为何巨噬细胞迁移的实时监测对靶点验证至关重要？

实时追踪显示，脓肿分枝杆菌通过绳索状结构的形成逃避吞噬作用，从而可评估化合物是否能恢复巨噬细胞功能或抑制细菌聚集这一毒力机制。

分离细胞外连接可变区如何为发现管线的决策提供信息？

通过将菌索视为具有抗性、能够复制并导致宿主细胞死亡的聚集体，该模型分离出一种特定的免疫逃逸机制，可针对此机制进行干预，以提高治疗效果并减少病原体的持续存在。

在此模型中，哪些定量因变量测量可用于化合物筛选？

对细菌载量、索状结构形成和巨噬细胞募集的荧光强度进行测量，可提供可量化的、具有时间分辨率的输出结果，用于比较化合物对病原体负荷和宿主反应的影响。

为什么在感染建模中的跨职能协作中，重复性要求至关重要？

标准化的感染和成像方案可确保不同实验室之间结果的可重复性，从而实现发现、筛选和临床前团队之间可靠的数据共享，以进行一致的靶点评估。

在实施该成像检测之前，需要具备哪些统计分析能力？

通过量化随时间变化的荧光信号，并利用适当的统计学方法比较不同条件，对于确定化合物处理后在血管样结构形成、巨噬细胞活性或细菌存活率方面是否存在显著差异至关重要。

斑马鱼胚胎感染后宿主-病原体相互作用的活体成像脓肿分枝杆菌

JoVE Encyclopedia of Experiments

微生物学

0 次观看 • 2:18 分钟 • January 30th, 2026

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

从表达荧光标记巨噬细胞的麻醉后透明转基因斑马鱼胚胎开始。

将荧光标记的粗糙型脓肿分枝杆菌（Mycobacterium abscessus）预先注射到胚胎尾部肌肉中，以诱导局部感染。

这些细菌表面糖肽脂的缺失促进了它们的聚集。

将胚胎固定在低熔点琼脂糖中，并调整其方向以暴露感染部位。

琼脂糖凝固后，加入含有麻醉剂的养鱼水以维持麻醉状态并防止脱水。

通过荧光显微镜实时监测感染情况。

感染后，内源性巨噬细胞向细菌迁移并吞噬单个细胞。

然而，某些细菌会形成索状结构——即细长的细胞外聚集体，能够复制、扩散并抵抗吞噬作用，导致宿主细胞死亡和免疫细胞浸润。

尽管如此，免疫细胞仍无法清除这些索状结构，导致细菌和死亡的宿主细胞积聚并形成脓肿。

这揭示了cording是M. abscessus的一种关键免疫逃逸策略。

为了对M. abscessus感染进行活体成像，将经三卡因麻醉的胚胎置于35毫米玻璃底培养皿或单腔凹玻片中，其中含有1%低熔点琼脂糖，适用于倒置显微镜或直立共聚焦显微镜。将胚胎调整至所需位置，并在凝固的琼脂糖上覆盖含三卡因的养鱼用水。最后，使用配备10X物镜的荧光显微镜，或配备40X或63X物镜的荧光共聚焦显微镜，对胚胎进行连续荧光采集和透射光成像。