方法文章

酶响应型角鲨烯-西达本胺纳米颗粒治疗胰腺癌的开发与疗效研究

DOI：

10.3791/69875

⸱

2026年3月13日

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1School of Pharmaceutical Sciences, Zhejiang Chinese Medical University, 2Huzhou Institute for Food and Drug Control, 3Academy of Chinese Medical Sciences, Zhejiang Chinese Medical University, 4Institute for Innovation in Modern Traditional Chinese Medicine, The First Affiliated Hospital of Zhejiang Chinese Medical University, Zhejiang Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine

* These authors contributed equally

本文内容

摘要

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本方案详细阐述了叶酸修饰的角鲨烯-壳聚糖纳米颗粒的合成与表征，评估了其酶响应性药物释放及体外细胞摄取效果，并通过靶向递送应用于增强胰腺癌治疗。

摘要

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

本文介绍了一种针对胰腺导管腺癌（PDAC）致密细胞外基质（ECM）导致小分子药物瘤内渗透受限问题的解决方案。前药策略通过增强药物渗透性和抗肿瘤疗效，为克服这一挑战提供了巨大潜力。角鲨烯（squalene, SQ）是胆固醇生物合成的天然前体，具有优异的生物安全性和生物相容性，当其与化疗药物或生物活性小分子偶联时，可改善亲水性药物的膜相容性并促进细胞摄取。本研究开发了一种新型脂溶性SQ基前药系统：将亲水性抗癌药物西达本胺（chidamide, CHI）通过酰胺键与SQ偶联，该连接键可响应胰蛋白酶和组织蛋白酶B（cathepsin B）——这两种酶在PDAC微环境中高表达。该偶联反应生成两亲性SQ-CHI前药，并进一步自组装形成叶酸（folate, FA）修饰的纳米颗粒（FA-SQ-CHI NPs）。优化后的纳米颗粒具有均匀的流体动力学直径（173.3 ± 1.5 nm）、较低的多分散系数（PDI：0.181 ± 0.18）、高达59.0% ± 0.77%的载药量以及稳定的Zeta电位（-13.10 ± 0.86 mV）。 体外 释放研究表明，在含有0.25%胰酶的条件下，纳米颗粒（NPs）在72小时内实现了80.2% ± 4.22%的累积药物释放；而在无酶、pH调节至4.5或7.4的缓冲液中，药物释放率仅为33%–38%。细胞摄取实验证实，叶酸（FA）修饰显著提高了细胞内递送效率，在12–24小时时间点，胰腺导管腺癌细胞（PSN-1和CFPAC-1）中荧光强度比非靶向纳米颗粒高出1.8–2.3倍。本实验方案提供了前药合成与表征的完整方法学。 体外 酶响应性释放动力学评估，以及治疗效果和组织穿透能力的比较分析，突显了该纳米载体在靶向递送、高载药量和酶触发控释方面的核心优势。

引言

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胰腺导管腺癌（PDAC）是一种高度恶性的消化道肿瘤，其发病率几乎等于死亡率，5年生存率仅为8%–9%1。复杂的肿瘤微环境（TME）是PDAC的典型特征2。它主要由异常的细胞外基质（ECM）、活化的癌症相关成纤维细胞（CAFs）以及高度免疫抑制的细胞环境组成。PDAC的ECM富含I型胶原蛋白。其成分的改变和结构的异常均促进肿瘤进展，并与不良预后相关3。CAFs是最丰富的间质细胞，包含功能不同的亚型，例如产生基质的myCAFs和具有炎症特性的iCAFs，这些亚型表现出表型可塑性4。

从免疫学角度来看，胰腺导管腺癌（PDAC）的肿瘤微环境（TME）主要由促进肿瘤发展的髓系细胞主导，而具有抗肿瘤作用的淋巴细胞则数量稀少或功能异常。成熟的B淋巴细胞也被证实参与免疫抑制作用3,4。这些成分共同构成了多重治疗障碍。致密的间质组织具有高组织液压力的特征，形成显著的渗透屏障，严重阻碍治疗药物向肿瘤深部区域的递送，从而大幅限制了化疗药物的临床疗效5。因此，开发能够克服这一间质屏障并深入穿透胰腺肿瘤组织的药物递送系统至关重要。

近年来，角鲨烯（squalene, SQ）作为一种胆固醇生物合成的天然前体，因其优异的生物安全性和生物相容性而受到广泛关注6。由于角鲨烯具有高度疏水性，可与亲水性药物偶联形成两亲性前药，从而改善亲水性小分子药物与细胞膜的生物相容性，并提高其细胞摄取效率7。先前的研究表明，角鲨烯可与多种化疗药物（如顺铂、紫杉醇和吉西他滨）共价偶联，形成具有高载药量的前药纳米颗粒，从而增强药物向实体瘤的递送效果8,9。这些特性凸显了角鲨烯在药物递送系统开发中的广阔应用潜力。

为了增强对肿瘤的靶向性，本研究采用叶酸（FA）作为靶向配体。叶酸是一种水溶性维生素，在一碳代谢、生物合成10、氧化还原稳态11以及甲基化反应12中发挥关键作用。通过其羧基将叶酸偶联至纳米载体，可实现对叶酸受体（FR）的特异性识别与结合，并进一步介导受体介导的内吞作用13。Zheng 等人14利用肿瘤细胞的增强通透性和滞留效应，通过蛋白质印迹和免疫组织化学方法检测了胰腺癌、正常胰腺、邻近组织及慢性胰腺炎中叶酸受体α（FRα）的表达情况，并分析了其与临床病理特征的相关性。结果显示，在76例胰腺癌病例中，94.7%（72/76）呈FRα表达，且表达水平与转移相关，而在正常胰腺组织中则无表达。经叶酸修饰的纳米颗粒可选择性地在FR阳性组织中富集，从而实现分子靶向治疗。

西达本胺（CHI）是一种新型组蛋白去乙酰化酶抑制剂。临床前研究显示，它对胰腺癌和乳腺癌等实体瘤具有显著的抗肿瘤活性，并可逆转肿瘤细胞的耐药性。15,16然而，其强亲水性导致进入肿瘤微环境的渗透效率较低，并在实体瘤组织中分布不佳，这严重限制了其在胰腺癌临床治疗中的应用潜力5以西达本胺（CHI）为模型药物，本研究提出通过将CHI与SQ偶联并进一步修饰叶酸（FA）来制备自组装纳米颗粒。该策略旨在通过克服CHI在肿瘤微环境中的渗透性差以及在实体瘤组织内分布不均的问题，从而提高其对胰腺癌的抗肿瘤疗效。此外，通过评估 体外 CHI在胰腺癌细胞系中的疗效，该方法有望显著增强CHI——一种典型的亲水性小分子药物——在胰腺肿瘤微环境中的渗透性和细胞毒性作用，从而为指导基于CHI的胰腺癌治疗提供实验依据。

本研究详细阐述了制备用于胰腺癌治疗的CHI-SQ-PEG-FA自组装前药纳米粒子的实验步骤。具体而言，我们描述了CHI-SQ-PEG-FA纳米粒子制备工艺的优化及其表征方法，以及 体外 药物释放研究。该过程包括：首先，采用单因素实验方法优化配方，确定最佳粒径和载药量；其次，利用UPLC和MTS检测对纳米颗粒进行表征；最后，建立一个 体外 共培养肿瘤球模型。利用香豆素-6（C6）作为靶向纳米颗粒中的荧光探针，我们进一步验证了纳米颗粒在三维肿瘤球体内的穿透与分布，并获取相关数据。

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方案

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1. SQ-CHI 和 SQ-PEG-FA 的合成

  1. SQ-CHI的合成：称取120.4 mg（0.3 mmol）1,1',2-三去甲鲨烯酸，溶于1 mL N,N-二甲基甲酰胺（DMF）中。依次加入NHS（46 mg，0.4 mmol）和EDCI（72 mg，0.38 mmol），在氮气保护下反应90分钟。
  2. 将西达本胺（58.56 mg，0.15 mmol）溶于1 mL DMF中，逐滴加入上述反应体系。在氮气氛围下室温搅拌反应72小时。
  3. 反应完成后，在5–15 kPa的减压条件下蒸发溶剂，得到粗产物。通过快速柱层析纯化粗产物，洗脱体系为二氯甲烷/甲醇（DCM/MeOH），采用梯度洗脱（99:1、99:5、85:5）。
  4. SQ-CHI的结构验证：将合成的SQ-CHI产物置于玻璃小瓶中，在干燥器中真空干燥24小时。将产物溶于约1 mL氘代氯仿（CDCl3）中，转移至核磁共振样品管。进行1H NMR分析以确认产物的化学结构17。
  5. SQ-PEG-FA的合成：将41.12 mg 1,1',2-三去甲鲨烯酸溶于35 µL DMF中。依次向该溶液中加入N-羟基琥珀酰亚胺（NHS，15.71 mg）和1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺（EDCI，24.59 mg）。
  6. 在氮气氛围下反应90分钟。将20 mg FA-PEG-NH2溶于35 µL DMF中，逐滴加入反应混合物中。
  7. 将所得混合物在氮气保护下室温搅拌72小时。使用3 kDa截留分子量的超滤离心管，在5,200 × g 条件下离心30分钟，纯化粗产物以去除未反应的游离酸。将纯化后的SQ-PEG-FA复合物水溶液置于玻璃小瓶中，在-50 °C预冷冻。将预冻溶液在冷冻干燥机中冻干，得到SQ-PEG-FA复合物的冻干粉末。

2. SQ-PEG-FA 结构的验证

  1. 将冻干的 SQ-PEG-FA 复合物置于 2 mL 离心管中，在干燥器中真空干燥 24 小时。将产物溶于约 1 mL 的氘代二甲基亚砜（DMSO-d6）中，并转移至核磁共振样品管中。进行 1H NMR 分析以确认复合物的化学结构。
  2. SQ-CHI-PEG-FA 纳米颗粒的制备优化与表征
  3. 称取 6.64 mg SQ-CHI，溶于 2 mL 无水乙醇中，配制成 3.32 mg/mL（4.3 µM）的储备液。
  4. 在搅拌条件下，将 SQ-CHI 乙醇储备液（1、0.2、0.1 或 0.05 mL）逐滴加入 1 mL 去离子水中。搅拌 5 分钟后，通过减压蒸发除去乙醇。将所得混合物超声处理 30 分钟，得到 CHI-SQ 纳米颗粒悬浮液。使用 Zetasizer 测定纳米颗粒的流体动力学直径和多分散指数（PDI），以确定最佳配方18。
  5. 在不同搅拌时间（0、5、10 或 20 分钟）后，将 0.1 mL SQ-CHI 乙醇储备液在搅拌下逐滴加入 1 mL 去离子水中。在相应搅拌时间结束后，通过减压蒸发除去乙醇，随后超声处理 30 分钟，获得 CHI-SQ 纳米颗粒悬浮液。测定其流体动力学直径和 PDI，以确定最佳搅拌时间。
  6. 在搅拌 5 分钟后，将 0.1 mL SQ-CHI 乙醇储备液逐滴加入 1 mL 去离子水中。搅拌结束后，通过减压蒸发除去乙醇。对所得混合物进行不同时间（0、5、20 或 30 分钟）的超声处理，得到 CHI-SQ 纳米颗粒悬浮液。测定其流体动力学直径和 PDI，以确定最佳超声时间。
  7. 根据上述结果确定最佳条件：此处所得水与储备液的体积比为 10:1，搅拌时间为 5 分钟，超声时间为 30 分钟。所有实验均独立重复三次，以确保结果可靠性。
  8. 采用单因素法，在保持其他参数不变的条件下，依次改变以下因素，评估其对纳米颗粒粒径分布和Zeta电位的影响：组分质量比（SQ-CHI : SQ-PEG-FA = 1:0, 1:0.05, 1:0.5, 1:0.7）、相体积比（水相 : 有机相 = 1:1, 1:5, 1:10, 1:20）以及超声时间（5、15、30、45 分钟）。
  9. 根据优化后的方案，将 SQ-CHI 与 SQ-PEG-FA 储备液按确定比例混合。在持续搅拌下，将该混合液逐滴加入去离子水中。继续搅拌 5 分钟以确保充分混合。通过减压蒸发除去乙醇，随后探头超声处理 30 分钟，得到最终的 CHI-SQ-PEG-FA 纳米颗粒悬浮液。
  10. 采用激光粒度分析仪通过动态光散射法测定纳米颗粒的流体动力学直径、粒径分布（PDI）和Zeta电位。通过透射电子显微镜（TEM，150,000 倍放大）和扫描电子显微镜（SEM，80,000 倍放大）观察纳米颗粒的形貌。
  11. 采用超高效液相色谱法（UPLC）测定载药量
  12. 设定色谱条件如下：C18 色谱柱（2.1 mm × 50 mm，1.7 µm）；流动相：0.1% 甲酸水溶液-乙腈（75:25，v/v）；检测波长：258 nm；流速：0.2 mL/min；柱温：23 °C；进样量：5 µL；运行时间：10 分钟。
  13. 重新分散 CHI-SQ-PEG-FA 纳米颗粒悬浮液，并在 7,500 ×g 条件下离心 30 分钟。收集上清液，经 0.22 µm 微孔滤膜过滤。将所得滤液作为待测溶液。在指定色谱条件下进样分析。根据滤液中测得的 CHI 浓度，计算纳米颗粒的载药量。

3. 体外 药物释放研究

  1. 准确吸取2 mL新配制的CHI储备液或CHI-SQ-PEG-FA纳米颗粒悬液，加入截留分子量为3 kDa的透析袋中。
  2. 将透析袋浸入含有不同浓度胰酶（0%、0.05%、0.1%、0.25%）的释放介质中。在预定的时间点（0.1、0.5、1、2、4、6、8、10、12、24、30、36、48、72 h），从释放介质中取出1 mL样品，并立即补充等体积预热的新鲜介质，以维持沉降条件。
  3. 使用UPLC方法（色谱条件见第3节）测定所有样品中CHI的浓度，并计算药物的累积释放量。
  4. 使用乙酸铵缓冲液（pH 4.5）作为释放介质。准确移取2 mL纳米颗粒悬液至透析袋（3 kDa）中，直接向透析袋内加入不同活性单位（0、0.7、1.4、2.8 U）的组织蛋白酶B。将透析袋浸入40 mL释放介质中，在37 ± 0.5 °C、75 rpm条件下于恒温振荡器中孵育。在预设时间点（0.1、0.5、1、2、4、6、8、10、12、24、30、36、48、72 h）取出1 mL样品，并立即补充等体积同pH值的新鲜预温介质，以维持体系平衡。
  5. 将收集的样品通过0.22 µm微孔滤膜过滤。采用UPLC分析滤液以测定药物浓度。计算CHI的累积释放百分比，并绘制药物释放曲线。
  6. 准确吸取2 mL的CHI储备液或CHI-SQ-PEG-FA纳米颗粒悬液，加入透析袋（截留分子量3 kDa）中。将透析袋浸入含不同浓度胰酶（0%、0.05%、0.1%、0.25%）的释放介质中。在预定时间点（0.1、0.5、1、2、4、6、8、10、12、24、30、36、48、72 h）取出1 mL样品，并立即补充等体积新鲜预热的释放介质，以维持沉降条件。
  7. 采用超高效液相色谱法（UPLC）测定样品中的药物浓度。计算药物的累积释放量，并绘制释放曲线。
  8. 在 PBS 中评估纳米颗粒的稳定性
  9. 将CHI-SQ-PEG-FA NPs与PBS（pH 7.4）按1:20（v/v）的比例混合。在37 ± 0.5 °C、100 rpm条件下，将混合物置于恒温振荡器中孵育。于1、3、6、12、18、24、30、36、42、48、72、96 h取样，测定其流体动力学直径和Zeta电位。
  10. 通过MTS法进行细胞增殖检测
  11. PSN-1 胰腺癌细胞在完全 RPMI-1640 培养基中培养。取对数生长期细胞，用 0.25% 胰蛋白酶在 37 °C 消化后收集，并重悬为 4-6 × 10⁵ 个/mL 的细胞悬液。4 细胞/mL 的完全培养基中。将细胞悬液以每孔 100 µL 接种至 96 孔板，在 37 °C、5% CO₂ 条件下预培养 2 h2 孵育器中孵育，以确保细胞完全贴壁。
  12. 吸弃原始培养基。设置对照组（空白培养基）和多个浓度梯度的西达本胺处理组（0.2、2、8、10、20、80 pM），每组设三个复孔。每孔加入100 µL空白培养基或含药培养基，将细胞培养板转移至培养箱中继续培养。实验组分别加入100 µL含有不同浓度（0.2、2、8、10、20、80 pM）的SQ-PEG、游离CHI、CHI-SQ-PEG纳米颗粒或CHI-SQ-PEG-FA纳米颗粒的新鲜培养基，对照组加入等体积的空白培养基。继续培养96 h后，吸弃各孔中的含药培养基。
  13. 向每个孔中加入20 µL MTS工作液，随后孵育4 h。将96孔板振荡15 s以确保溶液均匀，立即使用酶标仪在490 nm波长下测定各孔的吸光度（A值）。通过以下步骤计算细胞增殖率：用药物处理组的OD值减去空白组的OD值，再除以空白培养基组的OD值与空白组的OD值之差，最后乘以100。
  14. 建立一种 体外 共培养肿瘤球模型
  15. 将对数生长期的PSN-1细胞与HPSC细胞按2:7的比例混合，接种于超低吸附96孔板中，每孔细胞密度为5,000个。待肿瘤球形成后，用不同纳米制剂（香豆素6标记的CHI-SQ-PEG/C6 NPs和CHI-SQ-PEG-FA/C6 NPs）或DMSO（作为对照）处理肿瘤球，并分别共孵育48、96和144小时以评估药物疗效。
  16. 孵育后，向每孔中加入等体积的细胞活力检测试剂。将培养板置于水平摇床上，振荡15分钟以确保细胞完全裂解，随后在室温避光条件下孵育30分钟。
  17. 将细胞裂解液转移至黑色96孔板中。使用多功能酶标仪在562 nm波长下检测化学发光信号，以定量细胞活力。
  18. 纳米颗粒细胞摄取机制的研究
  19. 制备负载香豆素-6（C6）作为荧光探针的靶向纳米颗粒（CHI-SQ-PEG-FA/C6 NPs）和非靶向纳米颗粒（CHI-SQ-PEG/C6 NPs）。将PSN-1细胞常规培养24小时，使其处于对数生长期并形成单层细胞。用乙醇溶解香豆素-6，配制200 µg/mL的母液。取10 µL该溶液，与SQ-CHI和SQ-PEG-FA（或SQ-PEG）按1:0.7的比例混合，然后在搅拌条件下逐滴加入去离子水中。搅拌5分钟，通过蒸发去除乙醇，超声处理30分钟。最后，通过超滤（3 kDa，12,000 rpm，20分钟）纯化，获得目标产物。
  20. 细胞处理如下：实验组分别加入含游离C6、CHI-SQ-PEG/C6纳米颗粒或CHI-SQ-PEG-FA/C6纳米颗粒的无血清培养基（终浓度为CHI 5 µmol/L，C6 2.6 µmol/L），对照组加入等体积的空白培养基。
  21. 孵育 4 h、12 h 和 24 h 后，吸除含药物的培养基，使用 4',6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）对细胞核进行染色19.
  22. 在荧光显微镜下进行观察（40倍物镜，激发波长Ex=360 nm，发射波长Em=477 nm）。通过检测香豆素-6的荧光强度评估纳米颗粒的细胞摄取情况。

4. 统计分析

  1. 本研究中所有实验均需至少进行3次重复。使用GraphPad Prism软件进行统计分析。实验数据以均值±标准误（SD）表示，组间比较根据情况采用Student t检验、单因素方差分析（one-way ANOVA）或Wilcoxon检验。统计学显著性阈值设定为 P < 0.05。

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结果

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本研究成功设计并系统评价了一种新型靶向纳米药物递送系统——基于西达本胺鲨烯酰化前药的自组装纳米粒（CHI-SQ-PEG-FA NPs；图1）。我们合成了CHI-SQ-PEG-FA NPs（图2），并系统评估了油水相比例（图3A）、搅拌时间（图3B）和超声条件（图3C）等不同参数对纳米粒粒径和多分散系数（PDI）的影响。此外，通过显微镜观察了CHI-SQ-PEG NPs和CHI-SQ-PEG-FA NPs的形态学特征（图4）。该系统在物理特性、药物释放行为（图5）、三维肿瘤模型中的疗效（图6）以及细胞摄取能力（图7

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讨论

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

本研究提供了一种基于纳米颗粒自组装的低腰系统的实用分步实施指南。本研究获得的自组装纳米颗粒呈现出规则的球形形貌、良好的分散性、均一的粒径分布、高载药量和包封率，并表现出满意的稳定性21采用PSN-1/HPSC三维肿瘤类球体共培养模型评估纳米颗粒的穿透能力，结果显示叶酸修饰的CHI-SQ-PEG-FA纳米颗粒可更有效地穿透至肿瘤类球体的核心区域。此外，该纳米颗粒在肿瘤类球体内的滞留时间显著延长。这种增强的滞留效应可归因于角鲨烯化后CHI的脂溶性显著提高。这些纳米颗粒通过肿瘤细胞的内吞作用及细胞间转运促进细胞摄取，从而实现对肿瘤微环境的深层渗透22同时，通过叶酸受体介导的内吞作用，以叶酸为靶向基团的表面修饰可进一步增强纳米颗粒被胰腺癌细胞的内化。23通过细胞表面叶酸受体的高表达所介导的通路，最终实现改善 体内 药物疗效24.

自组装纳米颗粒具有诸多优势，如高载药量、低毒性、增强的...

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披露

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

作者声明无利益冲突。

致谢

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

本工作获得浙江省自然科学基金资助（LZ23H290001，LY19H280001）；国家自然科学基金资助（82474338 和 82274364）；浙江省“三农九方”农业科技协作计划项目（2025SNJF075）；湖州市科技计划公益性研究项目（2021GZ261）；以及浙江省教育厅一般科研项目（Y202456442，2025YKJ10）。

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材料

本文使用的材料清单
姓名公司目录编号评论
0.25% 胰蛋白酶-EDTAGibco (USA)25200072
1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐（EDCI）Sigma-Aldrich (USA)E6383
2 mL 冻存管Corning (USA)430488
96 孔细胞培养板Corning (USA)3598
无水乙醇中国医药集团有限公司（Sinopharm）100092680
丙酮中国医药集团有限公司（Sinopharm）32201-2.5L
乙腈Tedia (USA)A998-4HPLC 级
乙酸铵中国医药集团有限公司（Sinopharm）10002861
无水硫酸钠Sigma-Aldrich (USA)31481
生物安全柜Thermo Fisher Scientific, USA1380, 1332, 1356
细胞培养瓶Corning (USA)CLS430372
细胞培养孵育箱Thermo Fisher Scientific, USAHERA51901126
西达本胺（CHI）深圳微芯生物医药科技有限公司（中国）纯度 >95%
Cytation 5 多功能微孔板读数仪BioTek, USACYT5MV
DF-101S 恒温磁力搅拌器郑州科创仪器有限公司，中国
二氯甲烷中国医药集团有限公司（Sinopharm）80047318
二甲基亚砜（DMSO）Sigma-Aldrich (USA)D2650
二噁烷阿拉丁（中国）D116156-5ml
DMEM 培养基Gibco (USA)12100046
杜氏磷酸盐缓冲液（DPBS）Gibco (USA)14040141
乙酸乙酯中国医药集团有限公司（Sinopharm）10009460
乙醚中国医药集团有限公司（Sinopharm）
FA2004B 电子天平上海天美衡器仪器有限公司，中国FA2004B
胎牛血清（FBS）Gibco (USA)10099141C
叶酸-聚乙二醇-胺（FA-PEG-NH2）上海朋澍生物科技有限公司（中国）PS2-NFA-2000
甲酸阿拉丁（中国）F112034HPLC 级
冷冻干燥机Thermo Fisher Scientific, USA
人组织蛋白酶 BSigma-Aldrich (USA)SRP0289
人胰腺癌细胞系（PSN-1, CFPAC-1）美国模式培养物集存库（ATCC）CRL-3211, CRL-1918
人胰腺星状细胞（HPaStec, HPSC）美国模式培养物集存库（ATCC）
人胰蛋白酶Sigma-Aldrich (USA)
盐酸中国医药集团有限公司（Sinopharm）CFSR-10011008
倒置显微镜Olympus, 日本IX83
Iscove 改良杜氏培养基（IMDM）Gibco (USA)12440053
IX 1000 涡旋混合器 杭州瑞诚仪器有限公司，中国IX 1000
甲醇中国医药集团有限公司（Sinopharm）M433287-10L
甲醇 Tedia (USA)MS1922-001HPLC 级
微量离心管（1.5/2.0 mL）Axygen (USA)MCT-150-C
移液器（20, 100, 和 1000 μL）Thermo Fisher Scientific, USA4642050, 4642070, 4642090
Mill-Q 水纯化系统 Millipore, USAZR0Q00800
 MTS 检测试剂盒（3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四氮唑）Promega (USA)G3582
N,N-二甲基甲酰胺（DMF）阿拉丁（中国）
N-溴代琥珀酰亚胺（NBS）Sigma-Aldrich (USA)B81255
N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）Sigma-Aldrich (USA)56480
Optima Max 超速离心机 Beckman, USA393490
青霉素/链霉素溶液Gibco (USA)15140-122
高碘酸Sigma-Aldrich (USA)P7875
石油醚中国医药集团有限公司（Sinopharm）
吩嗪甲基硫酸盐（PMS）Sigma-Aldrich (USA)3180806
磷酸盐缓冲液（PBS）Gibco (USA)70011069
聚乙二醇-胺（PEG-NH2）上海朋澍生物科技有限公司（中国）PG2-AM-20k
RPMI-1640 培养基Gibco (USA)31800022
硅胶粉末Sigma-Aldrich (USA)53698300 目
碳酸氢钠Sigma-Aldrich (USA)401676
氯化钠中国医药集团有限公司（Sinopharm）10019318
二水合重铬酸钠Sigma-Aldrich (USA)1.93689
角鲨烯Sigma-Aldrich (USA)Y0002131
无菌离心管（15 和 50 mL）Corning (USA)430791, 430828
硫酸中国医药集团有限公司（Sinopharm）10021618
四氢呋喃中国医药集团有限公司（Sinopharm）34865-4X4L分析纯
超滤离心管（截留分子量：3.5 kDa）Beckman, USA344088

参考文献

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