海水采样与收集

大家好，我是来自不列颠哥伦比亚大学微生物学与免疫学系Stephen Hallam实验室的Elena Kova。今天我们将向您展示一种用于采集海水以进行物理、化学和生物分析的实验方法。我们实验室使用该方法来研究海洋水体的海洋学参数。

下面我们开始。首先，确定每个剖面的采样次数及每次采样的深度，然后选定需要采集的深度，并确定当前剖面需收集的总采样体积。确保“go flow”和“kin water”采样装置处于开启状态，且所有阀门和旋塞均处于关闭状态。

将CTD连接到绳索末端，并将其下放至剖面的最深水深处。在CTD之后立即将采样装置连接到绳索上。确保绳索已正确安装在装置支架内，并拧紧固定螺丝。

在将采样设备下放至水中之前，除最深采样深度外，每个设备上均需连接一个配重 messenger。下放绳索，到达第一个指定深度后，继续下放至下一个深度间隔，然后安装另一个采样装置。请注意，在需要采集大体积水样的深度区间，连续装载两个12升的采样瓶，两者间距约为0.75米。

所有设备入水后，将绳索下放至最深深度，静置两分钟。随后投放 messenger（触发器），依次触发各设备进入关闭状态。等待数分钟后，开始回收绳索。

为确保所有设备均已关闭，将缆线收回，并在每个设备出水后将其卸至甲板上。对于需要大量样品以进行蛋白质、DNA 或 RNA 纯化的深度采样，可串联使用两个采样装置。从其中一个瓶子中立即收集 RNA，并在船上进行过滤。

在对另一瓶中的化学物质和营养物取样后，将剩余的水排入车辆中，最终体积为20升。对于低体积样品，需预留1升水用于在无菌Nalgene瓶中进行过滤。通常，从16个深度间隔采集的低体积样品为16个1升样品，而6个20升样品则作为高体积样品采集。

采集气体样品时，务必同时采集氧气和痕量气体样品。首先，将一段细软管连接到采水装置的旋塞上，然后将软管的另一端插入密封的血清瓶中。

用待测水样冲洗血清瓶三次，然后装满水样至溢出，确保无气泡存在。向血清瓶中加入50 µL氯化汞。注意避免将气泡引入样品中。

用橡胶塞密封血清瓶，再用铝帽压紧，随后置于冰上保存，用于收集样品以测定硝酸盐、磷酸盐和硅酸盐等营养盐。首先用样品水冲洗一支60 cc的注射器，然后在线连接一个0.2微米的Acro Disc滤器。

推动约两毫升水通过注射器，以冲洗滤膜。用约10毫升滤过水将聚乙烯瓶冲洗三次。

冲洗时摇动瓶子，然后将过滤后的样品水加入瓶中，至约四分之三满。将样品置于冰上保存。排空远端水的收集管，用于收集氨测定所需的样品。

首先用样品水彻底冲洗收集管，然后将样品水完全排空。取一个10 ml量筒，用样品水冲洗后，加入5 ml样品水，倒出量筒中多余的样品水，仅保留5 ml，再将这5 ml样品水重新加入已倒空的量筒中。

采集所有深度的样品后，向每个试管中加入 7.5 ml 铵工作试剂。为进行细胞计数而采集样品时，将预标记的 50 ml Falcon 管加样至 50 ml 刻度线，该管中已含有 5.4 ml 37% 甲醛，最终甲醛浓度为 4%。注意不要使试管溢出。将样品置于冰上保存以完成样品采集。

用于硫化氢测量。将预标记的 50 mL Falcon 管加满，管内含有 3 mL 20% 乙酸锌。注意不要溢出管外。

将样品置于冰上以收集小体积样品，用于生物量浓度测定。对于大量样品的生物量浓度测定，使用一升的Nalgene瓶装满至瓶口以收集大体积样品。

将20升的容器装满至顶部。海水采样的最终结果约为32至48个气体样品，32个铵盐样品。

16 个硫化氢样品。16 个用于细胞计数的样品。六个 20 升汽车，16 个一升瓶和四个 Sterex。

含有微生物生物量的 2.2 微米滤膜被保存以备后续 RNA 提取。我们刚刚演示了如何采集不同类型的水样用于生化分析。

这需要大量的准备工作和周密的计划。因此，请在出发前预留两天时间整理物品，返回后预留一天时间进行清理。切勿让盐水接触佩拉尔特泵或用于运输野外设备的铝制扎戈箱。妥善维护设备，它将在未来很长一段时间内良好运行。

以上就是全部内容。感谢观看，祝您的实验顺利成功。