دهن بلير التجارب مع بليرس فقاعة الاتصال للتصحيح--كلامبيرس

طريقة الاتصال فقاعة Bilayer هو أسلوب بديل لBilayers الدهون التقليدية. وهذه الطريقة تسمح الاهتزاز أكثر تنوعا من خلال الغشاء. تدمج طريقة مصرف البحرين المركزي فوائد Planar Lipid Bilayer وطريقة المشبك التصحيح.

كما تقنية ثنائي الطبقات الدهون يمكن تشكيل مصرف البحرين المركزي مع تكوين الدهون التعسفي. لقد قمنا بتطوير مصرف البحرين المركزي لتسجيلات قناة واحدة الحالية مع إشارة عالية إلى نسبة الضوضاء. هذه الطريقة تسمح أصناف من الاهتزازات الأغشية ويوفر منصة نوع واسعة لواجهة غشاء القناة.

وقد شهدت الجميع تهب فقاعة الصابون. يتم اتخاذ مناورات مماثلة لتشكيل مصرف البحرين المركزي عن طريق ضبط يدويا الضغط المطبق بدلا من تهب عن طريق الفم. ممارسة والتمتع مصرف البحرين المركزي.

إلى أن يكون هذا الإجراء تفريق فوسفوليبيدات في الكلوروفورم في التركيز المطلوب في قارورة قاع مستديرة. ضع محلول فوسفوليبيد على مبخّر دوار متصل باسطوانة غاز النيتروجين. قم بتدوير القارورة تحت تدفق النيتروجين في درجة حرارة الغرفة حتى يظهر فيلم فوسفوليبيد رفيع.

في المكان التالي قارورة مفتوحة في مجففات متصلة بمضخة فراغ. باستخدام مضخة فراغ التعرق داخل جهاز الزهية لعدة ساعات لإزالة الكلوروفورم تماما. في وقت لاحق إضافة حجم مناسب من محلول المنحل بالكهرباء إلى القارورة وتعليق فوسفوليبيد للحصول على اثنين ملليغرامة في المليلتر تعليق فوسفوليبيد.

Sonciate تعليق لمدة 20 إلى 30 ثانية باستخدام sonicator حمام للحصول على تعليق حايصلة متعددة الطبقات. لإعداد البروتينات التي تحتوي على بروتينات قناة أيون، إضافة محلول البروتين إلى تعليق vesicle متعدد الطبقات. و sonicate لعدة ثوان باستخدام صوتناتور الحمام.

لإعداد ماصات زجاجية كبيرة تتحمل، وضع الشعيرية الزجاجية في سحب ماصة وتلفيق micropipette مع طرف مدبب غرامة من خلال سحب خطوتين. ثم تعيين micropipette على اقامة صغيرة والاتصال غيض من micropipette إلى خيوط البلاتين في جزء مدبب مع قطر من 30 إلى 50 ميكرومتر. تسخين خيوط لفترة وجيزة وعلى الفور إيقاف تشغيله.

استخدام الماء المقطر والإيثانول تنظيف سطح الشريحة الزجاجية مع بئر ضحلة. تطبيق المقبل كاشف السيليكون على الشريحة الزجاجية والسماح للمكشف الجافة تماما في الهواء. ثم ضع الشريحة الزجاجية على خشبة المجهر المقلوب.

إضافة 100 ميكرولترات من الهكاديكا في البئر الضحلة من الشريحة الزجاجية سيليكونيد. باستخدام حقنة الدرملولين ملء محلول المنحل بالكهرباء تصل إلى نصف طول micropipette. المقبل تعيين micropipette على حامل micropipette مع ميناء الضغط، مما يسمح للفضة / كلوريد الفضة الأسلاك القطب لنقع في محلول إلتروليت ماص.

ربط واحدة من أصحاب micropipette إلى المرحلة الرأسية من مضخم المشبك التصحيح والآخر إلى الأرض الكهربائية. في وقت لاحق ربط ناخن صغير إلى ميناء الضغط من حامل micropipette. ضبط micropipette إلى موقف مناسب فوق مرحلة المجهر المقلوب باستخدام ميكرو مانايبولاتور.

لضبط إمكانات إزاحة القطب الكهربائي، ضع ميكرولتر واحد من نفس الحل المنحل بالكهرباء المستخدم لملء ميكروسيبيت على السطح المسطح حول البئر الضحلة للشريحة الزجاجية لإنشاء قبة المنحل بالكهرباء. نقع غيض من كل micropipettes في قبة المنحل بالكهرباء. بعد ذلك ضبط القطب إزاحة المحتملة من مضخم المشبك التصحيح.

لرسم حل liposome من طرف، إضافة ميكرولتر واحد من محلول liposome على سطح مستو حول البئر الضحلة من الزجاج الشريحة. التالي في مكان غيض من micropipette في ليبوسومات تحتوي على قبة. التعرق liposome التي تحتوي على حل باستخدام ناخن microinctor.

كرر الإجراء لميركوبيت الأخرى لالتعرق قناة ليبوسومات إعادة تشكيلها. الآن ضع من micropipette في hexadecane في البئر الضحلة. ضربة فقاعة المياه ببطء عن طريق زيادة الضغط حتى تصل الفقاعة إلى الحجم المطلوب والحفاظ على نفس الضغط بعد ذلك.

تجاهل الفقاعة بتمرير الطرف عبر واجهة الزيت والهواء إذا كان من الصعب الحفاظ على حجم الفقاعة مستقرًا. كرر الإجراءات حتى يتم تشكيل اثنين من فقاعات مستقرة. إقامة اتصال بين الفقاعتين.

صقل الضغط للحفاظ على حجم الفقاعة، لأن الحجم قد يتغير تدريجيا حتى في الضغط المستمر داخل فقاعة. تعيين الغشاء المحتملة إلى القيمة المناسبة باستخدام مضخم المطالبة التصحيح وانتظر القناة الحالية لتظهر. للحصول على تكوين ثنائي الطبقات الدهون مستقرة من الضروري لتنظيف النقع.

يجب غسل الشعيرات الدموية أو الماصات الزجاجية بشكل دقيق وتجنب التلوث بجزيئات المنظفات. مرة واحدة قد شكلت مصرف البحرين المركزي جزيئات القناة إما في محلول مائي أو في liposome تم إدراجها تلقائيا في bilayer في غضون بضع إلى عشرات الدقائق. تم تأكيد عمليات إدخال القنوات من خلال الزيادة الحكيمة في السعة الحالية في ظل إمكانية الغشاء التطبيقي.

يمكن أن تتفكك طبقة ثنائية شكلتها طريقة مصرف البحرين المركزي إلى اثنين monolayers. ظهرت قناة pTB الحالية مباشرة بعد إرفاق اثنين monolayers. وأصبح التيار أكبر كما هي من الاتصال زيادة السعة من التيار تزامنت مع معالجة إرفاق فصل من مصرف البحرين المركزي.

إذا كان عدد ضربات الفقاعات يزيد من تركيز الدهون في محلول مائي يقلل ولم يتم تشكيل monolayer. ثم حاول تخفيف الضغط على قسم الدهون. مرة واحدة يتم تأسيس تشكيل مصرف البحرين المركزي وإعادة تشكيل قناة يمكنك محاولة لتغيير تكوينات من محلول مائي والغشاء عن طريق الإسراف أو حقن مواد محمّة أو محمّة.

وقد فتحت طريقة مصرف البحرين المركزي طرقاً متعددة لاستكشاف التفاعلات بين غشاء القناة.