为什么零假设检验对甲氧基-X04斑块成像具有重要意义？

零假设检验能够客观评估实验组之间观察到的斑块分布是否存在显著差异，从而支持阿尔茨海默病模型中的靶点验证。

自变量隔离如何融入成像工作流程？

分离处理或基因型等变量可确保斑块定位图谱输出的差异归因于特定干预措施，从而加强机制解释及发现流程中的决策可靠性。

定量因变量测量在斑块分析中能够实现什么？

斑块负荷和定位的定量测量为比较不同队列间的疾病进展、干预效果以及解剖学特异性提供了可操作的数据。

为什么复制要求对于跨职能协作至关重要？

成像与图谱绘制方案的可重复性可确保数据的可靠性与可比性，有助于神经退行性疾病研究中发现、临床前及转化研究团队之间的协作。

在实施斑块定位图绘制之前需要具备哪些统计分析能力？

需要强有力的统计工具来分析空间分布、量化斑块指标并验证其显著性，从而推动阿尔茨海默病研究管线中的科学决策。

阿尔茨海默病小鼠脑切片中甲氧基-X04标记的淀粉样斑块的可视化与定位

JoVE Encyclopedia of Experiments

神经科学

0 次观看 • 3:19 分钟 • May 29th, 2025

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从含有感兴趣区域的鼠脑组织切片开始，将其置于缓冲液中，以在成像过程中保持组织的水合状态。

该组织来自注射了甲氧基-X04（一种荧光染料）的阿尔茨海默病小鼠模型。

甲氧基-X04 可特异性结合淀粉样斑块中的β-折叠片层结构，并保持其荧光特性，用于成像和分析。

使用带有紫外滤光片的荧光显微镜激发甲氧基-X04，并采集其发射的荧光，以观察周围组织中荧光标记的淀粉样斑块。

在不调整显微镜载物台的情况下，以明场模式拍摄同一区域的图像以显示组织结构，并以荧光模式拍摄图像以观察斑块。

使用图像处理软件对明场图像和荧光图像进行配准，以将斑块精确定位到解剖结构上。

这些图像在结构背景下对淀粉样斑块进行详细可视化，以研究阿尔茨海默病的病理学特征。

借助立体定位小鼠脑图谱，选取包含目标区域的脑切片，并将每张切片放入24孔细胞培养板的孔中，置于冷冻保护液内。接着，使用一次性移液器将一滴PBS滴加到显微镜载玻片上，然后将脑切片放置于液滴中。

在荧光显微镜下观察切片，识别含有甲氧基-X04标记的Aβ斑块的区域。在不移动显微镜载物台的情况下，分别在明场和荧光模式下采集目标区域的图像。每张图像必须同时显示同一区域的明场和荧光图像，以将斑块与组织切片的结构区域相对应。

根据动物编号保存并命名所采集的图像。同时记录图像对应的孔板中的孔号以及拍摄视野。成像完成后，将切片放回指定的孔中。按照相同程序依次检查下一个切片，以避免切片干燥。

为对齐图像，请在 ImageJ 中打开同一 ROI 的明场和紫外场图像。然后使用 MosaicJ 插件对齐两张图像的边缘。将对齐并合并后的图像按照孔号保存在文件夹中，并标注特定动物的编号。合并同一只动物不同切片的图像，以识别并定位目标区域中的斑块。