تطوير نموذج متوجا اللب مباشرة لتقييم اللب الجروح وتشكيل إصلاحي العاج في الفئران

الهدف العام من هذا البروتوكول هو تقديم إجراء تغطية اللب المباشر في الفئران. يمكن أن تساعدك هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في بيولوجيا اللب ، مثل كيفية شفاء اللب ، أو كيف يتشكل العاج التعويضي ، عند وضع مواد تغطية اللب المحاصرة على اللب المكشوف. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أن إجراء تغطية اللب المباشر الفعلي الذي يتم إجراؤه في البشر يمكن أيضا إجراؤه في الفئران بنفس الطريقة تماما.

تمتد الآثار المترتبة على هذه التقنية نحو تحسين خصائص المواد لإنقاذ الأسنان التي محكوم عليها بخلاف ذلك أن تكون علاجات أكثر توغلا ، مثل علاج قناة الجذر. بعد تخدير الماوس بشكل صحيح لهذا الإجراء ، ضع حامل الفم في فمه ، وقم بتأمين الطرف الآخر على الطاولة بحيث يكون الرأس متجها لأعلى. باستخدام إضاءة جيدة ومجسم ، راقب أول ضرس الفك العلوي.

بعد ذلك ، باستخدام البر ربع دائري في قبضة عالية السرعة بسرعة 200 ، 000 دورة في الدقيقة ، قم بإزالة المنطقة المركزية من مينا السن حتى يصبح اللب مرئيا من خلال العاج الشفاف. احرص على عدم اختراق اللب. بعد ذلك ، باستخدام لا.

15 ملف K اللبية ، مثقب من خلال العاج وفضح اللب. لا تدفع أي حطام في اللب. يمكن تجنب ذلك عن طريق تدوير ملف K كل ثلاثة أشهر ، ثم سحب ملف K. الآن ، قم بإعداد MTA ، وباستخدام المستكشف ، قم بتسليم MTA ، ثم قم بتعبئتها في المنطقة المكشوفة باستخدام الجانب الخلفي من نقطة الورق والنقر اللطيف.

بعد ذلك ، باستخدام حقنة محملة بحفر حمض الفوسفوريك بنسبة 35٪ ، قم بتغطية السن بالحفر ، وتجنب أنسجة اللثة ، واترك النقش يعمل لمدة 15 ثانية. بعد 15 ثانية ، امتصاص النقش من السن ، واستخدم قضيب قطني مبلل بالماء لمسح أي حفر متبقي. امتص وامسح حتى تتم إزالة كل الثقب.

اتبع ذلك بوضع المواد اللاصقة للأسنان باستخدام الجانب الخلفي من نقطة الورق. اجعل الطبقة اللاصقة رقيقة عن طريق نفخها بالهواء المضغوط لبضع ثوان. ثم عالج المادة اللاصقة لمدة 30 ثانية بالضوء المناسب.

الآن ، ضع كميات صغيرة من المركب على السن باستخدام طرف المستكشف لتدفق المركب إلى أخاديد الأسنان. بمجرد وضعه ، عالج المركب لمدة 30 ثانية. بعد القتل الرحيم للفأر وإزالة الفك العلوي بالكامل ، ضع الفك في 4٪ بارافورمالدهيد في PBS عند درجة الحموضة 7.4.

احتفظ بالأنسجة عند 4 درجات مئوية طوال الليل ، وفي صباح اليوم التالي ، انقلها إلى 70٪ من الإيثانول للتخزين حتى يمكن معالجتها. لإجراء فحص دقيق بالأشعة المقطعية للفك العلوي ، قم أولا بتثبيته في شاش مبلل بنسبة 70٪ من الإيثانول ، ثم قم بتعبئته في أنبوب زراعة الخلايا سعة 15 ملليلترا. ثم قم بتركيب الأنبوب على مرحلة المسح بالتصوير المقطعي المحوسب الصغير.

بعد ذلك ، اضبط مصدر الأشعة السينية لتوصيل تيار 145 ميكروأمبير مع 55 كيلو فولت ذروة لمدة 200 مللي ثانية. باستخدام مرشح ألومنيوم 0.5 ملم ، احصل على صور بدقة 20 ميكرون. بعد اكتمال عمليات المسح ، ابدأ في إزالة الكلس من الفك العلوي باستخدام 5٪ EDTA و 4٪ سكروز في PBS ، عند درجة حموضة 7.4.

دع رد الفعل هذا يستمر لمدة أسبوعين عند 4 درجات مئوية. بعد تضمين الفك العلوي ، اصنع شرائح بسمك خمس ميكرون. عادة ما تتزامن مناطق تغطية اللب مع الجذر الحنكي البعيد ، والذي يمكن استخدامه كمعلم.

تحديد مجال الاهتمام الدقيق من خلال فحص الأنسجة تحت المجهر الضوئي ، ومقارنة النتائج بفحوصات التصوير المقطعي المحوسب الدقيقة. بالنسبة لتلوين H& E ، قم بإزالة البارافين ، وأعد ترطيب الشرائح بحمامين في الزيلين لبضع دقائق لكل منهما. ثم مررهم من خلال سلسلة من الإيثانول المخفف متسلسلا.

يجب تطبيق كل حمام لمدة دقيقة واحدة فقط. اتبع الجفاف بالشطف. ثم ضع محلول الهيموتوكسيلين لمدة دقيقتين ونصف.

قم بإزالة الصبغة بالشطف ، ثم ضع الشرائح في 95٪ من الإيثانول لمدة دقيقة واحدة. بعد ذلك ، قم بتلطيخ الشرائح بمحلول اليوزين لمدة دقيقة واحدة ، ثم اشطفها. عكس خطوات الترطيب لتجفيف الأنسجة الملطخة ، بدءا من الإيثانول.

ثم عالجهم بالزيلين. يمكن بعد ذلك تركيب الشرائح وتصويرها. باستخدام الإجراءات الموصوفة ، تم إجراء تغطية اللب على الفئران البالغة من العمر 8 أسابيع.

بعد ستة أسابيع ، تم حصاد الفك العلوي وفحصه. من الغريب أن تلطيخ H & E كشف عن تكوين العاج في جميع أنحاء حجرة اللب وقنوات الجذر. نسبيا ، لم يظهر الضرس غير المغطى نفس تكوين العاج.

في الضرس المغطى ، كانت هناك خصائص لكل من التكوين الشبيه بالعاج والشبيه بالعظام ، حيث تم العثور على كل من الأنابيب العاجية والخلايا العظمية في العاج التعويضي ، مما يشير إلى أن اللب المصاب قد يتم تمعدنه بواسطة كل من بانيات السنية المقيمة وبانيات العظم المهاجرة. أكد استخدام تلطيخ DMP1 الكيميائي المناعي زيادة أنشطة الخلايا المكونة للعاج التعويضي. تماما مثل الممارسات السريرية الحقيقية للأسنان ، فإن وجود مساعد مفيد للغاية.

على سبيل المثال ، باستخدام مساعد ، يمكن القيام بهذه التقنية في عشر دقائق فقط ، بمجرد إتقانها. الأهم من ذلك ، عندما تعريض اللب ، تذكر استخدام endofile ، وليس البر وعندما تسلم MTA ، كن حذرا.

لا تنس أن العمل مع مثبتات مثل بارافورمالدهايد يمكن أن يكون خطيرا للغاية. يجب دائما اتخاذ الاحتياطات مثل ارتداء معدات الحماية الشخصية.