肺部灌注与固定：通过气管引入液体并固定肺组织以测量固定肺容积

－ 肺部滴注法用于将物质直接引入气管，以分析患有癌症或其他病理状况的小鼠肺组织。首先，将麻醉后的小鼠置于倾斜的插管平台上，并剃除颈部毛发。用剪刀在颈部下方做一小切口，用镊子轻轻牵拉皮肤以暴露气管。经口腔将导管插入气管，并通过切口观察其位置。向气管内注入示例液体，然后使用空注射器向气管内快速注入空气，使肺充分膨胀，以确保液体均匀分布。

缝合伤口并将小鼠放入恢复室。在预定时间后，处死小鼠并暴露肺组织。用固定液灌注肺以量化总肺容量。将肺放入含有固定液的试管中。利用阿基米德原理测量固定后的肺体积：将肺浸入水中，并用带线装置压住肺组织，记录被浸没肺组织排开的水的重量。固定后左肺体积所占比例通常小于体内测得的数值。

— 开始操作前，手动将市售的1英寸长20号静脉套管针尖端弯成轻微弧形。然后通过夹捏脚趾无反应确认麻醉效果后，将眼膏涂抹于成年小鼠眼部，并使用大型办公夹和缝合环将其固定于倾斜平台上的仰卧位。剃除颈部腹侧毛发，并用70%酒精对皮肤进行消毒。接着使用锐利的剪刀在颈部做一小切口，位置约在下门齿下方12毫米处。

接下来使用镊子轻轻向尾侧牵拉颈部皮肤，直至可见气管的腹侧壁。然后轻轻牵开舌头，将带有弯曲尖端的套管插入，弯曲端朝向小鼠腹面。再次如前所示轻轻牵拉颈部皮肤，将套管插入气管。当观察到导管进入气管后，继续推进导管约5毫米，使其通过声带。

现在将装有50微升灌注液的凝胶加样枪头插入导管的下端接口。确认枪头内液体随小鼠呼吸同步移动后，注入灌注液。随后立即使用1毫升注射器通过导管向肺部注入0.6毫升空气，以帮助液体深入肺内分布，然后拔除套管。用少量氰基丙烯酸酯粘合剂闭合手术切口，并将小鼠置于单独笼具中持续监测，直至其完全恢复。

在最后一次实验时间点后，于动物颈部做一小切口，暴露气管腹侧。然后将18号短针头插入气管中。用缝线将针头固定于气管上，并沿中线切开胸腔。随后剪除膈肌，并移除侧胸壁以暴露肺组织。接下来，确保固定装置的导管中无空气，可通过打开止流夹末端使甲醛流出以排空空气。然后将福尔马林储液器及已充满液体的导管直接连接至气管造口针的下端。

将甲醛液面置于距气管开口水平位置上方25厘米处，打开活塞，用固定液灌注肺部。使肺部在压力下保持至少20分钟后，缓慢向后拉动针头，暴露更多未插管的气管段，同时在短针头末端以外结扎气管。当气管牢固结扎后，取下活塞，仔细分离并取出肺组织。随后将肺组织置于甲醛中固定过夜。

此处展示了一种典型的固定肺容积装置，该装置由塑料移液管和细的20号金属丝制成，用于在测量固定肺容积时固定肺的位置。测量固定肺容积时，首先将心脏及其他非肺组织从肺组织上解剖去除。接着，将一个装有约200毫升水并配有金属丝支撑装置的烧杯置于天平上，并对设备进行去皮归零。

然后移除装置，将肺组织置于水面，并使用该装置将组织压入水中，注意确保肺组织、缝线或装置的任何部分均不接触烧杯的侧壁或底部。记录天平上的重量读数。该数值反映了所排开水的体积，因此可直接反映肺容积。随后用擦拭纸将肺组织擦干，重新将装置放入烧杯并归零，再次重复肺容积的测量。两次容积测量结果应取平均值。