该临床试验评估了在利福昔明治疗期间及治疗后4周内，使用含有Lactobacillus acidophilus NCFM和Bifidobacterium lactis Bi07以及龙舌兰菊粉的合生元凝胶与安慰剂凝胶相比，治疗1周后双歧杆菌和乳杆菌的数量变化，结果显示该合生元凝胶可能有助于维持乳杆菌和双歧杆菌水平。
研究文章
该临床试验评估了在利福昔明治疗期间及治疗后4周内，使用含有Lactobacillus acidophilus NCFM和Bifidobacterium lactis Bi07以及龙舌兰菊粉的合生元凝胶与安慰剂凝胶相比，治疗1周后双歧杆菌和乳杆菌的数量变化，结果显示该合生元凝胶可能有助于维持乳杆菌和双歧杆菌水平。
尽管肠道微生物群通常较为稳定，但其可能受到抗生素治疗的影响。利福昔明常用于治疗胃肠道疾病，通常与益生菌联合使用，以降低菌群失调的风险。 Lactobacillus acidophilus 与肠道细胞相互作用并利用益生元化合物。双歧杆菌，尤其是 Bifidobacterium infantis ssp. lactis Bi07 是一种与肠道有益作用相关的益生菌。 体外 研究表明，龙舌兰果聚糖在某些方面优于菊苣菊粉。目前尚无研究记录联合使用利福昔明与合生元后粪便中乳杆菌和双歧杆菌数量的变化。本研究旨在评估健康志愿者在为期1周的利福昔明治疗期间及治疗结束后4周内，服用含有嗜酸乳杆菌NCFM、乳双歧杆菌Bi07以及作为益生元的龙舌兰菊粉的合生元凝胶后，肠道双歧杆菌和乳杆菌菌落形成单位（CFU）数量的变化。 在一项随机、安慰剂对照、双盲临床试验中，既往一个月内未接受过抗菌治疗的健康受试者被按1:1的比例随机分为两组（每组10名受试者）。合生元凝胶组每日接受10.32 g 龙舌兰菊粉作为益生元，以及4 × 109 每克菌落形成单位（CFU/g） Lactobacillus acidophilus NCFM 和 4 × 109 每克菌落形成单位（CFU/g） 两歧双歧杆菌 每日一次，持续5周，以及首周每日两次、每次200 mg的利福昔明。安慰剂凝胶组在5周内接受安慰剂凝胶，并在第一周每日两次、每次200 mg的利福昔明。通过粪便微生物学评估定量菌落形成单位（CFU）来估算细菌变化。五周后，乳杆菌和双歧杆菌的数量未发生改变。检测到的 Lactobacillus acidophilus NCFM 和 两歧双歧杆菌 某些粪便样本中检测到Bi07，提示存在短暂且部分的定植，凸显了针对该合生元产品开展剂量-反应研究的必要性。
人类肠道微生物群是一个高度密集的群落，包含长期存在的本土物种以及其他短暂存在的微生物。尽管其组成在个体之间可能存在差异，但通常被认为是稳定的。然而，年龄、感染和抗生素治疗等因素可能影响其结构1,2,3。利福昔明是一种广谱抗生素，肠道吸收率低，常用于治疗肠道疾病，并可改变微生物群的组成。乳杆菌属（Lactobacillus）和双歧杆菌属（Bifidobacterium）的益生菌可用于减轻这些影响2。
已有报道称双歧杆菌属（Bifidobacterium spp.）菌株对利福昔明耐药2，这种特性具有促进肠道菌群中双歧杆菌属菌群达到足以产生有益益生作用数量的有趣效果。
此外，嗜酸乳杆菌 因其在整合方面的能力而被广泛认可与胃肠道上皮相互作用4 及其利用益生元（如多糖、寡糖和低聚果糖）的能力。然而，仅有少数益生菌菌株，例如 乳酸杆菌 嗜酸乳杆菌 北卡罗来纳食品微生物（NCFM）菌株已被鉴定。因此，研究它们的 体内 影响很重要，存在的影响也同样重要， 两歧双歧杆菌 Bi07在胃肠道中，已发现其与多种促进健康的益处相关2,5这些益生菌需要益生元才能实现最佳生长，因此含有益生菌和益生元的合生制剂可产生协同作用，即其有益效果高于单独使用益生菌的效果。益生元作为益生菌的底物，与益生菌共同作用，有望增强益生菌微生物在胃肠道中的存活能力，从而更有效地恢复微生物群。6.
益生元的一个重要来源是龙舌兰果聚糖，据报道其对肠道菌群的体外作用优于菊苣根（Cichorium intybus L.）7。已有研究报道了益生菌摄入的效果；例如，Engelbrektson 等人评估了在抗生素使用期间及之后摄入益生菌是否能够减轻抗生素引起的菌群改变8。他们发现，接受益生菌混合物的组别比未摄入益生菌的组别更快速地恢复了正常菌群8。此外，Koning 等人研究了40名健康志愿者在每日两次、每次500 mg阿莫西林治疗7天后肠道菌群的失调情况，以及摄入益生菌混合物后菌群可能的恢复情况。结果显示，阿莫西林治疗影响了原有菌群的组成；当给予益生菌混合物后，菌群在持续摄入两个月后显著恢复9。
然而，文献报道尚未有研究探讨合生元（以龙舌兰果聚糖作为益生元）在抗生素（如利福昔明）使用期间及之后对肠道微生物群的影响；我们仅发现有关益生菌的研究。 因此，本研究评估了健康志愿者在为期1周的利福昔明治疗期间及治疗后4周内，服用含有嗜酸乳杆菌NCFM、乳双歧杆菌Bi07以及作为益生元的龙舌兰菊粉的合生元凝胶后，肠道双歧杆菌和乳杆菌菌落形成单位（CFU）数量的变化。
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本方案已获得萨尔瓦多·苏比兰国家医学与营养科学研究所（INCMNSZ）人类生物医学研究机构委员会（CIIBH）的批准（参考编号 1734）。所有参与者在纳入本研究前均签署了知情同意书。
研究设计与人群
这是一项随机、安慰剂对照、双盲临床试验，随访期为5周。研究邀请了INCMNSZ的工作人员参与，于2011年至2012年间纳入年龄在20至50岁之间、过去一个月内未接受过抗菌治疗且签署知情同意书的健康志愿者。研究对象按1:1随机分配至合生元凝胶组，该组每日服用含10.32 g龙舌兰菊粉（作为益生元）以及每克含4 × 109 CFU/g Lactobacillus acidophilus NCFM 和 4 × 109 CFU/g Bifidobacterium lactis Bi07的凝胶，每日4袋，持续5周，并在第一周每日两次服用200 mg利福昔明。安慰剂凝胶组在5周内每日服用4包15 g的安慰剂凝胶，其外观和感官特性与合生元凝胶相同，并在第一周每日两次服用200 mg利福昔明（图1）。
临床评估
在两个研究组中，均采用布里斯托尔量表评估症状和粪便外观。同时测量体重、身高和体重指数（BMI）。通过日记记录合生元凝胶、安慰剂凝胶和利福昔明的服用情况，并记录凝胶摄入相关不良反应的有无。
纤维摄入
采用食物日记和每周一次的24小时回顾法评估两组的纤维摄入量。
治疗依从性
通过统计每位参与者服用的利福昔明剂量次数以及合生元凝胶和安慰剂凝胶所消耗的袋数，评估其对利福昔明和凝胶的依从性。存在的 Lactobacillus acidophilus 和 两歧双歧杆菌 采用聚合酶链式反应（PCR）进行检测。
粪便的微生物学评估
在第0次访视及之后每周进行的5次访视中（每组共6次访视），采用平板计数法对120份粪便样本中的乳杆菌、双歧杆菌和肠杆菌数量进行评估。该方法通过将稀释后的样本接种至特定的固体培养基上，测定菌落形成单位（CFU）10。粪便样本于每次访视开始时采集。
为了鉴定微生物，采集粪便样本并将其保存在BBL管中。PBG试管用于厌氧菌的培养，粪便样本被置于含有冷冻凝胶包的泡沫塑料冷藏箱中运输，以在实验室处理前维持低温。打开用于粪便培养的PBG试管盖，使用拭子采集粪便样本，确保拭子充分浸入样本中。随后将拭子放入含有固体培养基的试管中。
对于厌氧菌，先称量小瓶的重量，然后使用勺子收集5–10 g粪便样本。将粪便与小瓶内的成分混合后紧密封口。在样本处理过程中，称量含有样本的小瓶以及无菌均质袋。将样本倒入均质袋中，以60秒离心，随后加入4.5 mL 0.1%蛋白胨水。接着，将500 µL样本转移至另一小瓶中，并涡旋振荡以使混合物均质化。取100 µL样本，分别接种于每种选择性培养基平板上，每种接种两份，其中乳杆菌使用Man Rogosa Sharpe（MRS）培养基，双歧杆菌使用含半胱氨酸和环己酰亚胺的DP Beerens培养基（以消除非目标菌群），最高稀释至第8级（稀释因子为0.1 mL）。对于肠杆菌科细菌，则使用MacConkey培养基，在第5至第8级稀释度（稀释因子为0.1 mL）进行接种，分离并定量菌落11。每种培养基粉末均溶于纯化蒸馏水中，加热至沸腾以确保完全溶解，并在121 °C高压灭菌器中灭菌15分钟。将溶液冷却至46.5 °C后进行倾注平板操作，每个无菌培养皿中加入15–20 mL培养基，每皿倾注1 mL样本溶液，每样本设两份重复，静置使平板凝固。接种后的样本置于CO2富集的厌氧GasPak系统中，在37 °C下培养24–48小时以维持厌氧环境。菌落形成单位（CFU）用记号笔标记并计数12。应用以下公式计算：
CFU/mL = （菌落数 × 总稀释倍数）/ 涂布培养物体积 (mL)
乳杆菌和双歧杆菌形态学特征的鉴定
采用革兰染色法鉴定标本的形态学特征。取每种菌株的细菌菌落样本置于显微镜载玻片上，用结晶紫染色1分钟，然后用蒸馏水冲洗。加入碘液作用1分钟，再用蒸馏水冲洗。使用酒精-丙酮溶液作为脱色剂处理10秒，随后用蒸馏水冲洗。最后用沙黄进行复染1分钟，并用蒸馏水冲洗。使用油浸物镜（100倍物镜）在光学显微镜下观察载玻片。
采用常规聚合酶链式反应（PCR）对每组五名受试者随机选择的粪便样本进行总量定量，共5周内获得60份样本。从培养基中分离的菌株被用于提取遗传物质。PCR使用通用细菌引物扩增16S rRNA基因片段13。PCR产物经纯化后进行测序。序列经验证后提交至GenBank数据库，以确认从粪便样本中分离出的乳杆菌和双歧杆菌菌株的存在。
统计分析
数据以绝对频率、相对频率或中位数（第25百分位数至第75百分位数）表示。采用李克特评分（轻度，1；中度，2；重度，3）评估每次随访时症状的累积严重程度。组间比较采用Wilcoxon秩和检验以及卡方检验或Fisher确切概率法。组内比较（第0周与第5周之间）采用Friedman检验，并结合Durbin-Conover法进行多重比较。统计学显著性水平设定为 P < 0.05。
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Twenty healthy volunteers were randomly divided into the Synbiotic Gel group (n = 10) and Placebo Gel group (n = 10) (Figure 2 and Table 1). In the Synbiotic Gel group, seven were men, and three were women, with a median age of 31 years (range, 27–35 years); in the Placebo Gel group, three were men, and seven were women, with a median age of 33 years (range, 28–38 years). The groups were similar in terms of age, sex, weight, and BMI. Treatment adherence was ...
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在本研究中，我们发现安慰剂组受试者在干预第一周后粪便样本中的肠杆菌数量显著减少，而合生元凝胶组受试者在干预第一周和第二周均出现显著减少。这一变化可通过利福昔明的作用加以解释，已有研究指出利福昔明可抑制致病菌的过度增殖。14在本研究中，继利福昔明治疗后使用合生元凝胶的组别显示出积极效果：乳杆菌菌株的数量在干预期间从中位数基线水平未发生改变，而双歧杆菌数量较安慰剂凝胶组减少不足1 log CFU，安慰剂凝胶组则减少了1 log CFU，该差异被认为临床意义甚微。合生元制剂的使用包含 L. acidophilus NCFM 和 B. lactis Bi07 与龙舌兰果聚糖联用，在利福昔明治疗后可能有助于维持粪便中乳杆菌和双歧杆菌的数量。
鼠李糖乳杆菌 NCFM 菌株的重要性在于其生理学、生物化学、遗传学和发酵特性已被广泛研究和表征4,15. 在本研究中，...
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作者声明无任何利益冲突。
我们衷心感谢Kurago-Biotek公司慷慨提供合生元制剂和安慰剂凝胶。该资助方在研究设计、数据收集、分析与解释，报告撰写，以及决定提交论文发表等过程中均未发挥任何作用。
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| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| BBL 试管 | NA | NA | 可使用任意品牌 |
| DP 培养基 | NA | NA | 可使用任意品牌 |
| 冷冻凝胶包 | |||
| 麦康凯培养基 | NA | NA | |
| MRS 培养基 | NA | NA | 可使用任意品牌 |
| PBG 小瓶 | 磷酸盐缓冲液、明胶、盐类，含 0.05% 半胱氨酸作为 O₂ 的还原剂 | ||
| 培养皿 | |||
| 安慰剂混合物 | KuragoBiotek-BabyCat. | NA | 与合生元凝胶具有相同的物理和感官特性，但不含活性成分 |
| 泡沫塑料容器 | |||
| 合生元混合物 | KuragoBiotek-BabyCat. | NA | 非乳制品，由嗜酸乳杆菌 NCMF 和婴儿双歧杆菌 Bi-07（2 × 109 CFU/g）组成，并含有 17.2 g 龙舌兰低聚果糖作为益生元，每袋 15 g |
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