شراء ونزع الخلايا من اللوحات الوعائية الخنازير في مفاعل حيوي مخصص للتروية

تصف هذه الطريقة الشراء الجراحي لثلاث لوحات خنزير وعائية ونزع الخلايا اللاحقة للتروية. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الجهود المبذولة لتجديد اللوحات الخنازير باستخدام نهج إزالة الخلايا من الأنسجة وإعادة الخلوية. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي تنوعها لتحقيق إزالة الخلايا عبر مجموعة متنوعة من اللوحات الخنازير الوعائية في إعداد مفاعل حيوي بسيط للتجميع.

يمكن تطبيق التقنية الموصوفة هنا على نطاق واسع على اللوحات الوعائية الأخرى كحل محتمل لهندسة الأنسجة باستخدام اللوحات الخنازير في الجراحة الترميمية. للبدء ، قم بعمل أنبوب تدفق وتدفق عن طريق قياس حوالي 50 سم من أنابيب السيليكون المطلية بالبلاتين LS16. قم بتوصيل أحد طرفي أنبوب مضخة أصفر مكون من 3 نقاط والآخر بماصة مصلية معقمة سعة 2 ملليلتر لنقل البيرفوسات من خزانات المنظفات إلى غرفة المفاعل الحيوي.

الأوتوكلاف الغرفة والأنابيب في عبوات معقمة ملفوفة بشكل فردي. لشراء رفرف omental ، ضع خنزير يوركشاير مخدر يبلغ من العمر 12 أسبوعا في وضع ضعيف ، ثم قم بإعداد البطن بالطريقة المعقمة المعتادة. إجراء بضع البطن السري xipho لدخول البطن وتعبئة cephalad المعدة ، ووضع الثرب في مجال المنطوق.

بدءا من الجانب الأيسر من الانحناء الأكبر ، حيث ينضم الشريان المعدي الأيسر إلى الشريان الطحال ، قم بهيكل عظمي للشريان والوريد المعدي الأيسر باستخدام مقص ستيفنز المستقيم. ثم قم بالربط والتقسيم بشكل منفصل باستخدام الروابط أو المشابك الجراحية. استمر على طول الانحناء الأكبر للمعدة من اليسار إلى اليمين لربط وتقسيم الفروع الوعائية القصيرة الناشئة عن الثرب ، مما يوفر انحناءا أكبر للمعدة.

استمر في تعبئة الثرب الأكبر حتى يتم مواجهة تقاطع الأوعية المعدية اليمنى والشريان المعدي المعوي. ثم قم بربط وتقسيم الشريان المعدي والوريد الأيمن لتحرير السديلة العضلية والسماح بقنية السديلة لاحقا. لشراء رفرف اللفافة الموتر ، ضع الخنزير في وضع الاستلقاء الجانبي.

حدد حدود السديلة الداخلية من العمود الفقري الحرقفي العلوي الأمامي ، أو ASIS ، باتجاه الرضفة الجانبية ، والحد الخلفي حوالي 8 إلى 10 سم ذيليا. استخدم مشرطا لعمل شق حاد في الهامش البعيد عند الرضفة. تعميق الشق من خلال الأنسجة تحت الجلد للوصول إلى اللفافة التي تغطي المستقيم الفخذي ، ومواصلة الشقوق نحو ASIS على طول الحدود المحددة.

لعزل السديلة اللفافة وحدها، قم بإزالة مكون الجلد المغطي من طبقة اللفافة الأساسية. ثم ربط أو كي الأوعية المثقبة الصغيرة على الجلد. العودة إلى الحدود البعيدة للرفرف ، وشق اللفافة العميقة.

تعبئة اللفافة من العضلة الوعائية الجانبية الكامنة نحو ASIS. بعد تتبع عنيق نحو الأوعية الفخذية العميقة ، هيكل عظمي الشريان الفخذي المحيطي الجانبي والوريد الذي يزود رفرف اللفافة. ثم قم بربط وتقسيم أوعية الرفرف بالقرب منها ، حيث تنضم إلى الأوعية الفخذية العميقة وتسمح بالقنية لاحقا.

لشراء رفرف الساعد الشعاعي ، ضع علامة على مربع 3 × 3 سم على الجانب الشعاعي لساعد الخنزير الممتد. ارسم خطا بين نقطة المنتصف لهامش السديلة القريب والحفرة قبل المكعبة للدلالة على المسار التقريبي لعنيق الشريان الكعبري. تأكيد مسار الشرايين مع الجس.

بعد ذلك ، شق الجلد باستخدام مشرط في الجانب البعيد بعمق يصل إلى اللفافة قبل العضدية. تشريح حادة مع مقص بضع الوتر حتى يتم مواجهة الشريان الكعبري البعيد و vena comitantes. ثم ربط وتقسيم الشريان والأوردة مع الروابط الجراحية أو المشابك.

استمر في شقوق الجلد على الحواف الشعاعية والزندية لمربع الجلد المحدد. ثم قم بتعبئة السديلة من العظم الكعبري الأساسي بشفرة جراحية أو كي ، بدءا من اتجاه الزندي إلى الاتجاه الشعاعي مع رفع رفرف الجلد بالقرب من الحفرة قبل المرفقية. باستخدام مقص بضع الوتر ، قم بهيكل عظمي للشريان الكعبري والوريد بالقرب من الحفرة قبل المرفقية ، حيث ينضمون إلى الشريان العضدي والأوردة ، على التوالي.

تشريح الأوعية من الأنسجة الدهنية الليفية المحيطة لعزل عنيق الأوعية الدموية. ثم ربط وتقسيم الشريان والوريد بشكل منفصل لتحرير رفرف الساعد الكعبري. بعد ذلك ، قم بتهوية أوعية عنيق باستخدام قسطرة وعائية من 20 إلى 24 قياسا مثبتة برباط حريري 3-0.

اغسل محلول ملحي بالهيبارين في القنية الشريانية السديلة حتى يلاحظ تدفق وريدي واضح. أثناء العمل في خزانة السلامة الحيوية ذات التدفق الصفحي ، ضع اللوحات في غرفة أنسجة المفاعل الحيوي. أنابيب تدفق رئيسية مع محلول ملحي معقم بالهيبارين لإزالة الهواء المتبقي وترتيب اللوحات للسماح بالاتصال بين القنية الشريانية السديلة وموصل الذكر الشرياني.

ثم استخدم مرقئ معقم لربط القنية الشريانية على الموصل. ثم اغسل المحلول الملحي الهيباريني من خلال المحبس للتحقق من أن اتصال luer بدون تسرب ، وأن التخبط يمكن أن يتخلل مع دليل على التدفق الوريدي. بعد إغلاق غطاء حجرة الأنسجة ، قم بتوصيل أنبوب التدفق بأنبوب مضخة أصفر مكون من 3 توقفات بمحبس التدفق الداخلي لغرفة الأنسجة.

أيضا ، قم بتوصيل محول مستشعر الضغط المضمن بمحبس التدفق 3 اتجاهات لمراقبة ضغط التروية. بعد ذلك ، قم بتشغيل مضخة التدفق التمعجية وعلى الشاشة الأولية ، انتقل إلى علامة التبويب الثالثة باستخدام السهم لتعيين معرف الأنبوب على 1.85 ملم. ثم اضبط معدل التروية من علامة التبويب الثانية.

يتم ضبط معدل الإدخال كطريقة التسليم على 2 ملليلتر في الدقيقة. تأكد من صحة اتجاه التدفق كما هو معروض على الشاشة. قم بتحميل أنبوب المضخة المكون من 3 درجات إلى المضخة التمعجية باستخدام علبة متوافقة.

اضبط إعداد مضخة التدفق الخارجي على معدل 4 ملليلتر في الدقيقة. قم بتوصيل أنبوب التدفق الخارجي بأنبوب مضخة أصفر مكون من 3 نقاط توقف بمحبس التدفق الخارجي لغرفة الأنسجة. ثم قم بتحميل أنبوب المضخة المكون من 3 نقاط إلى المضخة التمعجية ، وابدأ التدفق لكلتا المضختين بالضغط على زر الطاقة في كل مضخة.

ابدأ في إزالة الخلايا من اللوحات باستخدام محلول ملحي هيبارين في حجرة الأنسجة لمدة 15 دقيقة لإزالة أي جلطات دموية محتجزة. عند الانتهاء ، استبدل المحلول الملحي المتبقي ب 500 ملليلتر من كبريتات دوديسيل الصوديوم ، أو SDS ، محلول إزالة الخلايا لغمر السديلة. بعد ذلك ، انقل أنبوب التدفق إلى محلول SDS وقم بغزارة الأنسجة.

بعد إزالة الخلايا من SDS ، استنشاق SDS المتبقية قبل استخدام الغطاء مع PBS ليوم واحد. بعد إزالة الخلايا من التروية SDS ، قم بالتتابع بتعطيل اللوحات في محلول الحمض النووي لمدة ساعتين ، ثم في PBS لمدة يوم واحد ، متبوعا بنقل أنبوب التدفق إلى حمض البيراسيتيك والإيثانول في الماء المقطر لتعقيم اللوحات عن طريق التعرق لمدة ثلاث ساعات. بمجرد الانتهاء من ذلك ، قم بإزالة اللوحات بشكل معقم واغمرها في غسلتين من PBS تحتوي على مضادات حيوية بنسبة 1٪ لمدة 15 دقيقة لكل منهما.

قم بتخزين اللوحات عند 4 درجات مئوية حتى تصبح جاهزة لإعادة الخلوية. استخدم أداة خزعة مثقوبة من 3 إلى 10 ملليمترات للحصول على عينات من الأنسجة لتقييم اللوحات منزوعة الخلايا. أظهرت اللوحات المعزولة منزوعة الخلايا التي تم مسحها تحت التحكم اليدوي دليلا على التدفق الخارجي من القنية الوريدية التي يتم تصريفها بحرية من الثرب ، واللفافة الموترة ، ورفرف الساعد الكعبري.

ظهر التشكل الإجمالي للثرب الأصلي ، واللفافة الموترة ، واللوحات الساعدية الشعاعية باللون الوردي مباشرة بعد الشراء. وبالمقارنة ، كانت الأنسجة منزوعة الخلايا بيضاء أو معتمة في المظهر. أظهر الفحص النسيجي للأنسجة الأصلية مع الهيماتوكسيلين والإيوزين وجود نوى زرقاء.

في اللوحات منزوعة الخلايا ، كشف التلوين النسيجي عن فقدان المواد الخلوية دون تلطيخ نووي أزرق ، مما يشير إلى سقالة الأنسجة اللاخلوية. أظهر القياس الكمي الإضافي لمحتوى الحمض النووي انخفاضا كبيرا في الحمض النووي في السقالات اللاخلوية مقارنة بالأنسجة الأصلية. الاعتبار الأكثر أهمية هو تقنية جراحية تستخدم أثناء الشراء ، مع الحرص على تجنب تلف عنيق السديلة من أجل السماح بنزع الخلايا اللاحقة للتروية.

بعد إزالة الخلايا من التروية ، يمكن إعادة الخلايا الناتجة مع مجموعات خلايا خاصة بالأنسجة من أجل تجديد مقصورات الأنسجة الأصلية.