方法文章

不同提取方法对 体外 生物活性谱 Terfezia claveryi

DOI：

10.3791/69950

⸱

2026年3月20日

 ,  ,  ,  , 
1Department of Biophysics, Department of Basic Medical Sciences, Faculty of Medicine, Kirsehir Ahi Evran University, 2Department of Genetics and Bioengineering, Faculty of Engineering and Architecture, Kirsehir Ahi Evran University, 3Department of Physiology, Gulhane Faculty of Medicine, University of Health Sciences, 4Department of Medical Services and Techniques, Medical Laboratory Techniques Program, Vocational School of Health Services, Kirsehir Ahi Evran University, 5Department of Field Crops, Faculty of Agriculture, Kirsehir Ahi Evran University

本文内容

摘要

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

该 体外 生物活性 Terfezia claveryi 提取物的特性取决于生物物理提取方法和溶剂极性。采用浸渍辅助提取法（MAE）所得的水提物表现出最强的抗氧化活性，而索氏提取法（SE）所得提取物对SH-SY5Y细胞的细胞毒性更强。这些结果表明，不同提取方法在提取效果上存在显著差异 体外 生物活性 Terfezia claveryi 提取物.

摘要

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Terfezia claveryi 是一种传统上在干旱地区食用的可食用沙漠块菌。近年来，由于其潜在的抗氧化、抗菌和治疗特性，该块菌引起了越来越多的科学关注，表明其在食品和健康相关领域具有应用前景。然而，尽管其生物活性的证据日益增多，不同提取策略对其生物活性化合物回收率及最终产物的影响仍需进一步研究。 体外 生物活性谱 Terfezia claveryi 在文献中尚未阐明。在本研究中， 体外 生物活性 Terfezia claveryi 采用不同提取方法和不同极性的溶剂获得的提取物被进行了评估。测定提取率，并利用已建立的测试系统对所得提取物进行抗氧化、抗菌、抗生物膜及细胞毒性活性评价。抗氧化能力通过2,2-二苯基-1-苦基肼（DPPH）、2,2′-联氮-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)（ABTS）和铁还原抗氧化能力（FRAP）试验进行测定，而细胞毒性效应则在SH-SY5Y神经母细胞瘤细胞中进行研究。提取率因提取方法和溶剂极性而异，其中采用超声辅助提取法（UAE）制备的水提物提取率最高（18.40%）。结果表明，抗氧化活性因提取方法不同而存在显著差异，采用浸渍辅助提取法（MAE）获得的水提物富含酚类化合物，并表现出最强的自由基清除能力。对该提取物进行的LC-MS/MS分析鉴定出9种酚类化合物，其中奎宁酸和绿原酸为主要成分。相比之下，索氏提取法获得的提取物在SH-SY5Y细胞中诱导出更强的细胞毒性效应。不同提取方法在抗菌和抗生物膜活性方面的响应差异相对较小，表明这些活性对提取策略的依赖性较弱。总体而言，这些结果表明，物理化学提取方法和溶剂选择是决定提取物生物活性的关键因素 体外 生物活性谱 Terfezia claveryi 提取物在抗氧化和细胞毒性活性方面表现出显著效果。

引言

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

利用多种蘑菇物种来促进健康以及预防和治疗疾病的历史可追溯至古代1,2,3。大型真菌通常分为两类：地表生（蘑菇）和地下生（块菌）4。被称为沙漠块菌的Terfezia claveryi（T. claveryi）是世界著名的可食用块菌物种，属于Terfezia属5。T. claveryi通常分布于干旱和半干旱地区，这些地区常见Helianthemum属植物6,7,8,9,10,11。近年来，癌症和神经退行性疾病等慢性疾病的全球负担显著增加，凸显了开发新型、安全且有效治疗药物的迫切需求。根据全球健康报告，癌症仍是全球主要死亡原因之一，而随着人口老龄化，神经退行性疾病发病率持续上升。面对这一日益严重的公共卫生问题，探索来源于真菌和药用植物的天然产物作为潜在生物活性化合物来源，已成为重要的研究方向12。

与此同时，抗微生物耐药性的迅速出现对全球健康构成了另一项重大威胁。耐药性显著降低了传统抗生素的有效性，迫切需要开发替代性的抗微生物策略13。来源于天然资源的次级代谢产物，特别是酚类和多酚类化合物，因其多样的抗微生物机制以及较低的耐药性产生倾向，正受到越来越多的关注14。氧化应激是多种慢性疾病（包括癌症、神经退行性疾病和代谢综合征）发生发展的基本机制之一。活性氧（ROS）的过量产生最终可通过引起DNA损伤、脂质过氧化和蛋白质氧化而破坏细胞稳态。在此背景下，能够清除自由基并调节氧化还原平衡的天然抗氧化剂被认为是在减轻氧化损伤和延缓疾病进展方面具有前景的干预手段15。

松露富含不饱和脂肪酸、蛋白质、矿物质、维生素、氨基酸、酚类物质和多酚类化合物，这些成分已被证实具有抗菌、抗氧化和抗癌特性16,17,18,19,20,21,22,23,24。其抗氧化能力与其清除自由基的有效性密切相关25,26,27。在众多松露种类中，T. claveryi 尤为引人关注，因其可食用的结构、区域经济价值以及据报道富含酚类化合物而具有重要意义23。尽管已有初步证据表明其传统食用历史和生物学活性，但关于提取策略如何影响其化学组成和生物效应的系统性研究仍较为有限。

松露中生物活性化合物的提取效率受到多种提取参数的显著影响，包括所采用的提取技术及溶剂极性。超声辅助提取（UAE）、浸渍辅助提取（MAE）和索氏提取（SE）等生物物理提取方法在能量输入、提取效率以及对极性化合物的选择性方面存在显著差异28然而，大多数研究依赖于单一提取方法或有限的溶剂体系，且鲜有研究对这些方法对结果的影响进行比较分析 体外 生物活性谱 T. claveryi 有限。因此，本研究采用不同极性的溶剂，系统比较多种生物物理提取方法，以评估 体外 生物活性 T. claveryi 提取物。本研究假设提取方法和溶剂极性会导致不同方法在生物活性上的差异。因此，本研究的目的为：（i）比较不同方法和溶剂之间的提取得率，（ii）评估抗氧化和细胞毒活性在不同提取方法下的变异情况，以及（iii）考察抗菌和抗生物膜活性对提取策略的敏感性。

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方案

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

注意：制备和分析 T. claveryi 提取物的整体实验流程在图1中进行了示意图总结。研究中使用的所有材料均在材料表中进行了描述。

1. 真菌材料的鉴定与制备

  1. 材料的采集与处理
    注意：新鲜的 T. claveryi 松露于2023年5月从中安纳托利亚地区的克尔谢希尔省（Türkiye）的草原及沙质、未开垦（非农业）土地上采集。采样在三个不同地点进行：代德利村（38°54′15.8″ N, 34°06′40.3″ E；海拔约1050米）、比于克卡亚帕村（38°53′45.1″ N, 34°19′37.5″ E；海拔约1020米）和阿克贾吉尔村（39°01′39.9″ N, 34°12′39.8″ E；海拔约1100米）。采集地具有半干旱大陆性气候特征，冬季寒冷，夏季炎热干燥，年平均降水量约为380–420 mm。所有样本均在自然出菇季节采集自近期无农业活动的区域，以尽量减少潜在的人为污染。
    1. 选择清洁且无损伤的松露，去皮后用蒸馏水清洗三次。
    2. 将样品切成小块，在阴凉处干燥至恒重（约20天）。
    3. 使用机械研磨机将干燥材料粉碎，并通过328微米（50目）筛网过筛。
    4. 将处理后的样品置于自封袋中，于阴凉、干燥、避光的室温环境中保存，以备后续分析。
  2. T. claveryi 的分子鉴定
    1. 从干燥的 T. claveryi 样本中提取基因组DNA，用于分子鉴定。
    2. 采用分光光度法测定DNA的浓度和纯度。
    3. 通过使用通用引物ITS1（5′-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3′）和ITS4（5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′）扩增内转录间隔区（ITS）序列，进行物种鉴定的聚合酶链式反应（PCR）。
    4. 将PCR扩增产物在1×TAE缓冲液配制的1.5%琼脂糖凝胶上进行电泳分离，并经溴化乙锭染色后在紫外光下观察。
    5. 根据制造商说明书纯化单一条带的PCR产物29，并将纯化的扩增子用于Sanger测序。
    6. 使用重叠群组装程序（CAP）算法将正向和反向测序读长拼接为一致序列。
    7. 通过将获得的一致性ITS序列与公共数据库中的参考序列进行比对，确认物种身份。
      ​注意：T. claveryi 的凭证标本已保留在实验室样本库中以供将来参考。物种鉴定结果经基于ITS的分子分析确认（补充文件1）。

2. 真菌材料制备与提取

  1. 制备 T. claveryi 提取物
    1. 称取约 30 g 干燥的 T. claveryi 粉末
    2. 加入150 mL溶剂（甲醇、丙酮、正己烷、乙酸乙酯或蒸馏水），以保持所有提取方法中固液比恒定。
    3. 所有提取步骤均使用分析纯溶剂。
    4. 在减压条件下使用定性滤纸过滤每种提取物。
    5. 使用旋转蒸发仪在30–45 °C的减压条件下浓缩滤液。
    6. 冷冻干燥（冻干）浓缩提取物，直至完全去除溶剂。
    7. 将干燥的粗提物于 −20 °C 保存，直至进一步分析。
      注意：对所有样本应用相同的提取后处理步骤，以确保方法学的一致性和可比性。
  2. 生物物理提取方法
    1. 机械破碎辅助提取（MAE）
      1. 将粉末置于 T. claveryi 将样品放入密闭的提取容器中。
      2. 在保持溶剂与固体比例恒定的同时，加入选定的溶剂。
      3. 在室温避光条件下孵育混合物72 h。
      4. 保持容器密闭，以防止溶剂蒸发。
      5. 在消化过程中不要施加外部搅动。
      6. 在提取结束时，让混合物静置沉淀。
      7. 在进一步处理之前过滤提取物。
    2. 索氏提取（SE）
      注意：回流过程中需确保冷凝水正常循环，避免干烧加热。
      1. 将粉末样品放入纤维素提取套管中。
      2. 将套管置于与圆底烧瓶相连的索氏提取器提取室中。
      3. 在保持溶剂与固体比例恒定的条件下，向烧瓶中加入选定的溶剂。
      4. 使用温控加热套将溶剂加热至回流。
      5. 持续提取24小时。
      6. 保持提取温度为各溶剂的沸点（正己烷：68.7 °C；乙酸乙酯：77.1 °C；甲醇：64.7 °C；丙酮：56 °C；蒸馏水：100 °C）。
    3. 超声辅助提取（UAE）
      注意：超声处理过程中需持续监测温度，以防止过热。
      1. 将粉末状物质放置 T. claveryi 将样品放入提取容器中。
      2. 在保持溶剂与固体比例恒定的同时，加入选定的溶剂。
      3. 在35 kHz的固定频率和520 W的输出功率下，对混合物进行25分钟的超声处理。
      4. 保持提取温度在约 30 °C。
      5. 每5分钟添加一次冰，以在超声处理期间将温度维持在25–28 °C范围内。
  3. 提取效率
    1. 称量干燥的真菌材料（Wp提取前
    2. 称取干燥的粗提物（Wext溶剂完全去除后。
    3. 使用公式（1）计算提取效率。
      Extraction efficiency formula, W_ext/W_p x 100, used in chemical process analysis calculations.    (1)
    4. 将每种干燥的粗提物重新溶解于相应的溶剂中，配制成浓度标准化为10 mg/mL的储备溶液。
    5. 每次实验前新鲜配制储备液 体外 生物活性实验
      注意：应将所有提取物浓度标准化，以确保在后续生物活性检测中剂量具有可比性。

3. 抗氧化活性测定

  1. 使用 DPPH、ABTS 和 FRAP 方法进行抗氧化活性分析。
  2. 从新配制的储备液中制备五种不同浓度的提取物，浓度范围为 0.25 至 1.0 mg/mL。
  3. 所有测定均进行三次重复，以确保可重复性。
  4. 使用酶标仪通过分光光度法记录吸光度值。
    注意：所有实验均根据已建立的文献方法进行，仅作轻微修改。
  5. DPPH 自由基清除活性
    注意：T. claveryi 提取物的 DPPH 自由基清除活性参照文献所述方法测定，仅作轻微修改30。DPPH 溶液及反应混合物需避光保存。
    1. 用 70% 甲醇配制 DPPH 溶液。
    2. 将 DPPH 溶液在 517 nm 处的吸光度调节至 1.00 ± 0.02。
    3. 将不同浓度的提取物各 50 µL 加入微孔板孔中。
    4. 向每孔中加入 250 µL DPPH 溶液。
    5. 将反应混合物在室温下避光孵育 30 分钟。
    6. 使用酶标分光光度计在 517 nm 处测定吸光度。
    7. 以甲醇作为空白对照，抗坏血酸作为阳性对照。
    8. 绘制剂量-反应曲线并计算 IC₅₀ 值，以量化自由基清除活性。
  6. ABTS 阳离子自由基清除活性
    注意：ABTS 自由基清除实验参照文献所述方法进行，仅作轻微修改31。ABTS⁺ 自由基溶液需至少提前 16 小时配制，并避光保存。
    1. 将反应混合物在室温下避光孵育 16 小时，以生成 ABTS 自由基溶液。
    2. 分析前，将 1 mL ABTS 溶液用 80 mL 乙醇稀释。
    3. 将稀释后的 ABTS 溶液在 734 nm 处的吸光度调节至 0.80 ± 0.02。
    4. 将不同浓度的提取物各 50 µL 加入微孔板孔中。
    5. 向每孔中加入 250 µL ABTS 溶液。
    6. 将混合物在室温下孵育 10 分钟。
    7. 使用酶标分光光度计在 734 nm 处测定吸光度。
    8. 绘制剂量-反应曲线并计算 IC₅₀ 值。
  7. 铁离子还原抗氧化能力（FRAP）实验
    注意：FRAP 实验参照文献提出的方法进行，仅作轻微修改32。FRAP 试剂需在使用前新鲜配制，反应混合物需避光保存。
    1. 根据参考方案配制 FRAP 试剂。
    2. 将不同浓度的提取物各 20 µL 加入微孔板孔中。
    3. 加入 280 µL 新鲜配制的 FRAP 试剂。
    4. 将反应混合物在室温下避光孵育 45 分钟。
    5. 使用酶标分光光度计在 593 nm 处测定吸光度。
    6. 使用 Trolox 作为标准品绘制标准曲线。
    7. 以每克提取物中含有的 Trolox 当量（TE）毫克数表示抗氧化能力。

4. 总酚含量（TPC）分析

注意：采用文献中所述的福林-乔卡特法（Folin–Ciocalteu 法）并稍作修改来测定 T. claveryi 提取物的总酚含量（TPC）33。孵育过程中应避免反应混合物接触光线。碳酸钠溶液需在使用前新鲜配制。

  1. 从新配制的储备液中配制浓度为 1 mg/mL 的提取液。
  2. 用移液器将 25 µL 提取液加入微孔板孔中，加入 75 µL 蒸馏水，然后加入 25 µL 福林-酚试剂（Folin–Ciocalteu reagent）。
  3. 将混合物在室温下孵育 6 分钟。
  4. 向每孔中加入 100 µL 7% (w/v) 碳酸钠溶液。
  5. 将反应混合物在室温下避光孵育 90 分钟。
  6. 使用微孔板分光光度计在 665 nm 处测定吸光度。
  7. 以没食子酸作为标准品绘制标准曲线，并计算总酚含量，结果以每毫升提取液中没食子酸当量（GAE）的毫克数（mg/mL）表示。

5. 使用液相色谱-串联质谱法进行植物化学分析

注意：根据先前发表的色谱方法并稍作修改进行液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）分析34。所有样品和流动相均需通过0.22 µm膜过滤器过滤，并在分析前对流动相进行脱气处理。

  1. 选择总酚含量最高的提取物进行定量植物化学成分分析。
  2. 使用保持在 30°C 的反相 C18 色谱柱进行色谱分离。
  3. 配制流动相：(A) 含 0.1% 甲酸的去离子水，(B) 含 0.1% 甲酸的乙腈；设定流速为 0.4 mL/min，进样体积调整为 5 µL，总运行时间设为 17 min。
  4. 在电喷雾离子化（ESI）条件下进行质谱检测，使用氮气作为干燥气、鞘气和雾化气。
  5. 设定干燥气温度为 350 °C，气体流速为 12 L/min；鞘气温度为 250 °C，气体流速为 5 L/min；雾化器压力调整为 55 psi。
  6. 为每种酚类标准品制备外标校准曲线，并利用相应的校准曲线对分析物进行定量。

6. 抗菌活性测试

注意：根据既定的微生物学实验方案，采用琼脂孔扩散法评估抗菌活性。所有微生物学操作均须在生物安全柜内的无菌条件下进行。使用前后须对所有材料进行灭菌处理。

  1. 选择以下标准菌株进行抗菌测试：Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853、Escherichia coli ATCC 25922、Staphylococcus aureus ATCC 25923、Enterococcus faecalis ATCC 29212、Bacillus cereus ATCC 14579、Staphylococcus epidermidis ATCC 12228、Listeria monocytogenes ATCC 19115、Acinetobacter baumannii ATCC 17978、Shigella dysenteriae ATCC 13313、Klebsiella pneumoniae ATCC 13883 和 Enterobacter aerogenes ATCC 13048。
  2. 将每种细菌菌株接种至胰蛋白胨大豆肉汤（TSB）中，并在最适生长温度下培养，直至达到 OD₆₀₀ = 0.7 的光密度。
  3. 使用无菌棉签将细菌培养物均匀涂布于胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）平板上。
  4. 使用无菌打孔器无菌操作在琼脂中打孔。
  5. 向各孔中加入 100 µL 每种提取物（100 µg/mL）。
  6. 将平板在 37 °C 下培养 18 小时。
  7. 测量各孔周围抑菌圈的直径，以评估抗菌活性。
  8. 所有实验均重复三次，结果以平均值表示。

7. 生物膜抑制

注意：使用结晶紫染色法检测对参考菌株的抗生物膜活性。所有操作均需在无菌条件下进行，并在洗涤步骤中避免扰动已黏附的生物膜。

  1. 选择Escherichia coli ATCC 25922 和Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 作为参考菌株，在TSB中于37 °C培养至对数生长期。
  2. 将细菌悬液调整至OD₆₀₀ = 0.132的光密度。
  3. 将100 µL提取液（0.625–10 mg/mL）移入无菌的96孔聚苯乙烯微孔板中，每孔加入100 µL细菌悬液，并轻轻混匀。
  4. 于37 °C孵育24小时。以仅含TSB的孔作为空白对照，以不含提取物但含细菌悬液的孔作为对照组。
  5. 小心移除非黏附细胞，用蒸馏水洗涤孔板两次，并让其自然风干。
  6. 每孔加入200 µL 0.4%（w/v）结晶紫溶液，孵育30分钟。
  7. 去除多余染料，用蒸馏水冲洗孔板两次，并使其完全干燥。
  8. 加入乙醇以溶解结合的染料，并使用酶标仪在595 nm处测定吸光度。
  9. 使用公式（2）计算抗生物膜活性。
    抗生物膜活性公式；用于计算生物膜减少百分比的方程。    (2)

8. 细胞培养与细胞毒性分析（MTT 法）

注意：根据标准细胞活力实验方案，使用 MTT 法评估细胞毒性效应。所有操作均须在生物安全柜中的无菌条件下进行，且使用前将培养基和试剂预热至 37 °C。

  1. 从经认证的细胞库获取人神经母细胞瘤细胞系 SH-SY5Y，并将细胞培养于添加了 10% 胎牛血清（FBS）、1% 青霉素/链霉素和 1% L-谷氨酰胺的杜尔贝科改良伊格尔培养基（DMEM）中，使用 25 cm2 培养瓶进行培养。
  2. 将细胞置于含 5% CO2 的湿润环境中，于 37 °C 恒温培养，使细胞生长至约 80% 汇合度。
  3. 通过胰酶消化法使细胞脱离，以每孔 2 × 104 个细胞的密度接种于 96 孔板中，孵育 24 小时以促进细胞贴壁。
  4. 用浓度分别为 150、300、600、1200 和 2000 µg/mL 的 T. claveryi 提取物处理细胞，并继续孵育 24 小时。
  5. 移除培养基，每孔加入含 10 µL MTT 溶液的新鲜培养基 100 µL，于 37 °C 孵育 4 小时。
  6. 吸除培养基，每孔加入 100 µL 二甲基亚砜（DMSO）以溶解甲臜结晶，使用酶标仪在 570 nm 波长处测定吸光度。
  7. 所有实验均设三个重复孔。

T. claveryi 提取过程；方法与溶剂示意图；生物活性分析。
图1：实验流程的示意图概述。 请点击此处查看此图的放大版本。

9. 统计分析

  1. 使用适当的统计软件包进行统计分析，并根据情况采用学生氏 t 检验或双因素方差分析（ANOVA）比较对照组与处理组。
  2. 所有数据均以均值 ± 均值标准误（SEM）表示。
  3. 统计学显著性定义为 p < 0.05。
  4. 在图中使用星号表示统计学显著性，具体如下：**** 表示 p < 0.0001，*** 表示 p < 0.001，** 表示 p < 0.01，* 表示 p < 0.05，使用“ns”表示无显著性差异。

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结果

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

多节束丝菌（T. claveryi）的分子鉴定
采用通用引物 ITS1 和 ITS4 对 ITS 区域进行 PCR 扩增，以实现对T. claveryi的分子鉴定。将获得的序列通过 BLAST 算法与 NCBI 数据库中的参考序列进行比对分析，从而实现物种的准确鉴定（补充文件 1）。

提取效率
提取效率因提取方法和溶剂极性而异（表1）。对于微波辅助提取法（MAE），提取效率的下降顺序为：水 > 甲醇 > 乙酸乙酯 > 丙酮 > 正己烷（2.15–15.01%）。索氏提取法（SE）和超声辅助提取法（UAE）表现出相似的溶剂依赖性趋势，提取效率的下降顺序均为：水 > 甲醇 > 乙酸乙酯 > 正己烷 > 丙酮（SE：2.58–9.53%；UAE：3.01–18.40%）。最高的提取效率（18.40%）由UAE方法所得水提物实现，而最低的提取效率（2.15%...

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讨论

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

本研究建立了一个针对T. claveryi的比较性和标准化的提取–生物活性研究平台，证明提取策略是决定其化学组成和生物学功能的关键因素。该实验方案的主要方法学优势在于对提取参数的严格控制，特别是固定的固液比、标准化的溶剂体积、一致的提取后处理步骤，以及在进行生物测定前统一的储备液制备。这些步骤构成了流程中的关键控制点。溶剂体积的差异、溶剂去除不完全或复溶浓度不一致，均可能显著影响抗氧化或细胞毒性比较结果的准确性。因此，保持下游处理条件的一致性，确保了所观察到的生物学差异真实反映了化学组成的定性变化，而非由浓度偏差所致。此外，在超声辅助提取（UAE）和水相热回流提取（SE）过程中对温度的调控至关重要。超声提取中的空化效应会产生局部高能微环境，虽可增强传质效率，但若控制不当，也可能导致敏感代谢物失稳。本研究中采用的间歇性冷却措施，是一种切实可行的技术优化手段，有助于维持酚类物质的稳定性。

提取率结果显示出明显的极性依赖趋势，其中水的提取率最高，正己烷的提取率最低。该模式与已知的溶剂极性指数以及既往研究报道一致，即高极性溶剂更倾向于提取亲水性化合物

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披露

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

作者声明无竞争利益。支持本研究发现的所有数据均包含在主文稿和补充信息文件中。本研究期间生成和分析的数据集可向通讯作者在合理要求下获取。

致谢

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

作者声明本研究未获得任何资金支持。

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材料

本文使用的材料清单
姓名公司目录编号评论
96孔聚苯乙烯微孔板Nest Scientific701001细胞培养/检测板
ABTS（2,2'-偶氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)）Sigma-AldrichA3219阳离子自由基清除能力测定
丙酮（分析纯）Sigma-Aldrich179124提取溶剂
乙腈（LC-MS 级）Sigma-Aldrich34851有机流动相
鲍曼不动杆菌ATCC美国弗吉尼亚州马纳萨斯ATCC 17978
配备1290 Infinity UPLC系统的三重四极杆液相色谱-串联质谱仪安捷伦科技6460定量分析
分析柱（C18，4.6 × 100 毫米，3.5 μm)安捷伦科技（Zorbax）959990-902反相色谱柱
抗氧化剂标准品（抗坏血酸 / Trolox）Sigma-AldrichA7506 / 238813阳性对照
Applied Biosystems 3730xl DNA分析仪应用生物系统公司 3730xl DNA分析仪DNA测序系统
应用生物系统公司™ BigDye™ Terminator v3.1 循环测序试剂盒应用生物系统公司 4337455Sanger 测序试剂盒
Bacillus cereusATCC美国弗吉尼亚州马纳萨斯ATCC 14579
生物信息学分析，BioEdit 软件，所用算法：CAP 重叠群组装Ibis BiosciencesNA序列组装软件
纤维素提取套管Fisherbrand™ 11724043用于索氏提取
二甲基亚砜（DMSO）默克102952溶剂
DNA提取试剂盒（植物）&Fungi DNA 提取试剂盒（波兰）EurX GeneMATRIXE3595DNA 提取 
DPPH（2,2-二苯基-1-苦肼基）Sigma-AldrichD9132自由基清除能力测定
杜尔贝科改良伊格尔培养基摩羯座 DMEM-HA
产气肠杆菌ATCC美国弗吉尼亚州马纳萨斯ATCC 13048
Enterococcus faecalisATCC美国弗吉尼亚州马纳萨斯ATCC 29212
大肠杆菌ATCC美国弗吉尼亚州马纳萨斯ATCC 25922
乙醇默克100983溶剂
乙酸乙酯默克109623提取溶剂
胎牛血清（FBS）Capricorn ScientificFBS-16A
BigDyeTerminator v3.1 循环测序试剂盒ThermoFisher4337455测序试剂盒
福林-酚试剂Sigma-Aldrich 47641总酚含量
甲酸Sigma-Aldrich 33015流动相添加剂
没食子酸Carlo Erba406335标准曲线
基因 MATRIX 植物&Fungi DNA 提取试剂盒EurX E3595DNA提取试剂盒
GraphPad Prism（v9）数据可视化与统计分析N/A统计分析
加热套电热 EME30500用于维持溶剂回流
HighPrep™ PCR 纯化系统MAGBIOAC-60005
冰实验室级别—超声辅助提取过程中的温度控制
肺炎克雷伯菌ATCC美国弗吉尼亚州马纳萨斯ATCC 13883
L-谷氨酰胺Capricorn Scientific德国
单核细胞增生李斯特菌ATCC美国弗吉尼亚州马纳萨斯ATCC 19115
冻干机ScientzN/A提取物的冷冻干燥
磁珠–基于 PCR 的纯化系统MAGBIOAC-60005PCR
甲醇默克106009提取溶剂
正己烷默克103701提取溶剂
青霉素/链霉素Capricorn Scientific德国
铜绿假单胞菌ATCC美国弗吉尼亚州马纳萨斯ATCC 27853
滤纸（No. 541）Cytiva1541-125 V在提取物过滤过程中
旋转蒸发仪Buchi R10011100V101溶剂去除
志贺氏痢疾杆菌ATCC美国弗吉尼亚州马纳萨斯ATCC 13313
碳酸钠默克106392总酚分析
SPECTROstar Nano 微孔板读板仪 BMG Labtech吸光度测量
Staphylococcus aureusATCC美国弗吉尼亚州马纳萨斯ATCC 25923
表皮葡萄球菌ATCC美国弗吉尼亚州马纳萨斯ATCC 12228
统计分析软件（SPSS，v23）数据分析NA
Thermo Scientific Nanodrop 2000 赛默飞世尔科技ND-2000
胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）默克德国—
胰蛋白胨大豆肉汤（TSB）默克德国—
超声波均质器ScientzSCIENTZ-650L超声辅助提取

参考文献

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