارة القبة اللمسية. وقد تم تهجين هذه الفئران مع فئران abolaxi reporter لتصوير ظهارة القبة اللمسية. وتعد العقد ضرورية للحفاظ على كل من القباب اللمسية الطبيعية وخلايا ميركل المرتبطة بها.

يتم إثبات ذلك تجريبياً من خلال الفقدان التدريجي للمورفولوجيا الطبيعية لقبة اللمس بالإضافة إلى فقدان الخلايا المودعة للكيراتين ثمانية بعد بتر الأعصاب. كما تعتبر الأعصاب حاسمة في تعزيز إشارات hedgehog في قبة اللمس، وهو ما يتم رصده من خلال تعبيرات Glebe one cree ERE2، وصبغ home-mount beta collective sided من كل من الجلد السليم والجلد الذي بترت أعصابه. بعد مشاهدة هذا الفيديو، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية الاستئصال الجراحي للأعصاب الجلدية الظهرية لاختبار ما إذا كانت هذه الأعصاب تشارك في وظيفة الجلد الطبيعية أو إذا كانت تنظم المرض.

بمجرد إتقان هذه التقنية، يمكن تنفيذها بشكل روتيني وموثوق مع إلحاق الحد الأدنى من الإجهاد بالحيوان. وبعد هذا الإجراء، يمكن استخدام طرق مثل التلوين الفلوري للأحماض الأمينية للتأكد مما إذا كانت الأعصاب قد استؤصلت تمامًا من الجلد، وما إذا كان التعبير الجيني قد تأثر.