制备用以观察听觉神经元的楔形脑切片

从一只小鼠脑开始，将其在后部下方水平解剖，以保留对声音处理至关重要的听觉神经元。

将后部组织切片固定在磁性圆盘上。放置一块琼脂以在切片过程中稳定组织。

将组织切片转移至配备刀片的振动切片机的切片室载物台上。

引入冷缓冲液并通入碳酰气，以提供氧气并维持神经元的完整性。

进行均匀的水平切割，以去除脑切片的上部区域。

然后倾斜载物台，继续切削剩余部分，直至听神经根可见。

重新调整载物台。接着，旋转载物台并调节刀片位置，以获得切片薄端所需的厚度。

将刀片移开，并重新调整载物台至先前位置。现在，将脑组织切成楔形，一侧较厚，另一侧较薄。

较厚的一侧包含听神经根，而较薄的一侧则具有相互连接的听觉神经元。

首先使用剃刀从鼻部至颈部后方沿颅骨中线切开皮肤。将皮肤剥离以暴露颅骨，并从小脑颅底开始，沿中线向前至鼻部，使用小型剪刀在颅骨上做中线切口。

在人字缝处，从正中线向两侧耳部方向在颅骨上做切口，以便剥离颅骨暴露脑组织。从脑的前端开始，使用小型实验铲轻轻抬起脑组织，以便切断视神经。

继续轻柔地向后分离脑组织，暴露其腹侧表面，并用精细镊子在脑干腹侧表面附近小心夹住三叉神经并将其剪断。将标本置于盛有冷切片液的玻璃培养皿中，并将培养皿放在解剖显微镜下。紧贴脑干修剪面神经，以暴露前庭蜗神经。

使用精细镊子将镊尖尽可能推入前庭蜗神经穿出颅骨的孔道中，夹断双侧神经，保留神经根与脑干相连。

在脑桥附近的腹侧表面去除脑干的脑膜和血管组织。然后，夹住残留的脑神经和结缔组织，将脑完全从颅骨中分离，注意尽可能保留残留的脊髓。

为将脑组织固定于载物台上，需将脑组织腹面朝上放置，并使用钝头工具轻轻固定脊髓以稳定脑组织。将张开的镊子以约20度角从脑组织插入至培养皿底部，使镊子尖端从视交叉后方的脑背侧表面穿出，然后沿镊子边缘用刀片进行切割。

接下来，准备一块 1 立方厘米的 4% 琼脂块，并在切片台上涂抹一小滴胶水成矩形。用镊子小心地提起脑组织，用纸巾边缘轻轻吸去多余的液体。然后将琼脂块的切面朝下贴附在胶水上，使脑组织的腹面朝向切片刀的方向，并将琼脂块轻轻压在脑组织的背侧作为支撑。

为了获取厚侧带有耳蜗神经根、薄侧带有内侧橄榄耳蜗神经元和斜方体旁内侧核的楔形切片，将附有脑组织的磁盘放置在切片台架上，并将台架放入振动切片机的切片室中，使脑的腹侧朝向刀片方向。向切片室中加入冰冷的切片液，并将刀片降至经碳酰气（carbogen）鼓泡的溶液中。

在目标区域的尾侧进行切片，以确保切片对称。然后，将切片台向一侧旋转约15度。继续小心切片，直至一侧的耳蜗神经根接近切片表面，而另一侧表面可见面神经。

将载物台向后旋转15度，回到原始位置，并将刀片移离组织。将载物台底座旋转90度，使切片薄边的侧缘朝向刀片，先将刀片下降数百微米，再缓慢将其移近组织边缘。在略微回缩刀片后，将刀片降至所需切片薄边厚度。

将刀片从组织后移，并旋转载物台基座，使腹侧朝向载物台基座。进行一次切割以标记楔形切片的头侧表面，并将切片转移至一片面积为一平方厘米的界面滤纸上，尾侧朝下。

在脑片的吻端表面，应能在两个半球上观察到面神经。随后，将脑片转移至35摄氏度的孵育箱中，恢复30分钟。