جيل من نموذج الفئران من فشل الكبد الحاد عن طريق الجمع بين 70 ٪ استئصال الكبد الجزئي و اسيتامينوفين

يُعرَّف فشل الكبد الحاد أو ALF عموماً بأنه تطور سريع لإصابة الكبد في الكبد السليم، ويصحبه ضعف شديد في وظائفه الرئيسية. زرع الكبد العظام هو العلاج الوحيد المتاح في معظم الحالات. ولكن بسبب نقص المتبرعين بالكبد، فإن معدل الوفيات في مرضى مؤسسة آنا ليند مرتفع جداً.

لدراسة إمكانات الأساليب العلاجية البديلة وفهم أفضل لعلم الفيزيولوجيا المرضية في ALF ، يتم استخدام نماذج حيوانية للمرض. وتستند العديد من نماذج ALF على الآثار السامة الكبدية من اسيتامينوفين, رابع كلوريد الكربون, كونكانافالين A, الدهون السكريات, د-Galactosamine والثيواسيتاميد. ومع ذلك ، فإن هذه لديها العديد من أوجه القصور مثل سوء إعادة التكاثر والنكوص ، والسمية للأعضاء الحيوية الأخرى ، وضعف انعكاس أمراض الأمراض البشرية واختلاف الأنواع.

ومن ثم، هناك حاجة إلى نظام نموذجي أفضل قابل للاستنساخ ويسمح بفترة زمنية كافية لدراسة آثار التدخل العلاجي. في الدراسة الحالية، تم إنشاء نموذج ALF في الفئران من خلال الجمع بين آثار استئصال الكبد الجزئي والسمية الكبدية أسيتامينوفين. تتم إزالة الفص الجانبي المتوسط والمسار للكبد إلى مكوس 70٪ كتلة الكبد, وعلاوة على ذلك, أعطيت اسيتامينوفين للتسبب ALF.

وقد اتسم تطوير ALF في النموذج من خلال التحليل الكيميائي الحيوي والهوسطية وقد تم تأكيد عكس تلف الكبد عن طريق زرع خلايا الكبد الفئران صحية syngeneic. واستخدمت الجرذان Wistar وجود وزن الجسم في حدود 180 إلى 250 غراما في الدراسة الحالية. تصف الخطوات التالية الإجراء الجراحي لاستقراء ALF في الفئران.

يتم تخدير الحيوان عن طريق حقن خليط الكيتامين-زيلازين داخل الصفاق. يتم تأكيد التخدير الكامل عن طريق معسر إصبع القدم من الحيوان، ويتم تنفيذ إجراءات أخرى فقط عندما لا يكون هناك رد فعل دواسة. لمنع جفاف القرنية، يتم تطبيق قطرة العين التي تستند إلى السليلوز الميثيل على حد سواء على العينين.

يتم تقييد الحيوان إلى المجلس الجراحي باستخدام شريط أبيض. يتم إزالة الشعر من منطقة جراحية في البطن العلوية اليمنى باستخدام مقص كهربائي. تطهير موقع الجراحة بواسطة ثلاثة الدعك بالتناوب من 70٪ الإيثانول واليود povidone باستخدام منصات القطن تعقيم في حركة دائرية.

يتم وضع علامة على الجلد الذي سيتم قطعه فقط تحت عمودي القص على الوريدي وموازاة مع القفص الصدري. يتم وضع ورقة الستائر المعقمة التي لها فتحة حوالي ثلاثة سنتيمترات في سنتيمتر واحد على الجلد ملحوظ. يتم إجراء شق عرضية من حوالي 2-3 سم على طول خط ملحوظ مع مساعدة من مشرط.

يتم إزالة مرفق الجلد مع طبقة العضلات الكامنة في محيط المنطقة المقشورة بلطف عن طريق نصائح القطن مبللة معقمة. بعد ذلك ، يتم إجراء شق عرضي من خلال الطبقة البريتونية فقط تحت عملية xiphoid. يتم كشف الفص الأيسر للكبد عن طريق إعطاء ضغط لطيف على الصدر بمساعدة اثنين من نصائح القطن المبلل المالحة.

يتم تراجع حلقة خيط النايلون العقيمة حول فص الكبد المكشوف. يتم أخذ الحلقة بعناية إلى قاعدة الفص بمساعدة ملقط تشريح الصغرى أو براعم القطن. مع مساعدة من حامل الإبرة microsurgery والملوط الصغيرة، وتعادل طرفي الحلقة، ووضع عقدة أقرب إلى قاعدة الفص ممكن.

هذا هو لتقلص الأوعية الدموية والحد من النزيف بعد إزالة الفص الكبد. عقدتين إضافيتين مربوطتان على الجانب الآخر. يتم قطع الفص المربوط فوق العقدة فقط باستخدام مقص الجراحة الدقيقة الذي يترك جذعًا إقفاريًا.

وبالمثل، يتم رفع الفص المتوسط للكبد باستخدام نصائح القطن. التعرف على الشكل الفريد للفص المتوسط للكبد. وضع حلقة خيط النايلون على الفص، وربطة بحزم نهاياتها.

يتم ربط عقدتين إضافيتين على الجانب الآخر واستئصال الفص. بعد إزالة الفصوص ، يتم خياطة الصفاق باستخدام خياطة القطومية القابلة للامتصاص 4/0 القابلة للامتصاص مع غرز مستمرة تليها خياطة الجلد مع خياطة بسيطة متقطعة. بعد إغلاق الجلد، يتم تطبيق محلول اليود povidone حول موقع الجراحة.

تتم إزالة ورقة الستائر ويتم خلع الحيوان من لوحة الجراحة. جرعة المضادات الحيوية من 12 مليغرام cefotaxime في مل واحد من محلول الجلوكوز 5٪ تعطى داخل الصفاق إلى الحيوان لحمايته من خطر العدوى بعد الجراحة. لتخفيف الألم بعد الجراحة ، يتم إعطاء ميلوكسيكام المسكن ، عادة 1 ملغ لكل كجم من وزن الجسم تحت الجلد للحيوان ، تليها جرعة كل يوم لمدة يومين.

يتم نقل الحيوان إلى قفص يتعافى دافئ. يصبح الحيوان واعية في غضون 30 إلى 40 دقيقة ويبدأ في التحرك. يتم الاحتفاظ بالحيوان الذي يتم تشغيله في عزلة حتى تلتئم الجروح الجراحية تمامًا ، والتي قد تستغرق من ثلاثة إلى أربعة أيام.

لـ ALF، يتم حقن 750 ملليغرام لكل كيلوغرام من وزن الجسم من الأسيتامينوفين والجرعة الثانية من ميلوكسيكام داخل الرحم بعد 24 ساعة من إجراء استئصال الكبد الجزئي. يتم تكرار هذا النظام جرعة بعد 24 ساعة. بعد تحريض ALF، تم العثور على البقاء على قيد الحياة في الحيوانات إلى انخفاض حاد.

ولتوصيف تطور ALF، تم قتل الحيوانات التي تعمل بالقتل الرحيم بعد الجرعة الثانية من الأسيتامينوفين، وأجريت العديد من الدراسات الكيميائية الحيوية والهوسطية. يتم وصف النتائج في الفيديو. وتبين أن نسبة البقاء على قيد الحياة في المجموعة المستحثة من قبل مؤسسة آنا ليند قد انخفضت بشدة، ولوحظت نسبة وفيات تصل إلى 80 في المائة في غضون 24 ساعة من الجرعة الثانية من الأسيتامينوفين.

كان تلف الكبد واضحًا على المستوى المورفولوجي في المجموعة المستحثة في ALF وفقط 70٪ من مجموعة استئصال الكبد الجزئي. في حين أن المجموعة التحكم وفقط مجموعة اسيتامينوفين المعالجة كان لها مظهر صحي. تم العثور على مستويات انزيم من الأنين نقل الأمينية, الأسبارتات الأمينية transferase والفوسفاتاز القلوية لتكون مرتفعة للغاية في ALF الناجمة عن مجموعة بالمقارنة مع مجموعات أخرى.

أظهر تحليل ملف تعريف التعبير الجيني من قبل qPCR التعبير عن الجينات المشاركة في موت الخلايا المبرمجة والتهاب وتطور إصابة الكبد. كشفت هيماتوكسيلين ويوسين تلطيخ أقسام أنسجة الكبد في الغالب خلايا الكبد الطبيعية في مجموعة التحكم. في المجموعة ALF، لوحظ في الغالب معتدلة الضمور الدهنية الكلي.

تم العثور على وقت البروثرومبين والنسبة الدولية تطبيع لتكون مرتفعة في المجموعة التي تسببها ALF، مما يدل على إعاقة عملية تخثر الدم. تم العثور على نسبة البقاء على قيد الحياة لاستعادة في المجموعة المستحثة ALF بعد زرع خلايا الكبد الفئران صحية syngeneic. تم العثور على مستويات المصل من الانزيمات ألانين نقلات الأمينية, الأسبارتات الأمينية transferase والفوسفاتاز القلوية ليتم استعادة في الحيوانات التي يسببها ALF بعد زرع الخلايا.

هذه الطريقة من تحريض ALF في الفئران هو استنساخها، ويظهر عكس جيدة ويوفر نافذة زمنية مناسبة لاختبار علاجات جديدة. ومن ثم، يمكن أن يكون هذا النموذج بمثابة نموذج فعال للمرض لتقييم النُهج العلاجية المحتملة لعلاج مؤسسة آنا ليند.