استكشاف إمكانات ورقة الخلايا الجذعية الوسيطة على تطوير سرطانه الخلية الكبدية في فيفو

مرحبا ، أنا الدكتور علاء الشريدة من مركز الملك عبد الله العالمي للبحوث الطبية في قسم الخلايا الجذعية والطب التجديدي. سنعرض اليوم تأثير الخلايا الجذعية الوسيطة على تطور سرطان الخلايا الكبدية على نموذج الفئران باستخدام تقنية صفائح الخلايا. مرحبا، أنا عبد الله المبارك.

أعمل في الجراحة التجريبية ومختبر بجامعة الملك سعود. نستخدم الفئران العاري لتجنب أي رفض بعد زرع ورقة الخلية. يوضح هذا الرسم البياني إجراء زرع صفائح الخلايا على الفئران العارية.

سيتم استخدام الفئران العارية التي تتراوح أعمارها بين ثمانية و 12 أسبوعا في هذه الدراسة. أولا ، قم بتقطيع الفئران وقم بعمل قطع من سبعة إلى عشرة سنتيمترات بين الجلد والعضلات الأساسية باستخدام مشرط لفضح الكبد. لنقل ورقة الخلية ، استخدم غشاء معقم.

ضع الغشاء فوق ورقة الخلية لتجميعه. ثم ضع ورقة الخلية مع الغشاء فوق فص واحد من الكبد. بناء ورقة الخلية.

قبل بذر الخلايا ، قم بتغطية أطباق ثقافة UpCell المستجيبة لدرجة الحرارة بطول 3.5 سم باستخدام FBS غير المخفف. يدعم طلاء الأطباق باستخدام FBS نمو الخلايا في طبقة الغشاء ويمنع تدهور الخلايا. تأكد من تغطية كل سطح الأطباق.

احتضان الأطباق لمدة 24 ساعة عند 37 درجة مئوية في جو مرطب يحتوي على 5٪ ثاني أكسيد الكربون و 95٪ هواء. في اليوم التالي ، قم بإزالة FBS الزائد واترك الأطباق تجف في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة واحدة على الأقل. قم بزرع ما لا يقل عن مليون خلية سرطانية من HepG2 بمفردها أو مزروعة مشتركة مع الخلايا الجذعية الوسيطة في وسط زراعة DMEM.

استكمل الوسيط ب 10٪ FBS و 1٪ بنسلين - ستربتومايسين. النسبة المستخدمة للخلايا السرطانية إلى الخلايا الجذعية الوسيطة في هذه الدراسة هي 4: 1. بعد إضافة الخلايا هز الأطباق برفق.

احتضان الخلايا عند 37 درجة مئوية في جو مرطب يحتوي على 5٪ ثاني أكسيد الكربون و 95٪ هواء. انفصال ورقة الخلية. عند التقاء الخلايا بنسبة 100٪ ، أخرج الأطباق من حاضنة 37 درجة مئوية.

الآن ، احتضان ورقة الخلايا السرطانية HepG2 لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة ، بينما احتضان HepG2 المزروع بشكل مشترك مع الخلايا الجذعية الوسيطة لمدة 30 إلى 40 دقيقة عند 20 درجة مئوية في جو مرطب يحتوي على 5٪ ثاني أكسيد الكربون عند 95٪ هواء. خلال وقت الحضانة لانفصال ورقة الخلية ، ابدأ إجراء. تمت الموافقة على جميع الدراسات على من قبل اللجنة الأخلاقية بجامعة الملك سعود.

إجراء العملية الجراحية. تحقق من عمق التخدير عن طريق اختبار منعكس سحب الدواسة. تطهير منطقة الجراحة باليود.

الآن ، ضع مقشرا ثانيا مع اليود. قم بتغطية بستارة معقمة لتجنب تلوث الشق. باستخدام مشرط معقم ، قم بعمل قطع بين الجلد والعضلات الأساسية ، بحجم حوالي سبعة إلى عشرة سنتيمترات لفضح الكبد.

افصل عضلة البطن عن الجلد باستخدام الحافة الخلفية المسطحة للمشرط. طعن الخط ألبا بعناية باستخدام مشرط وقم بتمديد القطع بمقص حاد. زرع صفائح الخلايا في كبد الفئران.

اضغط برفق على طبق الثقافة فوق المقعد لفصل الورقة عن سطحها. افصل ورقة الخلية عن سطح الطبق عن طريق كشط حواف الصفيحة في نصف دائرة. الآن ، قم بإزالة كل وسط الثقافة برفق من الطبق.

تأكد من أن الورقة سليمة دون أي ضرر ، وإلا فلا يمكن استخدامها. قم بإعداد غشاء معقم لحصاد ونقل ورقة الخلية. لذلك أولا ، انقع الغشاء بالمحلول الملحي العادي ، ثم قم بإزالة المحلول الملحي الزائد برعم قطني معقم.

ضع الغشاء المبلل فوق ورقة الخلية ، مع تجنب أي فقاعات هواء بين الغشاء وورقة الخلية. أضف بضع قطرات من المحلول الملحي العادي فوق الغشاء وورقة الخلية لجمع المادة. اترك الغشاء لبضع ثوان للتأكد من أن ورقة الخلية متصلة بشكل صحيح بالغشاء ، ثم اجمعها.

الآن ، جهز الكبد للزراعة. تأكد من جفاف سطح الكبد. ضع الغشاء مع ورقة الخلية فوق فص واحد من كبد الفئران.

أضف بضع قطرات من المحلول الملحي المعقم لفصل ورقة الخلية عن الغشاء. انتظر لمدة خمس دقائق قبل إزالة الغشاء بعناية. يمكن رؤية ورقة الخلية متصلة بالكبد في هذا الفيديو.

أخيرا ، أغلق العضلات الأساسية والشقوق الجلدية بخمسة خياطة من النايلون. بعد إغلاق الشق ، قم بتطهير منطقة الجراحة بالبيتادين. الوقت من التخدير إلى الرأس متغير ، ولكنه عادة ما يكون في مكان ما بين خمس و 20 دقيقة النتائج.

يوضح هذا الشكل الورم المتطور في كبد الفئران بعد شهر واحد من زرع صفائح خلايا HepG2. هنا ، تم تطوير الورم بعد زرع الخلايا السرطانية HepG2 المصنوعة من الطبقة الخلوية والخلايا الجذعية الوسيطة لنخاع العظم. في حين يظهر هذا ، أصغر ورم متطور في كبد الفئران بعد زرع ورقة خلوية ملفقة من خلايا سرطان HepG2 والخلايا الجذعية الوسيطة للوتر السري ، يوضح هذا الشكل تلطيخ H و E لكبد الفئران بعد شهر واحد من زرع ورقة الخلايا.

حيث يمثل A خلايا كبد الفئران الطبيعية ، ويظهر B خلايا كبد الفئران السرطانية. استنتاج. لذلك بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن تكون قادرا على تطوير نموذج سرطان الخلايا الكبدية على الفئران العارية باستخدام تقنية ورقة الخلية. شكرا لك على المشاهدة.