شكلي وطريقة التحليل الخلوي للقمة الفك السفلي مورين

الهدف العام من هذه التجربة هو مراقبة تأثيرات التحميل الانضغاطي في غضروف اللقمة الفكي السفلي للفئران باستخدام قياسات القياس المورفومتري في الصور الشعاعية والتحليل النسيجي. يمكن أن تساعد هذه المقاييس في الإجابة على الأسئلة الرئيسية المتعلقة بالتغيرات الهيكلية والخلوية داخل اللقمة السفلية للقوارض. الميزة الرئيسية للتقنية الموضحة هنا هي أنه يمكن استخدامها لتحليل الصغيرة الأخرى المولودة أو المشاركة.

بالنسبة لهذا البروتوكول ، قم بفك فك فك فأر معزول وتشريح جاهز للاستخدام. على طبق بتري ، انقل الفك السفلي إلى نظام خزانة الأشعة السينية. بعد ذلك ، التقط الصور الشعاعية عند 26 كيلو فولت لمدة خمس ثوان.

الآن ، افتح الصور في برنامج التحليل لإجراء قياسات مورفومترية. أولا ، استخدم زر الوحدة لإعداد شريط المقياس. بعد ذلك ، حدد ست نقاط تشريحية باستخدام نمط العلامة 2.

أولا ، حدد معظم النقاط الخلفية لللقمة الفك السفلي كنقطة واحدة. بعد ذلك ، حدد العملية المشرقة للنقطة الثانية. ثم حدد أعمق نقطة عند الشق السيني للنقطة الثالثة.

بعد ذلك ، حدد أعمق نقطة في تقعر راموس الفك السفلي ، النقطة الرابعة ، ثم حدد النقطة الأمامية للسطح المفصلي لللقمة ، النقطة الخامسة. الآن ، حدد النقطة الخلفية للسطح المفصلي اللقمة كنقطة ستة واستمر في أخذ قياسات الطول باستخدام أداة الطول. بعد ذلك ، استخدم أداة الخط العمودي من النقطتين من ثلاثة إلى أربعة لقياس طول رأس اللقمة ، وهو طول العمودي ، من النقطة الأولى إلى الخط الفاصل بين النقطتين الثالثة والرابعة.

ثم قم بقياس طول الفك السفلي بين النقطتين الأولى والثانية. أخيرا ، قم بقياس عرض رأس اللقمة ، والذي يتراوح بين النقطتين الخامسة والسادسة. لحفظ البيانات ، انسخ قائمة القياس على الجانب الأيمن من الشاشة.

قبل تضمين الفك السفلي الثابت ، ولكن ليس منزوع الكلس ، انقعه طوال الليل في 30 في المائة من السكروز في PBS. في اليوم التالي ، قم بتشريح أي أنسجة رخوة زائدة وقطع اللقمة بعناية من الفك السفلي. الآن ، ضع العينات في قوالب بلاستيكية ، مع وضع السطح الإنسي لللقمة مقابل قاعدة القالب والعينة الموازية لقاع القالب.

ثم اغمرها في الراتنج المدمج وقم بتبريد الراتنج بقطعة من الثلج الجاف. بعد ذلك ، قم بإزالة القوالب بمزيد من راتنج التضمين. انقلها إلى اثنين من ميثيل البيوتان البارد ، المبرد بواسطة الفريزر أو بالثلج الجاف.

بمجرد أن تبرد ، قم بتخزين العينات عند سالب 20 درجة مئوية أو سالب 80 درجة مئوية للتقسيم. لتحديد تعبير Col10a1 في MCC للأقسام السهمية لللقمة ، افتح الصور النسيجية في حزمة برامج تحليل الصور وحدد مجال الاهتمام باستخدام أداة lasso. في هذه الحالة، يتم تحديد منطقة مركز عملائي.

لاحظ عدد وحدات البكسل في المنطقة ، والذي يتم الإبلاغ عنه في مربع الرسم البياني. بعد ذلك ، حدد ملف وحدات البكسل الحمراء Col10a1 عن طريق ضبط نطاق الألوان. استخدم أداة قطارة العين لتحديد بكسل أحمر من الصورة وانقر فوق موافق. بعد ذلك ، قم بتسجيل عدد وحدات البكسل الحمراء في المنطقة ، كما هو موضح في مربع الرسم البياني.

جزء وحدات البكسل الحمراء في المنطقة مقدار تعبير Col10a1. الآن ، باستخدام نفس التقنية الأساسية ، حدد نشاط TRAP في MCC والعظام تحت الغضروف. أولا ، حدد الغضروف في مناطق العظام تحت الغضروف كمناطق لتحليل وملاحظة إجمالي وحدات البكسل.

ثم حدد وحدات البكسل الصفراء التي تم إنشاؤها بواسطة ركيزة ELF97. لاحظ عدد وحدات البكسل الموجبة واحسب جزء وحدات البكسل الموجبة TRAP. الآن ، حدد كمية الخلايا الإيجابية EDU الملطخة باللون الأزرق بواسطة DEPI.

مرة أخرى ، حدد منطقة الاهتمام ثم حدد وحدات البكسل الزرقاء بداخلها. استخدم هذه الطريقة أيضا لتحديد عدد وحدات البكسل الموجبة EDU في نفس المنطقة. أظهرت القياسات المورفومترية للفئران ، التي تعرضت للتحميل الانضغاطي المفصل الفكي الصدغي ، أن التحميل زاد بشكل كبير من طول رأس الفك السفلي واللقمة

ومع ذلك ، لم ينتج عن التحميل تغيير كبير في عرض اللقمة كشف القياس الكمي لتوزيع الكولاجين عن زيادة كبيرة في تعبير Col10a1 و MCC لكونديلات المحملة. من ناحية أخرى ، لم يكن تعبير Col2a1 مختلفا كثيرا عن التحكم.

زاد نشاط TRAP في المنطقة تحت الغضروف من اللقمة والفئران المحملة كما فعل الانتشار الفرعي. يشير تلطيخ EDU إلى عدد الخلايا التكاثرية. تم تحديد توزيع البروتيوغليكان في MCC من خلال تقييم منطقة Toluidine الملطخة باللون الأزرق وخريطة المسافة.

كانت هناك زيادة كبيرة في رسم خرائط المسافة في MCC من اللقمة للمجموعة المحملة. ومع ذلك ، لم تكن المنطقة الملطخة بالبروتيوغليكان مختلفة إحصائيا بين المجموعات. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية تحليل التغيرات الخلوية والهيكلية في اللقمة الفك السفلي للقوارض.