一种无需限水、糖精淡化或长时间接触训练评估大鼠乙醇强化特性的方法

本实验方案的总体目标是通过一种对实验人员便捷的方法，快速启动大鼠对酒精的操作式反应，且与标准方法不同，该方法无需进行限水处理，也无需使用糖精-蔗糖渐退法。因此，该方法是研究大鼠酒精寻求行为中酒精奖赏的神经生物学和神经药理学关键问题的有力工具。该技术的主要优势在于，无需借助糖精-蔗糖渐退即可启动大鼠对酒精的反应。

首先排除在乙醇自我给药实验过程中使用甜味剂可能带来的不利影响。本实验选用体重为200至225克的雄性Wistar大鼠。

根据实验设计的需要，将动物单独或两只合养。将动物群维持在12小时光照-12小时黑暗的反转循环周期中，并控制温度与湿度，实验在黑暗阶段进行。每周称量动物体重，并在开始实验前使其适应环境至少一周。

不要限制大鼠对食物和水的获取。条件反射训练中无需进行限制。所有行为训练均应在相同尺寸的操作箱内进行，箱内配备电击栅格和废物托盘。

实验舱必须安装在带有通风装置的隔音屏蔽箱内。每个实验舱应配备刺激灯、注射泵和两个可伸缩的杠杆。两个杠杆应位于液体杯容器的两侧。

每个实验舱应通过计算机接口实现自动控制。根据需要使用该软件设置操作性条件反射程序。例如，执行以下命令。

伸出两个操纵杆，用于标记实验会话的开始并提示酒精的可获取性。当按压乙醇操纵杆时，向相邻的饮水槽中输送100 µL的20%乙醇，并进入五秒的超时状态。通过点亮操纵杆上方的提示灯来指示该超时状态。

另一个杠杆被按压时不会产生预设的后果，用于控制非特异性行为。即使在时间暂停期间，也应记录大鼠对杠杆的使用情况，尽管此时对大鼠无任何后果。30分钟后，收回两个杠杆以表示该实验阶段结束。

将由95%乙醇和自来水配制的乙醇溶液装入注射器中。排出溶液时避免将气泡引入管路系统。手动确认溶液的流动情况。

务必手动测试设备。每次开始实验前，也务必干燥溶液接收室。在开始实验之前，加载软件控制系统，并确保所有部件正常运行。

将大鼠用运输笼转移至测试室，并将每只大鼠分配至一个独立舱室。测试室的温度和湿度应与动物饲养室保持一致。每次实验均应在相同时间，以相同方式将大鼠放入各自的舱室中。

然后启动软件以开始实验。实验结束后，将大鼠送回动物房，并使用消毒剂清洁操作条件反射箱。每天进行实验，每周5至6次。

每次训练结束后，计算主动杠杆按压次数、非主动杠杆按压次数和酒精奖赏次数的平均值。当连续三次训练中奖赏次数的波动不超过15%时，表明行为表现已趋于稳定。对于达到稳定基线的大鼠，可进行进一步干预。一种可能的干预方式是评估大鼠对乙醇奖赏的动机水平。

为此，让动物接受递增比率程序。将实验箱设置为最初按压一次杠杆即可获得一个单位的酒精，但在每次获得酒精强化物后，逐渐增加所需按压杠杆的次数。每只动物都会达到一个断点，即最后一次获得强化物前所完成的按压次数。

该模型已使用获批的酒精依赖治疗药物纳曲酮对其预测效度进行了评估。事实上，已确立了其预测效度，因此该模型可用于评估新的候选药物。实验开始时，在每次实验前30分钟向大鼠注射生理盐水，以使其适应注射操作。

分析各次实验结果，当最近两次实验的奖励次数差异在15%或以下时，继续进行下一步。随后，将纳洛酮溶于生理盐水中，调节pH至中性后给予。不同处理组之间以及未处理对照组的测试顺序应随机化。

在给药间隔期间，让每只大鼠接受两次无任何处理的正常实验，仅暴露于生理盐水。此过程作为洗脱期，可使大鼠状态重置。重复测试，直至最终每只条件化大鼠均依次接受每种处理水平各一次，以及对照处理一次。

分析数据后，可选择最有效的剂量用于动物的渐进比率测试。根据所述方案，来自八个不同群组的239只大鼠被训练自行摄取酒精作为奖赏，无需限水或使用糖精-蔗糖渐减法。大鼠很快开始按压杠杆，在第一次实验中即获得了超过10次奖赏。

最终，大鼠获得了稳定的反应率，在每次半小时的实验中大约获得24次奖励。一种经美国食品药品监督管理局（FDA）批准的药物纳曲酮在三种浓度下进行了测试。正如预期，纳曲酮处理导致酒精自我给药行为呈剂量依赖性减少，为本实验方案提供了重要的药理学验证。

同样如预期所示，纳曲酮在递增比率程序下降低了大鼠对酒精的动机，表现为断点指标的下降。观看本视频后，您应能够充分理解如何在无需使用饮水剥夺或糖精-蔗糖渐退程序的情况下，快速建立大鼠的乙醇操作式反应。采用该实验方案，大鼠约两周内即可形成稳定自给药行为，达到具有药理学意义的血液酒精浓度。

在进行该操作时，必须尽可能保持每日条件的一致性。此外，从第一次强化反应开始，必须准确地将乙醇递送至接收容器中，因为任何故障都可能改变或延迟乙醇自我给药行为的获得。完成该操作后，可进一步开展其他实验，以研究酒精寻求与摄入行为的神经基础。