计数人类神经干细胞

现在我将向您展示如何计数人神经前体细胞。当您希望将细胞用于免疫化学实验或使用核因子显微装置进行转染时，都需要对细胞进行计数。我使用带有边缘网格的相差显微镜血细胞计数板，同时使用一种名为台盼蓝的染料。这种染料的优势在于能够区分活细胞与死细胞。

死亡或即将死亡的细胞会摄取这种染料而呈现蓝色。当你在血细胞计数板中观察时，活细胞能够排除这种染料，因此不会呈现蓝色。通过这种方法，你可以判断细胞的存活率，以制备含有台盼蓝和培养基的溶液。

我将向这个0.5毫升离心管中加入20微升的台盼蓝溶液。然后，我将加入25微升的培养基。这样，目前我共有45微升的台盼蓝与培养基混合溶液，因此当我加入5微升的细胞悬液时，即可实现1:10的稀释比例。

现在，我将加入5 µL细胞悬液。首先，我会用手指轻弹离心管使细胞充分重悬。接下来，我需要确保该溶液充分混匀。

因此，我将把床升降几次。最后，我会将约12微升的细胞悬液加入血细胞计数板中。它有两个加样口，你可以使用其中任意一个。

因此，您只需将溶液从这个入口注入，液体就会通过毛细作用被吸入。现在我已准备好进行计数。这是在10倍物镜下观察血细胞计数板的视野，此处有一个包含16个方格的象限。

如您所见，我们可在此观察到活细胞与死细胞。此处的活细胞例如这个、这个以及这个。此外，我们还观察到一些死细胞，例如这个。

如果仔细观察，死细胞呈深蓝色，而活细胞周围则呈现出一种类似冰晶的亮圈。接下来我将计数所有活细胞。计数顺序将从左到右、从上到下进行。

1、2、3、4、5、6、33、1、32、33、34、3、5、3、6。因此，该象限中共有六个细胞。当观察到位于象限边界线上的细胞时，例如此处这条线上的细胞，为了保持一致性，我仅计数位于左侧边界和上侧边界上的细胞。

我会对血细胞计数板上所有四个象限的边界细胞进行持续计数。接下来，我们将计算每微升中含有多少个细胞。为此，我将取每个象限细胞数的平均值（即38），再乘以10，这个系数是由计数室的尺寸所决定的。

同时，我们还要乘以10，这是本实验中的稀释倍数。最终，我们将得到每微升中的细胞数量。因此，在本例中，每微升含有3,800个细胞。

由于我们将细胞沉淀重悬于500微升溶液中，因此可以计算出细胞的总数。至此，所有步骤已完成。