2018年6月6日
阴茎海绵体压力记录(ICP)是评估实验动物勃起功能的重要方法。本文详细展示了通过导管插入大鼠阴茎脚并电刺激海绵神经来记录ICP的操作步骤。
本实验的总体目标是通过导管插入阴茎脚海绵体,并在刺激海绵体神经后记录海绵体内压,以检测大鼠的勃起功能。该方法有助于回答男性勃起功能障碍领域中的关键问题,例如评估治疗手段和药物对勃起功能障碍的效果。该技术的一个优势在于,能够更准确地评估勃起功能及反射,以及与勃起反应相关的血流动力学动态变化。
该方法的可视化演示至关重要,因为阴茎海绵体脚的白膜区域较小,使得针头难以插入阴茎脚,导致插管操作学习困难。为手术做准备时,需制作一对用于海绵体内压记录的双极电极。将电极末端略微弯曲,并调节其间距至1到2毫米。
然后使用两个鳄鱼夹将电极连接到刺激器上。接下来,组装导管系统。首先,使用管路将一支23号皮下注射针头连接到一个三通旋塞阀上。
然后将三通阀连接至压力传感器。接着,将装有肝素生理盐水的10毫升注射器连接至三通阀的第三个位置。随后用肝素生理盐水充满整个系统,并检查是否存在泄漏。
随后将针头抬高至20厘米处,并将记录系统校准为20厘米水柱。校准完成后,调节针头高度并检查记录系统的准确性。根据需要重复校准,直至确认准确性无误。
接下来,将大鼠从动物房转移到手术室,并使其适应环境至少30分钟。同时,使用70%乙醇对手术器械进行消毒,并准备好所需的手术材料。30分钟后,开始准备第一只大鼠进行手术。
用戊巴比妥钠麻醉大鼠,等待5到10分钟。然后捏压大鼠的脚趾,检查是否无反射反应,以确认麻醉效果充分。接着,剃除腹部和颈部的毛发,并将大鼠仰卧位固定于手术板上。
现在用10%聚维酮碘和70%乙醇交替擦拭暴露的皮肤三次。同时涂抹眼膏以防止眼睛干涩。然后开始手术。
在分离阴茎海绵体神经之前,根据文本方案对左侧颈总动脉进行插管。用镊子提起腹部的皮肤和肌肉,开始神经分离。然后,用剪刀从下腹部至阴茎做正中切口。
接下来,轻轻地将肠道移至腹腔上部。然后用镊子夹住膀胱,并将其拉出腹腔。现在找到位于尿道腹侧的前列腺腹侧叶。
接下来,通过拉出腹侧叶、精囊和输精管,暴露前列腺的背侧叶。现在找到输精管与前列腺的附着点,然后分离前列腺与输精管之间的间隙。
继续操作,小心暴露位于前列腺与输精管连接处后方的纤维囊。然后找到位于前列腺表面的主要盆腔神经节及阴部海绵体神经。现在用棉签或滤纸小心擦干阴部海绵体神经区域,随后小心分离并用双极电极钩住右侧阴部海绵体神经。
继续手术时,使用解剖剪在阴茎皮肤上切开一个小切口,然后小心剥离阴茎体的皮肤。接着暴露足够的组织以分离阴茎横纹肌。现在找到耻骨的上支。
然后暴露覆盖海绵体球的球海绵体肌。接着,使用弯镊将球海绵体肌与坐骨海绵体肌分开。随后仔细分离坐骨海绵体肌。
然后剪开坐骨海绵体肌,暴露阴茎脚海绵体的白色白膜。现在进行插管操作。仔细沿阴茎脚海绵体的解剖方向,轻柔地将针头穿过白色白膜插入海绵体内部。
针头的位置对于手术成功至关重要,因此作为测试,可注入少量肝素化生理盐水。如果针头插入正确,应会出现轻微的阴茎肿胀。接下来,在不移动针头或扰动连接管路的情况下,小心地松开针头。
然后检查该区域是否有泄漏。若未发现泄漏,即可进行神经刺激并分析数据。所述的ICP记录检测被用于区分具有勃起功能障碍的衰老大鼠,以帮助量化潜在治疗手段或药物对勃起功能的影响。
勃起功能障碍组的典型ICP反应曲线明显低于对照组。通常选择最高ICP值进行统计分析。在计算ICP与平均动脉压的比值后,来自五只大鼠的汇总数据显示,与对照组相比,老龄组的该比值显著降低。
除了这两个关键参数外,老年大鼠的峰值ICP、平台期ICP、消肿时间、反应持续时间以及曲线下面积均显著降低,因此这些数据包含了大量反映勃起功能的定量测量指标。观看本视频后,您应能够充分掌握如何在动物身上高效地进行ICP记录。在尝试该操作时,请务必牢记使用肝素,以确保导管保持通畅。
一旦掌握,该技术若操作得当,大约可在两小时内完成。
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本文介绍了一种用于评估大鼠勃起功能的阴茎海绵体内压(ICP)测量的详细实验方案。该方法包括对阴茎海绵体脚进行插管,并电刺激阴茎海绵体神经。
在啮齿类动物中进行阴茎海绵体压力(ICP)记录可对勃起功能进行定量且具有生理相关性的评估,从而在临床前勃起功能障碍(ED)研究中实现对治疗候选药物的作用机制进行评价。该方法通过提供反映勃起反应机制的动态血流动力学数据,支持靶点验证和先导化合物筛选,减少对替代终点的依赖。将其整合到药物发现工作流程中,可在推进至后期研究之前提高对勃起功能障碍治疗药物去风险化的预测可信度。
ICP记录贯穿于从靶点验证到先导化合物发现,再到临床前药效测试的整个发现过程,通过提供血液动力学表型信息,为急诊治疗药物开发中的决策提供依据。