نمذجة أورام العظام الأولية وورم خبيث في العظام مع زرع طعم الورم الصلب في العظام

تسمح هذه الدراسة بالمرونة في إنشاء أورام العظام الأولية أو ورم خبيث في العظام عن طريق وضع ترقيع ورم صلب في العظام. هذه التقنية هي خروج عن حقن معلقات الخلايا السرطانية في العظام. تتغلب هذه الطريقة على قيود حقن تعليق الخلايا السرطانية بصمات الرئة.

ميزة أخرى هي إنشاء نموذج أكثر اتساقا عند مقارنته برم خبيث العظام التلقائي أو بعد حقن الخلايا داخل الأوعية الدموية. استنادا إلى زرع الطعم الصلب للورم ، توجد احتمالات تتجاوز النماذج البشرية أو الفئران ، ولكن استخدام الطعوم الغريبة المشتقة من المريض والتي يمكن أن تؤدي إلى علاجات مصممة خصيصا لمرضى معينين. ينصب التركيز الأساسي على الاستخدام في أبحاث السرطان مثل البيئة الدقيقة للورم ، والورم الخبيث ، واكتشاف الأدوية ، وعلم الوراثة السرطانية ، والطب الدقيق.

المرئي هو المفتاح لإظهار الخطوات الرئيسية لإنشاء الورم تحت الجلد ، وتشريح وإنشاء طعم الورم ، والزرع الجراحي في الساق. لتحريض الورم تحت الجلد ، قم بحصاد خط الخلية محل الاهتمام باستخدام محلول مناسب لتفكك الخلايا وأعد تعليق الخلايا عند مرة إلى ضعفين في 10 إلى الخلايا الخامسة إلى تركيز 100 إلى 150 ميكرولتر من PBS المعقم. ضع الخلايا على الجليد.

نظف الجلد المكشوف بنسبة 70٪ من الإيثانول ، وقم بتحميل الخلايا في حقنة توبركولين مزودة بإبرة قياس 27. ثم حقن الخلية تحت الجلد في منطقة من الجلد المطهر لن تتأثر بحركة لوحي الكتف. استخدم الفرجار لمراقبة حجم الورم تحت الجلد الذي يغطي الصدر الظهري أو البطن ، وقياس وزن جسم أسبوعيا للتأكد من أن الورم لا يتقرح أو أن الفأر لا يفي بمعايير الإزالة المبكرة على النحو الذي تحدده اللجنة المؤسسية لرعاية واستخدامه.

عندما يصل الورم إلى 15 ملم في أي بعد ، استخدم 70٪ من الإيثانول لتعقيم الجلد واستخدم 15 مشرط لشق الجلد الذي يغطي الورم. استخدم مقصا جراحيا معقما لتشريح الورم من الأنسجة الرخوة المرفقة المحيطة بحدة ووضع الورم في بئر واحد من صفيحة من ستة آبار تحتوي على وسط نمو كامل. استخدم المشرط لفرم الورم إلى أجزاء ذات حجم مناسب ووضع الشظايا في وعاء جديد من وسط النمو الكامل المعقم في درجة حرارة الغرفة.

للحفظ بالتبريد ، قم بتجميع أجزاء متعددة في تبريد واحد في وسط نمو كامل مكمل بنسبة 20٪ مصل بقري للجنين و 10٪ ثنائي ميثيل سلفوكسيد واستخدم نظام حفظ تجاري بالتبريد عند 80 درجة مئوية تحت الصفر لتجميد الأنسجة تدريجيا قبل تخزينها على المدى الطويل في النيتروجين السائل. للحفاظ على شظايا الورم للتحليل اللاحق ولكن ليس الزرع في المستقبل ، قم بتجميد العينات عن طريق غمر النيتروجين السائل وتخزين شظايا الورم المجمدة على المدى الطويل عند 80 درجة مئوية تحت الصفر. لزرع شظايا الورم تحت الجلد ، قم أولا بإحضار شظايا الورم المعلقة إلى درجة حرارة الغرفة.

بعد ذلك ، تأكد من عدم الاستجابة لمنعكس الدواسة في الفأر المتلقي المخدر وقم بإدارة التسكين تحت الجلد. لتقليل الصدمة المحتملة للجلد ، استخدم كريم إزالة الشعر لإزالة الشعر على مفصل الركبة الأيمن والساق القريب من الطرف الخلفي المتصل. افرك الجلد المكشوف بنسبة 70٪ من الإيثانول ، متبوعا بمقشر الكلورهيكسيدين والمحلول الملحي بالتناوب.

أثناء ثني المفصل وتمديده ، تخيل الظنبوب القريب على أنه المنطقة البعيدة عن مفصل الركبة واستخدم شفرة مشرط 15 لإنشاء شق من ثلاثة إلى أربعة ملليمترات على مستوى الظنبوب القريب على الجانب الإنسي من الطرف عبر الجلد والأنسجة تحت الجلد لفضح القشرة الإنسية للظنبوب القريب. لإنشاء ثقب صغير في القشرة الإنسية للظنبوب القريب ، استخدم طرف إبرة قياس 25 لتطبيق ضغط لطيف أثناء تدوير الطرف على بعد ملليمترين تقريبا من مفصل الركبة ومسافة متساوية بين القشرة القحفية والظنبوب الذيلية. عند إنشاء الثقب ، استخدم ملقطا معقما أو إبرة قياس 27 إلى 30 لإدخال ما لا يقل عن 0.5 مكعب من شظايا الورم في التجويف النخاعي للظنبوب القريب واستخدم إبرة قياس 27 إلى 30 لمعالجة شظايا الورم في القناة النخاعي.

بعد وضع جميع الشظايا ، عارض حواف الجلد بالمواد المناسبة وأعد إلى قفصه مع المراقبة حتى الإسعاف. ثم قم بتقييم نمو ورم الظنبوبة بشكل غير جراحي عن طريق التصوير الشعاعي الرقمي الأسبوعي أو التلألؤ البيولوجي أو التصوير الفلوري ، واستخدم الفرجار لقياس الطرف في موقع الزرع. يمكن توثيق النقش الناجح بالتصوير المتقدم.

في هذا التحليل التمثيلي ، كان العيب القشري الذي تم إنشاؤه لزرع طعم الورم مرئيا في الظنبوب القريب بعد أسبوع واحد من الزرع. بحلول الأسبوع الثاني ، يمكن ملاحظة انحلال العظم المرئي وإعادة تشكيل العظام المجاورة للعيب القشري. من الأسابيع الثانية إلى الخامسة ، حدث تدمير تدريجي إضافي للعظام وتكوين عظم جديد مرتبط بنقش الورم ونموه.

يجب توخي الحذر أثناء إنشاء ثقب صغير في الظنبوب القريب. اعتمد على تدوير الطرف بضغط لطيف إلى الحد الأدنى مما يسمح لطرف الإبرة بالقيام بالعمل. بعد هذا الإجراء ، يمكن إجراء وضع طعم الورم في مواقع العظام الأخرى ، ووضع العضيات أو الخلايا السرطانية في المصفوفة خارج الخلية في عيب العظام أو التحليل الجزيئي والنسيجي بالإضافة إلى التصوير.