利用血凝试验测定血清的反应性与滴度

使用血凝素检测法测定血清的反应性及滴度。凝集反应是可溶性抗体与颗粒性抗原之间发生的反应。这些抗原可包括细胞或偶联分子。

载体表面的表位可使抗体结合并相互交联载体，从而形成一种称为抗原-抗体复合物的复杂晶格结构。血凝是凝集反应的一种特定形式，其中抗体与作为颗粒性抗原的红细胞结合。红细胞是理想的检测靶标，因为它们不仅易于获得，而且实验结果可通过肉眼直接观察。

血清样本经连续稀释后，加入96孔U型底培养板中。随后加入红细胞（Riva细胞）悬液。当存在高浓度抗体时，抗体会与红细胞结合，形成较大的晶格结构。

当该晶格在重力作用下沉淀时，会贴合ubo板的形状。从上方观察，可见一片广泛的红细胞聚集现象。此为阳性血凝反应。

当抗体水平较低时，无法形成网格结构，红细胞会顺应UBO板的形状并聚集在底部，形成一个小的沉淀物。这是阴性血凝反应。此图显示的是阳性反应。

细胞在沉降过程中形成晶格结构，并贴合U型底板的形状。在左侧和右侧，我们看到的是俯视图，其中可见一片广泛的红细胞层。如果存在中等量的抗体，则会观察到部分字母状结构的形成。

血凝反应还可用于检测不同血清样本对已知抗原的反应性。同时可以确定血清样本的滴度，即仍能观察到阳性反应的最高稀释倍数。

通常情况下，血清样本中的抗体浓度越高，滴度也越高。此图显示为阴性血凝反应，抗体数量不足，无法介导红细胞发生交联。

当细胞因重力沉降时，会沿孔壁滑落，在孔底形成紧密的沉淀。右侧示意图显示了从上方观察时的红细胞。本实验需要1块96孔U型底板。

必须使用U型底板，因为平底板无法使细胞沉淀形成细胞团，从而导致结果无法判读。用移液器向第A行第1至第12列各孔中分别加入50 µL待测血清、1%瑞氏细胞悬液以及一份维罗纳缓冲盐溶液。向各孔中再加入50 µL罗氏缓冲盐溶液。

此溶液用作您的稀释液。现在将50微升血清加入A1孔中。这是您的第一次1:2稀释。

使用移液器确保血清样本充分混匀。混匀后，从A1孔中取出50微升，转移至A2孔。这是您的1:2二次稀释，得到四倍稀释。

继续使用第3至第11孔进行此系列稀释。不要向第12孔加入任何血清，因为该孔为罗氏缓冲盐水阴性对照。现在取已充分混匀的1%瑞氏细胞悬液，向A1至A12各孔中分别加入50 µL。

细胞加入后，盖上培养板，轻轻敲击培养板，以确保样品与细胞充分混匀。随后在37摄氏度条件下孵育60分钟。应使用带加湿功能的培养箱。

在60分钟的孵育期间，抗原与抗体将发生相互作用，细胞将开始沉降。您所观看的视频是整个60分钟过程的延时摄影图像。此为第5至第10孔的放大图像。

我们已经观察过，嗯，12号孔，这是本实验的VBS对照孔。该孔中的细胞已形成紧密的沉淀，表明实验体系正常发挥作用。5号和6号孔是阳性血凝反应的示例。

其中，第七孔为中等凝集结果的示例，而第八、九、十孔则为血凝阴性。根据此结果，滴度应以第七孔的稀释度为准，因为这是最后一次观察到阳性反应的孔。