Isolation of Mouse Lung Dendritic Cells

Lung dendritic cells (DC) play a fundamental role in sensing invading pathogens 1,2 as well as in the control of tolerogenic responses 3 in the ...

Rapid mobilization of neutrophils from vasculature to the site of bacterial/viral infections and tissue injury is a critical step in successful resolution of inflammation. The chemokine CXCL8 plays a central role in recruiting neutrophils. A characteristic feature of CXCL8 is its ability to reversibly exist as both monomers and dimers, but whether both forms exist in vivo, and if so, the relevance of each form for in vivo function is not known. In this study, using a 'trapped' non-associating monomer and a non-dissociating dimer, we show that (i) wild type (WT) CXCL8 exists as both monomers and dimers, (ii) the in vivo recruitment profiles of the monomer, dimer, and WT are distinctly different, and (iii) the dimer is essential for initial robust recruitment and the WT is most active for sustained recruitment. Using a microfluidic device, we also observe that recruitment is not only dependent on the total amount of CXCL8 but also on the steepness of the gradient, and the gradients created by different CXCL8 variants elicit different neutrophil migratory responses. CXCL8 mediates its function by binding to CXCR2 receptor on neutrophils and glycosaminoglycans (GAGs) on endothelial cells. On the basis of our data, we propose that dynamic equilibrium between CXCL8 monomers and dimers and their differential binding to CXCR2 and GAGs mediates and regulates in vivo neutrophil recruitment. Our finding that both CXCL8 monomer and dimer are functional in vivo is novel, and indicates that the CXCL8 monomer-dimer equilibrium and neutrophil recruitment are intimately linked in health and disease.

Monomeric and dimeric CXCL8 are both essential for in vivo neutrophil recruitment.

Schnelle Mobilisierung von Neutrophilen aus Gef&auml;&szlig;system auf der Website der bakterielle/virale Infektionen und Gewebeverletzungen ist ein entscheidender Schritt in erfolgreiche Aufl&ouml;sung der Entz&uuml;ndung. Die Chemokine CXCL8 spielt eine zentrale Rolle bei der Rekrutierung von Neutrophilen. Ein charakteristisches Merkmal von CXCL8 ist seine F&auml;higkeit, reversibel als Monomere und Dimere existieren, aber ob beide Formen in-vivo vorhanden sind, und wenn ja, ist die Relevanz jedes Formulars f&uuml;r in-vivo-Funktion nicht bekannt. In dieser Studie mit einem &#39;gefangen&#39; nicht zuordnen-Monomer und eine nicht-man distanziert-Dimer, zeigen wir, dass (i) Wildtyp (WT) CXCL8 existiert als Monomere und Dimere, (Ii) die in-vivo-Rekrutierung-Profile der Monomer, Dimer und WT sind deutlich anders, und (Iii) die Dimer unverzichtbar f&uuml;r die erste robuste Einstellung und WT ist aktivste f&uuml;r nachhaltige Einstellung. Mit einem mikrofluidische, beobachten wir auch, dass Einstellung nicht nur von den Gesamtbetrag der CXCL8 sondern auch die Steilheit des Farbverlaufs h&auml;ngt und die Farbverl&auml;ufe erstellt von CXCL8-Varianten verschiedene neutrophil migratorische entlocken. CXCL8 vermittelt seine Funktion durch Bindung an CXCR2 Rezeptor auf neutrophile und Glycosaminoglycans (GAG) in Endothelzellen. Auf Basis unserer Daten schlagen wir vor, dass dynamisches Gleichgewicht zwischen CXCL8-Monomere und Dimere und ihre differenzielle Bindung an CXCR2 und GAGs vermittelt und in-vivo neutrophil Rekrutierung regelt. Unsere Feststellung, dass CXCL8 Monomeren und dimeren in Vivo funktionsf&auml;hig sind Roman, und gibt an, dass die CXCL8 Monomer-Dimer Gleichgewicht und neutrophil Rekrutierung in Gesundheit und Krankheit eng verkn&uuml;pft sind.

Monomeren und dimeren CXCL8 sowohl f&uuml;r in-vivo neutrophil Einstellung wesentlich sind.

Severe infection by the human respiratory syncytial virus (RSV) early in life is associated with subsequent recurrent airway disease presumably mediated by dysregulation of the local immune response. Dysfunction of the immune response may be related to impaired macrophage functions. We have previously reported that RSV persistence in a macrophage culture (MPhiper) alters Fcgamma receptors (FcgammaR)-mediated phagocytosis and the production of pro-inflammatory cytokines. Here, we determined whether the ability of macrophages to process and present antigens and to stimulate RSV-specific CD8(+) T cells was altered in MPhiper. We also examined the level of expression of MHC class I molecules in MPhiper and the ability of these cells to present viral antigens to specific T lymphocytes. Our results showed that antigen processing and presentation were not altered by chronic RSV infection, and suggested that MPhiper were able to stimulate RSV-specific CD8(+) T lymphocytes.

Antigen presentation by a macrophage-like cell line persistently infected with respiratory syncytial virus.

Antigen-Pr&#xE4;sentation durch einen Makrophagen-&#xE4;hnlichen Zelllinie beharrlich mit Respiratory-Syncytial-Virus infiziert.

Respiratory syncytial virus (RSV) and human metapneumovirus (hMPV) cause a similar spectrum of respiratory infections in humans. Classified within the Paramyxoviridae family, Pneumovirinae subfamily, RSV and hMPV present a significant degree of divergence in genome constellation, organization, and protein sequences. RSV has been reported to be a poor inducer of alpha/beta interferons (IFN-alpha/beta) and partially resistant to its antiviral activity. The nature of the innate immune response to hMPV is currently unknown. Herein, an experimental mouse model was used to investigate the interplay between RSV and hMPV infections and IFN-alpha in the airways. RSV-infected BALB/c mice treated intranasally with either poly-ICLC, a potent inducer of IFN-alpha, or directly with recombinant IFN-alpha showed significantly reduced lung viral titers, inflammation, and clinical disease than untreated controls. However, RSV was significantly less sensitive to the antiviral activity of IFN-alpha than hMPV. Similarly, when the ability to directly induce IFN-alpha production was assessed, RSV was clearly a weaker inducer of IFN-alpha than hMPV, as shown by both kinetics and the absolute amount of IFN-alpha secreted into the bronchoalveolar lavage. To further investigate the putative inhibitory effect of these viruses on IFN-alpha production, mice were infected for 48 h prior to treatment with poly-ICLC or a specific Toll-like receptor 9 ligand, CpG oligodeoxynucleotides. Strikingly, both poly-ICLC- and CpG-mediated IFN-alpha production was abrogated by either RSV or MPV infection. These results suggest that a complex interplay between virus-specific and host-mediated responses regulates IFN-alpha in the lung during infection by members of the Pneumovirinae family.

Activity and regulation of alpha interferon in respiratory syncytial virus and human metapneumovirus experimental infections.

Aktivit&#xE4;t und Regulation von Alpha-Interferon in Respiratory-Syncytial-Virus und das humane Metapneumovirus experimentellen Infektionen.

Lung cytokine and chemokine production by BALB/c mice infected with human metapneumovirus (hMPV) was compared to respiratory syncytial virus (RSV)-infected mice. hMPV infection induced lower levels of the inflammatory cytokines interleukin-1 (IL-1), IL-6 and tumor necrosis factor alpha but was a more potent inducer of granulocyte-macrophage colony-stimulating factor and triggered a more sustained production of the CXC chemokine KC compared to RSV. hMPV was a stronger inducer of both alpha interferon (IFN-alpha) and IFN-gamma responses than RSV. In regard to immunomodulatory cytokines, hMPV failed to induce detectable IL-10 or IL-12p70 but was a potent inducer of IL-12 p40 subunit. The implications for hMPV pathogenesis are discussed.

Human metapneumovirus induces a profile of lung cytokines distinct from that of respiratory syncytial virus.

Lung Zytokine und Chemokine Produktion von BALB/c M&auml;use mit menschlichen Metapneumovirus (hMPV) infiziert war im Vergleich zu respiratorischen Synzytialvirus (RSV)-infizierten M&auml;usen. hMPV Infektion induzierte niedrigere die inflammatorische Zytokine Interleukin-1 (Il-1), IL-6 und Tumor-Nekrose-Faktor-Alpha aber war ein potenter Induktor von Granulozyten-Makrophagen-Kolonie-stimulierende Faktor und eine nachhaltigere Produktion von der CXC-Chemokine KC gegen&uuml;ber RSV ausgel&ouml;st. hMPV war eine st&auml;rkere Induktor von alpha-Interferon (IFN-Alpha) und IFN-Gamma Antworten als RSV. In Bezug auf immunmodulatorische Zytokine hMPV nachweisbar IL-10, IL - 12 p 70 induzieren konnte aber war ein potenter Induktor von IL-12 p40 Untereinheit. Die Implikationen f&uuml;r hMPV Pathogenese werden diskutiert.

Menschliche Metapneumovirus induziert ein Profil der Lunge Cytokines von respiratory-syncytial-Virus.

Dendritic cells (DCs) play a pivotal role in shaping antiviral immune responses in the respiratory tract. Human metapneumovirus (hMPV) is a recently identified pathogen and like its better known relative, respiratory syncytial virus (RSV), has been increasingly recognized as a major cause of respiratory morbidity in infants and in elderly persons. In the present study, we examined susceptibility as well as cellular responses of human DCs to hMPV compared with RSV. Monocyte-derived DCs (moDCs) were susceptible to infection by both viruses, but only RSV was able to induce a productive infection with release of viral progeny. Despite the fact that viral infection resulted in phenotypic maturation of moDCs, as shown by the upregulation of cell surface markers and antigen-presenting molecules (MHC I and II, CD80, CD83, CD86, CD38), RSV-infected moDCs showed a severely impaired capacity to stimulate CD4+ T cell proliferation. Compared with hMPV, RSV was a more potent inducer of inflammatory and immunomodulatory cytokines, including TNF-alpha, IL-6, IL-1beta, IL-10, and IL-12p70 in both moDCs and plasmacytoid dendritic cells (pDCs). On the other hand, hMPV, but not RSV, was able to trigger production of IFN-alpha by moDCs, while both viruses strongly induced IFN-alpha in pDCs. Finally, both viruses strikingly suppressed IFN-alpha production by moDCs or pDCs stimulated with synthetic dsRNA and CpG-ODN, respectively. The findings provide novel evidence that RSV and hMPV differentially activate human DCs and may use distinct mechanisms to interfere with the host innate and adaptive immune responses.

Differential response of dendritic cells to human metapneumovirus and respiratory syncytial virus.

Dendritische Zellen (DCs) spielen eine zentrale Rolle bei der Gestaltung der antiviralen Immunantwort in den Atemwegen. Menschliche Metapneumovirus (hMPV) ist ein k&uuml;rzlich identifizierten Erreger und wie seine bekannteren relative, respiratorischen Synzytialvirus (RSV), wurde zunehmend anerkannt als eine der Hauptursachen f&uuml;r respiratorische Morbidit&auml;t bei S&auml;uglingen und bei &auml;lteren Menschen. In der vorliegenden Studie wurden Anf&auml;lligkeit sowie zellul&auml;re Antworten des menschlichen DCs zu hMPV gegen&uuml;ber RSV. Monozyt abgeleitete DCs (MoDCs) waren anf&auml;llig f&uuml;r Infektionen durch beide Viren, aber nur RSV konnte eine produktive Infektion mit Ver&ouml;ffentlichung der viralen Nachkommen zu induzieren. Trotz der Tatsache, dass eine Virusinfektion ph&auml;notypische Reifung der MoDCs, f&uuml;hrte wie die Hochregulation der Zelle Oberfl&auml;che Marker und Antigen-pr&auml;sentierenden Molek&uuml;le gezeigt (MHC I und II, CD80, CD83, CD86, CD38), RSV-infizierten MoDCs zeigte eine stark eingeschr&auml;nkt Kapazit&auml;t CD4 + T-Zellproliferation zu stimulieren. Gegen&uuml;ber hMPV RSV ist ein potenter Induktor von entz&uuml;ndlichen und immunmodulatorische Zytokine, einschlie&szlig;lich TNF-Alpha TNF-alpha-6, IL-1beta, IL-10 und IL - 12 p 70 in MoDCs und Plasmacytoid dendritische Zellen (pDCs). Auf der anderen Seite konnte hMPV, aber keine RSV Produktion von IFN-Alpha MoDCs, auch ausgel&ouml;st, wenn beide Viren stark IFN-Alpha in pDCs induziert. Schlie&szlig;lich unterdr&uuml;ckt beide Viren auffallend IFN-Alpha-Produktion von MoDCs oder pDCs stimulierte mit synthetischen sequenzspezifischen und CpG-ODN, beziehungsweise. Die Ergebnisse belegen Roman, dass RSV und hMPV differentiell menschlichen DCs zu aktivieren und verschiedene Mechanismen verwenden k&ouml;nnen, um die Host angeborene und adaptive Immunantworten st&ouml;ren.

Differenzielle Antwort von dendritischen Zellen menschlichen Metapneumovirus und respiratory-syncytial-Virus.

Respiratory-syncytial-Virus (RSV) ist eine der Hauptursachen der unteren Atemwege bei Kindern. Keine Behandlung hat sich gezeigt, das klinische Ergebnis der Patienten mit dieser Infektion deutlich zu verbessern. J&uuml;ngste Hinweise, dass oxidativer Stress eine wichtige Rolle bei der Entstehung von akuten und chronischen entz&uuml;ndlichen Lungenerkrankungen spielen k&ouml;nnte. Wir tun nicht bekannt, ob die RSV pulmonalen oxidativen Stress induziert und ob antioxidative Behandlung RSV-induzierte Lungenerkrankungen modulieren kann.

Antioxidative Behandlung aerztlichen Atemwege syncytial-Virus-induzierte Krankheit und Lungen Entz&uuml;ndung.

Respiratory syncytial virus (RSV) is a major cause of lower respiratory tract infection in children. No treatment has been shown to significantly improve the clinical outcome of patients with this infection. Recent evidence suggests that oxidative stress could play an important role in the pathogenesis of acute and chronic lung inflammatory diseases. We do not known whether RSV induces pulmonary oxidative stress and whether antioxidant treatment can modulate RSV-induced lung disease.

Antioxidant treatment ameliorates respiratory syncytial virus-induced disease and lung inflammation.

Dendritic cells (DCs) play a central role in innate immunity and antiviral responses. In this study, we investigated the production of alpha interferon (IFN-alpha) and inducible chemokines by human monocyte-derived dendritic cells (mDCs) and plasmacytoid dendritic cells (pDCs) infected with West Nile virus (WNV), an emergent pathogen whose infection can lead to severe cases of encephalitis in the elderly, children, and immunocompromised individuals. Our experiments demonstrated that WNV grown in mammalian cells (WNV(Vero)) was a potent inducer of IFN-alpha secretion in pDCs and, to a lesser degree, in mDCs. The ability of WNV(Vero) to induce IFN-alpha in pDCs did not require viral replication and was prevented by the treatment of cells with bafilomycin A1 and chloroquine, suggesting that it was dependent on endosomal Toll-like receptor recognition. On the other hand, IFN-alpha production in mDCs required viral replication and was associated with the nuclear translocation of IRF3 and viral antigen expression. Strikingly, pDCs failed to produce IFN-alpha when stimulated with WNV grown in mosquito cells (WNV(C7/10)), while mDCs responded similarly to WNV(Vero) or WNV(C7/10). Moreover, the IFN-dependent chemokine IP-10 was produced in substantial amounts by pDCs in response to WNV(Vero) but not WNV(C7/10), while interleukin-8 was produced in greater amounts by mDCs infected with WNV(C7/10) than in those infected with WNV(Vero). These findings suggest that cell-specific mechanisms of WNV recognition leading to the production of type I IFN and inflammatory chemokines by DCs may contribute to both the innate immune response and disease pathogenesis in human infections.

Differential activation of human monocyte-derived and plasmacytoid dendritic cells by West Nile virus generated in different host cells.

Dendritische Zellen (DCs) spielen eine zentrale Rolle in der angeborenen Immunit&auml;t und antivirale Antworten. In dieser Studie untersuchten wir die Produktion von alpha-Interferon (IFN-Alpha) und durch Induktion Chemokinen durch menschliche Monozyte-abgeleitete dendritische Zellen (MDC) und Plasmacytoid dendritische Zellen (pDCs) infiziert mit West-Nil-Virus (WNV), ein entstehender Erreger, deren Infektion zu schweren F&auml;llen von Enzephalitis in der &auml;lteren Menschen, Kindern und immungeschw&auml;chten Personen f&uuml;hren kann. Unsere Experimente zeigten, dass WNV gewachsen in den S&auml;ugetier-Zellen (WNV(Vero)) war ein potenter Induktor von IFN-Alpha-Sekretion in pDCs und in geringerem Ma&szlig;e in mDCs. Die F&auml;higkeit des WNV(Vero), IFN-Alpha in pDCs ausl&ouml;sen, virale Replikation nicht erforderlich und wurde durch die Behandlung der Zellen mit Bafilomycin A1 und Chloroquin, was darauf hindeutet, dass es Endosomen Toll-Like-Rezeptor Anerkennung abh&auml;ngig war verhindert. Auf der anderen Seite, IFN-Alpha-Produktion in mDCs Virusreplikation ben&ouml;tigt und war die nukleare Translokation IRF3 und Virusantigen Ausdruck zugeordnet. Auff&auml;llig ist, konnte nicht pDCs produzieren IFN-Alpha wenn angeregt mit WNV gewachsen in Moskito-Zellen (WNV(C7/10)), w&auml;hrend mDCs ebenso auf WNV(Vero) oder WNV(C7/10) reagiert. Dar&uuml;ber hinaus wurde die IFN-abh&auml;ngige Chemokine IP-10 in erheblichen Mengen von produziert pDCs als Reaktion auf WNV(Vero) aber nicht WNV(C7/10), w&auml;hrend Interleukin-8 von MDC infiziert mit WNV(C7/10) als in WNV(Vero)-infizierten in gr&ouml;&szlig;eren Mengen produziert wurde. Diese Forschungsergebnisse legen nahe, dass zellspezifische Mechanismen der WNV Anerkennung f&uuml;hrt zu die Produktion von Typ I Interferon (IFN) und entz&uuml;ndliche Chemokine von DCs zu der angeborenen Immunantwort und die Pathogenese der Krankheit im menschlichen Infektionen beitragen k&ouml;nnen.

Differenzielle Aktivierung des menschlichen Monozyte abgeleitete und Plasmacytoid dendritische Zellen von West-Nil-Virus in verschiedenen Wirtszellen generiert.

Respiratory syncytial virus (RSV) is a major cause of lower respiratory tract infection in infants, young children, and high-risk adults. Currently, there is no vaccine to prevent RSV infection, and the available therapeutic agents are of limited utility. Peptide-conjugated phosphorodiamidate morpholino oligomers (PPMOs) are a class of antisense agents that can enter cells readily and interfere with viral protein expression through steric blocking of complementary RNA. Two antisense PPMOs, designed to target sequence that includes the 5'-terminal region and translation start-site region of RSV L mRNA, were tested for anti-RSV activity in cultures of two human-airway cell lines. Both PPMOs showed minimal cytotoxicity and one of them, (AUG-2), reduced viral titers by >2.0 log(10). Intranasal (i.n.) treatment of BALB/c mice with AUG-2 PPMO before the RSV inoculation produced a reduction in viral titer of 1.2 log(10) in lung tissue at day 5 postinfection (p.i.), and attenuated pulmonary inflammation at day 7 postinfection. These data show that the AUG-2 PPMO possesses potent anti-RSV activity and is worthy of further investigation as a candidate for potential therapeutic application.

Inhibition of respiratory syncytial virus infections with morpholino oligomers in cell cultures and in mice.

Respiratory-syncytial-Virus (RSV) ist eine der Hauptursachen f&uuml;r die unteren Atemwege S&auml;uglinge, Kleinkinder und risikoreiche Erwachsene. Derzeit gibt es keinen Impfstoff, RSV-Infektion zu verhindern, und die verf&uuml;gbaren Therapeutika sind begrenzt-Dienstprogramm. Peptid-konjugierten Phosphorodiamidate Morpholino Oligomere (PPMOs) sind eine Klasse von antisense-Agents, die Zellen leicht eingeben und virale Proteinexpression durch sterische Blockierung von komplement&auml;ren RNA st&ouml;ren k&ouml;nnen. Zwei &quot;Antisense&quot; PPMOs, entworfen, um eine Sequenz mit die Region 5&#39;-Terminal Region und &Uuml;bersetzung der Start-Seite des RSV L mRNA, wurden f&uuml;r Anti-RSV-Aktivit&auml;t in Kulturen von zwei Menschen-Airway-Zelllinien getestet. Beide PPMOs zeigten minimale Zytotoxizit&auml;t und einer von Ihnen, (AUG-2), virale Titer von reduziert &gt; 2.0 log(10). Intranasal (i.n.) Behandlung von BALB/c M&auml;usen mit AUG-2 PPMO vor der RSV-Impfung produziert einen R&uuml;ckgang der viralen Titer von 1,2 log(10) im Lungengewebe am Tag 5 Postinfection (p.i.) und pulmonale Entz&uuml;ndung an Tag 7 Postinfection abgeschw&auml;cht. Diese Daten zeigen, dass die AUG-2-PPMO potente Anti-RSV-T&auml;tigkeit besitzt und weitere Untersuchungen als Kandidat f&uuml;r die m&ouml;gliche therapeutische Anwendung verdient.

Hemmung der respiratorischen Synzytialvirus Infektionen mit Morpholino Oligomeren in Zellkulturen und bei M&auml;usen.

Human metapneumovirus (hMPV), a member of the family Paramyxoviridae, is a leading cause of lower respiratory tract infections in children, the elderly, and immunocompromised patients. Virus- and host-specific mechanisms of pathogenesis and immune protection are not fully understood. By an intranasal inoculation model, we show that hMPV-infected BALB/c mice developed clinical disease, including airway obstruction and hyperresponsiveness (AHR), along with histopathologic evidence of lung inflammation and viral replication. hMPV infection protected mice against subsequent viral challenge, as demonstrated by undetectable viral titers, lack of body weight loss, and a significant reduction in the level of lung inflammation. No cross-protection with other paramyxoviruses, such as respiratory syncytial virus, was observed. T-lymphocyte depletion studies showed that CD4(+) and CD8(+) T cells cooperate synergistically in hMPV eradication during primary infection, but CD4(+) more than CD8(+) T cells also enhanced clinical disease and lung pathology. Concurrent depletion of CD4(+) and CD8(+) T cells completely blocked airway obstruction as well as AHR. Despite impaired generation of neutralizing anti-hMPV antibodies in the absence of CD4(+) T cells, mice had undetectable viral replication after hMPV challenge and were protected from clinical disease, suggesting that protection can be provided by an intact CD8(+) T-cell compartment. Whether these findings have implications for naturally acquired human infections remains to be determined.

T lymphocytes contribute to antiviral immunity and pathogenesis in experimental human metapneumovirus infection.

Menschliche Metapneumovirus (hMPV), ein Mitglied der Familie Virus, ist eine f&uuml;hrende Ursache von Infektionen der unteren Atemwege bei Kindern, &auml;ltere Menschen und immungeschw&auml;chten Patienten. Virus - und Host-spezifischen Mechanismen der Pathogenese und immun-Schutz sind nicht vollst&auml;ndig verstanden. Durch ein Modell intranasale Impfung zeigen wir, dass hMPV-infizierten BALB/c M&auml;use klinische Krankheit, einschlie&szlig;lich Airway Obstruktion und Hyperreagibilit&auml;t (AHR), zusammen mit der histologische Beweis f&uuml;r Lungen-Entz&uuml;ndung und virale Replikation entwickelt. hMPV Infektion gesch&uuml;tzt M&auml;use gegen nachfolgende virale Herausforderung, wie nicht nachweisbar virale Titer, mangelnde K&ouml;rper-Gewicht-Verlust und eine signifikante Absenkung der Lunge Entz&uuml;ndung zeigt. Kein Kreuz-Schutz mit anderen Paramyxoviren, wie respiratory-syncytial-Virus, wurde beobachtet. T-Lymphozyten Ersch&ouml;pfung Studien zeigten, dass CD4(+) und CD8(+) T-Zellen synergistisch in hMPV Tilgung w&auml;hrend der prim&auml;ren Infektion, aber CD4(+) mehr zusammenarbeiten als CD8(+) T-Zellen auch klinische Krankheit und Lunge Pathologie verbessert. Gleichzeitiger Ersch&ouml;pfung der CD4(+) und CD8(+) T-Zellen blockiert vollst&auml;ndig Obstruktion der Atemwege sowie AHR. Trotz gest&ouml;rter Erzeugung von neutralisierenden Antik&ouml;rper der Anti-hMPV in Ermangelung von CD4(+) T-Zellen M&auml;use hatte nicht nachweisbar Virusreplikation nach hMPV Challenge und waren gesch&uuml;tzt vor klinischer Krankheit, was darauf hindeutet, dass Schutz durch eine intakte CD8(+) T-Zell-Fach bereitgestellt werden kann. Ob diese Erkenntnisse nat&uuml;rlich erworbenen Infektionen beim Menschen auswirken, bleibt bestimmt werden.

T-Lymphozyten tragen zur antiviralen Immunit&auml;t und Pathogenese in experimentellen menschlichen Metapneumovirus Infektion.

Exposure to cigarette smoke is a risk factor contributing to the severity of respiratory tract infections associated with respiratory syncytial virus (RSV). Stimulation of airway epithelial cells by either RSV or cigarette smoke condensate (CSC) has been shown to induce secretion of the proinflammatory chemokines. However, the effect of coexposure of airway epithelial cells to CSC and RSV on inducible chemokine production has not been previously investigated. The results of this study indicate that CSC costimulation significantly increased RSV-induced interleukin-8 (IL-8) and monocyte chemoattactant protein-1 gene and protein expression when compared with each stimulus alone. Promoter deletion studies identified the interferon stimulatory response element (ISRE) of the IL-8 promoter as a critical region responsible for the synergistic increase of IL-8 gene transcription during mixed exposure. CSC costimulation enhanced RSV-induced activation of interferon regulatory factor (IRF)-1 and IRF-7, which bind to the ISRE site. CSC also furthered RSV-induced activation of the transcription factor nuclear factor kappa B (NF-kappaB), as shown by increased NF-kappaB DNA binding to its specific site of the IL-8 promoter and increased NF-kappaB-driven gene transcription. Therefore, our data demonstrate that a combined exposure to CSC and RSV synergistically increases chemokine expression in airway epithelial cells, suggesting that CSC contributes to an exuberant immune response to RSV by stimulating overlapping signal transduction pathways.

Cigarette smoke condensate enhances respiratory syncytial virus-induced chemokine release by modulating NF-kappa B and interferon regulatory factor activation.

Exposition gegen&uuml;ber Zigarettenrauch ist ein Risiko-Faktor mit dem Schweregrad der Infektionen der Atemwege, respiratory-syncytial-Virus (RSV) zugeordnet. Stimulierung der Epithelzellen der Atemwege durch RSV oder Zigarette nachweislich Rauch Kondensat (CSC) Sekretion von den Proinflammatory Chemokine induzieren. Jedoch ist die Wirkung der Coexposure der Epithelzellen der Atemwege zu CSC und RSV durch Induktion Chemokine Produktion nicht zuvor untersucht worden. Die Ergebnisse dieser Studie zeigen, dass die CSC Costimulation deutlich RSV-induzierte Interleukin-8 (IL-8) und Monozyte Chemoattactant Protein-1 Gen und Protein Ausdruck im Vergleich mit jedem Reiz allein erh&ouml;ht. Projekttr&auml;ger L&ouml;schung Studien identifiziert das Interferon-Stimulationsantwort-Element (ISRE) des Projekttr&auml;gers IL-8 als kritische Region f&uuml;r die synergistischen Anstieg von IL-8-gen-Transkription auf gemischte Ausstellung verantwortlich. CSC Costimulation verbessert RSV-induzierte Aktivierung von Interferon ordnungspolitischen Faktor (IRF)-1 und IRF-7, die an der ISRE Website binden. CSC auch RSV-induzierte Aktivierung des Transkription Faktor nuklearer Faktor Kappa B (NF-KappaB), gef&ouml;rdert, wie gezeigt durch verst&auml;rkte NF-KappaB DNA-Bindung an den spezifischen Standort des Projekttr&auml;gers IL-8 und NF-KappaB-gesteuerte gen-Transkription erh&ouml;ht. Daher zeigen unsere Daten, dass eine Kombination der Gef&auml;hrdung durch CSC und RSV synergistisch Chemokine Ausdruck in Epithelzellen der Atemwege erh&ouml;ht, was darauf hindeutet, dass CSC zu einer &uuml;berschw&auml;nglichen Immunantwort auf RSV durch anregende &uuml;berlappende Signaltransduktion Berufsbildungsabschnitte beitr&auml;gt.

Zigarettenrauch Kondensat verbessert respiratory syncytial-Virus-induzierte Chemokine Freigabe durch modulierenden NF-Kappa-B und Interferon-ordnungspolitischen Faktor-Aktivierung.

Lower respiratory tract infections caused by the paramyxoviruses human metapneumovirus (hMPV) and respiratory syncytial virus (RSV) are characterized by short-lasting virus-specific immunity and often long-term airway morbidity, both of which may be the result of alterations in the Ag-presenting function of the lung which follow these infections. In this study, we investigated whether hMPV and RSV experimental infections alter the phenotype and function of dendritic cell (DC) subsets that are recruited to the lung. Characterization of lung DC trafficking demonstrated a differential recruitment of plasmacytoid DC (pDC), conventional DC (cDC), and IFN-producing killer DC to the lung and draining lymph nodes after hMPV and RSV infection. In vitro infection of lung DC indicated that in pDC, production of IFN-alpha, TNF-alpha, and CCL5 was induced only by hMPV, whereas CCL3 and CCL4 were induced by both viruses. In cDC, a similar repertoire of cytokines was induced by hMPV and RSV, except for IFN-beta, which was not induced by RSV. The function of lung pDC was altered following hMPV or RSV infection in vivo, as we demonstrated a reduced capacity of lung pDC to produce IFN-alpha as well as other cytokines including IL-6, TNF-alpha, CCL2, CCL3, and CCL4 in response to TLR9 stimulation. Moreover, we observed an impaired capacity of cDC from infected mice to present Ag to CD4(+) T cells, an effect that lasted beyond the acute phase of infection. Our findings suggest that acute paramyxovirus infections can alter the long-term immune function of pulmonary DC.

Subversion of pulmonary dendritic cell function by paramyxovirus infections.

Infektionen der unteren Atemwege durch den Paramyxoviren menschlichen Metapneumovirus (hMPV) und respiratory-syncytial-Virus (RSV) zeichnen sich durch Short-Lasting Virus-spezifische Immunit&auml;t und oft langfristige Airway Morbidit&auml;t, die das Ergebnis von Ver&auml;nderungen in der Ag-pr&auml;sentierende Funktion der Lunge sein k&ouml;nnen, die diese Infektionen zu folgen. In dieser Studie untersucht wir, ob hMPV und RSV experimentelle Infektionen ver&auml;ndern der Ph&auml;notyp und die Funktion der dendritischen Zellen (DC)-Teilmengen, die in die Lunge rekrutiert werden. Charakterisierung des Menschenhandels Lunge DC zeigte eine differenzielle Rekrutierung von Plasmacytoid DC (pDC), konventionelle DC (cDC) und IFN-produzierenden Killer DC zu Lunge und Drainierende Lymphknoten nach hMPV und RSV-Infektion. In-vitro-Infektion der Lunge DC gekennzeichnet, dass in pDC, Produktion von IFN-Alpha, TNF-Alpha und CCL5 nur durch hMPV, verursacht wurde, w&auml;hrend CCL3 und CCL4 durch beide Viren hervorgerufen wurden. Im cDC wurde ein &auml;hnliches Repertoire von Zytokinen induziert durch hMPV und RSV, mit Ausnahme von IFN-Beta, die nicht durch RSV verursacht wurde. Die Funktion der Lunge pDC war ver&auml;nderte folgende hMPV oder RSV-Infektion in-vivo, als wir eine reduzierte Kapazit&auml;t der Lunge pDC gezeigt, um IFN-Alpha sowie andere Zytokine wie IL-6, TNF-Alpha CCL2, CCL3 und CCL4 in Reaktion auf TLR9 Stimulation zu erzeugen. Dar&uuml;ber hinaus beobachten wir eine gest&ouml;rte Kapazit&auml;t cDC von infizierten M&auml;usen bis pr&auml;sentieren Ag CD4(+) T-Zellen, ein Effekt, der nach der akuten Phase der Infektion dauerte. Unsere Ergebnisse weisen, dass akute Paramyxoviridae Infektionen die langfristige Immunfunktion pulmonale DC &auml;ndern k&ouml;nnen.

Subversion pulmonale Dendritische Zelle Funktion durch Paramyxoviridae Infektionen.

Exposure to environmental tobacco smoke (ETS) is associated with an increase in the frequency and severity of respiratory infections, including bronchiolitis, a clinical syndrome of infancy caused by viruses such as respiratory syncytial virus (RSV). The mechanisms by which ETS increases the risk of viral respiratory infections are largely unknown. A major effector integrating early antiviral and immunostimulatory activities is interferon-Î± (IFN-Î±), which is highly produced by plasmacytoid dendritic cells (pDC). In this work, we determined the effect of cigarette smoke extract (CSE) on human pDC immunity in response to a respiratory viral infection. We found that CSE inhibited RSV-induced IFN-Î± in pDC as well as the release of IL-1Î², IL-10 and CXCL10. However, the production of additional cytokines and chemokines such as IL-6, TNF-Î±, CCL2, CCL3, CCL5 and CXCL8 was not altered. Quantitative RT-PCR analysis indicated that CSE decreased the expression of toll-like receptor (TLR)-7 and interferon regulatory factor (IRF)-7 in RSV-infected pDC. Furthermore, determination of IRF-7 phosphorylation by flow cytometry showed that CSE prevented IRF-7 activation. These data provide evidence that cigarette smoke suppresses key pDC functions upon viral infection by a mechanism that involves downregulation of TLR7 expression and decreased activation of IRF-7.

Cigarette smoke suppresses TLR-7 stimulation in response to virus infection in plasmacytoid dendritic cells.

Exposition gegen&uuml;ber Tabakrauch Rauch (ETS) ist eine Zunahme der H&auml;ufigkeit und schwere von Infektionen der Atemwege, einschlie&szlig;lich Bronchiolitis, einer klinischen Syndrom des Kindesalters, die durch Viren wie respiratory-syncytial-Virus (RSV) zugeordnet. Die Mechanismen, durch die ETS das Risiko von viralen Infektionen der Atemwege erh&ouml;ht, sind weitgehend unbekannt. Ein wichtiger Effektor fr&uuml;he antivirale und immunstimulierendes Integrationsma&szlig;nahmen ist Interferon-&alpha; (IFN-&alpha;), die stark von Plasmacytoid dendritische Zellen (pDC) produziert wird. In dieser Arbeit haben wir die Wirkung von Zigarettenrauch-Extrakt (CSE) auf menschliche pDC Immunit&auml;t als Reaktion auf eine virale Infektion der Atemwege festgestellt. Wir fanden, dass CSE RSV-induzierte IFN-&alpha; in pDC sowie die Freisetzung von IL-1&beta; gehemmt, IL-10 und CXCL10. Jedoch wurde die Produktion von zus&auml;tzlicher Zytokine und Chemokine wie IL-6, TNF-&alpha;, CCL2, CCL3, CCL5 und CXCL8 nicht ge&auml;ndert. Quantitative RT-PCR-Analyse ergab, dass CSE die Expression von Toll-Like-Rezeptor (TLR)-7 und Interferon ordnungspolitischen Faktor (IRF)-7 im RSV-infizierten pDC abgenommen. Ferner zeigte die Bestimmung der IRF-7 Phosphorylierung von Durchflusszytometrie CSE IRF-7-Aktivierung verhindert. Diese Daten belegen, dass Zigarettenrauch wichtige pDC Funktionen auf virale Infektion durch einen Mechanismus unterdr&uuml;ckt, die Heraufregulation TLR7 Meinungs&auml;u&szlig;erung und verminderte Aktivierung des IRF-7 beinhaltet.

Zigarettenrauch unterdr&uuml;ckt TLR-7 Stimulierung als Reaktion auf Virusinfektion in Plasmacytoid dendritische Zellen.

Chemokines exert their function by binding the GPCR class of receptors on leukocytes and cell surface GAGs in target tissues. Most chemokines reversibly exist as monomers and dimers, but very little is known regarding the molecular mechanisms by which the monomer-dimer equilibrium modulates in vivo function. For the chemokine CXCL8, we recently showed in a mouse lung model that monomers and dimers are active and that the monomer-dimer equilibrium of the WT plays a crucial role in regulating neutrophil recruitment. In this study, we show that monomers and dimers are also active in the mouse peritoneum but that the role of monomer-dimer equilibrium is distinctly different between these tissues and that mutations in GAG-binding residues render CXCL8 less active in the peritoneum but more active in the lung. We propose that tissue-specific differences in chemokine gradient formation, resulting from tissue-specific differences in GAG interactions, are responsible for the observed differences in neutrophil recruitment. Our observation of differential roles played by the CXCL8 monomer-dimer equilibrium and GAG interactions in different tissues is novel and reveals an additional level of complexity of how chemokine dimerization regulates in vivo recruitment.

The monomer-dimer equilibrium and glycosaminoglycan interactions of chemokine CXCL8 regulate tissue-specific neutrophil recruitment.

Chemokine &uuml;ben ihre Funktion durch die Bindung der GPCR-Klasse Rezeptoren auf Leukozyten und Handy-Oberfl&auml;che GAGs in Zielgeweben. Die meisten Chemokine reversibel als Monomere und Dimere vorhanden sein, aber ist sehr wenig bekannt &uuml;ber die molekularen Mechanismen, mit denen das Monomer-Dimer Gleichgewicht in-vivo-Funktion moduliert. F&uuml;r die Chemokine CXCL8 zeigten wir vor kurzem in einem Mausmodell der Lunge, dass Monomere und Dimere aktiv sind und dass das Monomer-Dimer Gleichgewicht des WT eine entscheidende Rolle spielt bei der Regulierung von neutrophil Rekrutierung. In dieser Studie zeigen wir, dass die Monomere und Dimere auch sind aktiv in der Maus Peritoneum aber, dass die Rolle der Monomer-Dimer Gleichgewicht unterscheidet deutlich zwischen Gewebe und sofern Mutationen im GAG-Bindung R&uuml;ckst&auml;nde CXCL8 weniger aktiv in das Bauchfell, aber mehr aktiv in der Lunge. Wir schlagen vor, Gewebe-spezifischen Unterschiede in Chemokine gradient-Formation, die aus Gewebe-spezifischen Unterschiede in der GAG-Interaktionen, f&uuml;r die beobachteten Unterschiede des neutrophil-Recruiting zust&auml;ndig sind. Unsere Beobachtung der differenziellen Rollen gespielt von CXCL8 Monomer-Dimer Gleichgewicht und GAG-Interaktionen in verschiedenen Geweben ist Roman und enth&uuml;llt ein zus&auml;tzliches Ma&szlig; an Komplexit&auml;t wie Chemokine Dimerisierung in-vivo Rekrutierung regelt.

Die Monomer-Dimer Gleichgewicht und Glykosaminoglykane Wechselwirkungen zwischen Chemokine CXCL8 regulieren Gewebe-spezifischen neutrophil Rekrutierung.

Article	Year
Monomeric and dimeric CXCL8 are both essential for in vivo neutrophil recruitment. PloS one\| PubMed ID: 20668677	2010
Antigen presentation by a macrophage-like cell line persistently infected with respiratory syncytial virus. Virus research\| PubMed ID: 14687952	2004
Activity and regulation of alpha interferon in respiratory syncytial virus and human metapneumovirus experimental infections. Journal of virology\| PubMed ID: 16051812	2005
Human metapneumovirus induces a profile of lung cytokines distinct from that of respiratory syncytial virus. Journal of virology\| PubMed ID: 16282501	2005
Differential response of dendritic cells to human metapneumovirus and respiratory syncytial virus. American journal of respiratory cell and molecular biology\| PubMed ID: 16284360	2006
Antioxidant treatment ameliorates respiratory syncytial virus-induced disease and lung inflammation. American journal of respiratory and critical care medicine\| PubMed ID: 17008643	2006
Differential activation of human monocyte-derived and plasmacytoid dendritic cells by West Nile virus generated in different host cells. Journal of virology\| PubMed ID: 17913823	2007
Inhibition of respiratory syncytial virus infections with morpholino oligomers in cell cultures and in mice. Molecular therapy : the journal of the American Society of Gene Therapy\| PubMed ID: 18443602	2008
T lymphocytes contribute to antiviral immunity and pathogenesis in experimental human metapneumovirus infection. Journal of virology\| PubMed ID: 18562525	2008
Cigarette smoke condensate enhances respiratory syncytial virus-induced chemokine release by modulating NF-kappa B and interferon regulatory factor activation. Toxicological sciences : an official journal of the Society of Toxicology\| PubMed ID: 18723827	2008
Subversion of pulmonary dendritic cell function by paramyxovirus infections. Journal of immunology (Baltimore, Md. : 1950)\| PubMed ID: 19234204	2009
Cigarette smoke suppresses TLR-7 stimulation in response to virus infection in plasmacytoid dendritic cells. Toxicology in vitro : an international journal published in association with BIBRA\| PubMed ID: 21435390	2011
The monomer-dimer equilibrium and glycosaminoglycan interactions of chemokine CXCL8 regulate tissue-specific neutrophil recruitment. Journal of leukocyte biology\| PubMed ID: 22140266	2012

Antonieta Guerrero-Plata

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