تقنية لجمع المسلسل من السائل النخاعي من ماجنا في صهريج للماوس

تبدأ العملية بتخدير الفأر وتحضير موقع الجراحة. ثم يتم وضع الفأر في وضعية الانبطاح على جهاز التثبيت المجسم. يتم إجراء شق جلدي سهمي أسفل القفا، ثم يتم فصل الأنسجة تحت الجلد وعضلات الرقبة بشكل غير حاد عبر الخط الناصف.

بعد ذلك، يتم وضع الجزء الخلفي من الجسم بحيث يشكل الجسم زاوية قدرها 135 درجة مع الرأس المثبت، ثم يتم اختراق الأم الجافية في الـ cisterna magna باستخدام الشعيرة الزجاجية لجمع السائل الدماغي النخاعي (CSF). بعد أخذ عينة من السائل الدماغي النخاعي، يتم إعادة محاذاة العضلات وخياطة الجلد، ويُحقن حوالي 1 mL من محلول ملحي NaCl 0.9% تحت الجلد لمنع الجفاف، ويتم الحفاظ على دفء الفأر حتى يتماثل للشفاء. مرحباً، اسمي "ليو" من مختبر الدكتورة "كارين داف" في معهد القمة بجامعة كولومبيا.

سأوضح لكم اليوم كيفية جمع السائل الدماغي الشوكي من الصهريج الكبير للفأر. وباستخدام هذه التقنية، يمكننا جمع عينات متسلسلة من CSF تصل إلى ثلاث مرات من الفأر نفسه بفاصل زمني يتراوح بين شهرين إلى ثلاثة أشهر. ونستخدم هذه التقنية في مختبرنا لتحديد مستويات A beta أو tau في CSF في أعمار مختلفة لنماذج الفئران المعدلة وراثياً والمصابة بمرض Alzheimer's، ونقوم بربط هذه القيم بتلك الموجودة في الدماغ.

في النهاية، نحن مهتمون بمدى إمكانية استخدام مستويات beta أو tau في السائل الدماغي الشوكي (CSFA) كعلامات بيولوجية محتملة لتطور المرض، وكذلك للتجارب العلاجية في الفئران. لذا، لنبدأ الآن. يتطلب هذا الإجراء صنع شعيرات دموية باستخدام ماصة دقيقة قطبية.

الشعيرات المستخدمة هنا هي من زجاج السيليكات BOA B 175 10 من شركة Sutter Instruments، حيث يتم سحب الشعيرات باستخدام جهاز سحب الماصات الدقيقة اللهبي Sutter P 87 مع ضبط مؤشر الحرارة عند 300 ومؤشر الضغط عند 330. يبلغ طول الشعيرة الزجاجية 5 cm وتتميز بطرف مستدق. يتم تقليم طرف الشعيرة باستخدام مقص بحيث يكون قطرها الداخلي حوالي 0.5 mm.

تبدأ العملية الجراحية بتخدير الفأر باستخدام الكيتامين بجرعة 100 milligrams per kilogram والزيلازين بجرعة 10 milligrams per kilogram عن طريق الحقن داخل الصفاق، وخلال فترة التخدير، يتم الحفاظ على دفء الفأر في حاضنة عند درجة حرارة 37 °C. وبعد التأكد من تخدير الحيوان بشكل كامل عن طريق اختبار منعكس سحب الإصبع، يتم حلاقة الرقبة، ثم يُوضع الفأر على جهاز التوجيه المجسم (stereotaxic instrument) مثل هذا الجهاز من شركة David Kink. وبالتزامن مع التلامس المباشر مع وسادة التسخين، يتم إدخال مسبار درجة حرارة شرجي لضبط حرارة الوسادة وفقاً لدرجة حرارة جسم الفأر.

قم بتثبيت الرأس باستخدام محولات الرأس، وامسح جلد الرقبة بـ 10%povidone iodine و 70%ethanol ثلاث مرات، ثم قم بإجراء شق سهمي أسفل الجزء الخلفي من الرأس أو القفا. يجب تنفيذ الخطوات التالية تحت مجهر تشريحي باستخدام ملاقط غير حادة. افصل النسيج تحت الجلدي والعضلات M by ventor services و M rectus capita dorsalis major بحيث يتم كشف الأم الجافية لـ sternum magna. استخدم زوجًا من المباعدات الدقيقة بشكل صحيح لإبقاء العضلات متباعدة.

أخيرًا، ضع الفأر بحيث يكون الرأس بزاوية 135 درجة بالنسبة للجسم. أصبح الفأر الآن جاهزًا لجمع السائل الدماغي الشوكي (CSF). وقد نُشرت هذه التقنية لجمع السائل الدماغي الشوكي من الـ sternum Magno سابقًا.

الشكل 1 أ تحت مجهر التشريح. تظهر الأم الجافية كمثلث مقلوب شفاف ولامع، حيث يمكن رؤية النخاع المستطيل ووعاء دموي رئيسي من خلاله. الشريان الشوكي الجافي الشكل 1 ب. يمكن رؤية النبضات الدورية للنخاع ومساحة السائل الدماغي الشوكي المجاورة.

جفف الأم الجافية باستخدام مسحة قطنية معقمة، ثم أدخل الشعيرة في الـ CI sternum magna عبر الأم الجافية جانبياً بالنسبة لـ arteria dorsalis spinels. سيحدث تغير ملحوظ في المقاومة عند إدخال الشعيرة بشكل صحيح، ومن ثم سيتدفق السائل الدماغي النخاعي (CSF) إلى داخل الشعيرة. بعد جمع الـ CSF، قم بإزالة الشعيرة بعناية وتوصيلها بمحقنة سعة ثلاثة milliliter باستخدام أنبوب بولي إيثيلين بقطر داخلي يبلغ one millimeter.

احقن السائل الدماغي النخاعي (CSF) في أنبوب سعة 0.5 milliliter. ضع علامة تعريفية على الأنبوب وجَمده فوراً باستخدام الثلج الجاف. وبمجرد تجمده، انقل السائل الدماغي النخاعي إلى مجمد بدرجة حرارة minus 80 °C.

إن تقنية أخذ العينات التي تم عرضها للتو لطيفة للغاية وتسمح بأخذ عينات لاحقة من السائل الدماغي الشوكي (CSF) من الفأر نفسه على فترات تتراوح بين شهرين إلى ثلاثة أشهر. وبناءً على ذلك، بعد أخذ العينة من الرقبة، يجب إعادة محاذاة العضلات والجلد وإغلاقهما باستخدام الغرز الجراحية. وبعد خياطة الشق، يتم حقن حوالي 1 ml من محلول ملحي 0.9%NACL تحت الجلد لإعادة ترطيب الفأر.

حافظ على تدفئة الفأر عند درجة حرارة تقارب 37 درجة Celsius حتى يستعيد وعيه. راقب وزنه في اليوم الأول واليوم السابع بعد الجراحة. لقد أوضحت لك للتو كيفية جمع السائل الدماغي النخاعي من النظام mag للفأر.

عند تنفيذ هذا الإجراء، هناك ثلاثة أمور مهمة يجب تذكرها. أولاً، قم بوضع رأس وجسم الفأر بشكل صحيح على الإطار التجسيمي بحيث يتم كشف ator الخاص بـ Cy Magna قدر الإمكان. ثانياً، تجنب الأوعية الدموية بعناية عند اختراق durometer باستخدام الشعيرة.

وإلا، ستتعرض عينتك للتلوث بالدم. وأخيرًا وليس آخرًا، يرجى تذكر الحفاظ على دفء الفئران طوال العملية لمنع انخفاض درجة حرارة الجسم. إن انخفاض درجة حرارة الجسم ليس ضارًا بالفئران فحسب، بل يمكن أن يؤثر بشكل كبير على نتائجك عن طريق تحفيز إنتاج beta أو علاقة tall hypo phosphorylation.

حسناً، هذا كل شيء. شكراً للمشاهدة وبالتوفيق في تجاربكم.