利用低氧/SU5416模型在小鼠中诱导和表征肺动脉高压

该方案可用于诱导肺动脉高压并进行右心室功能测定。Sugen 缺氧模型易于实施，可在诱导后两到三周内重现肺动脉高压的一些典型特征。利用该模型，我们能够识别参与疾病发展的新通路。

我们可以鉴定新的靶点并测试其治疗潜力。在开始诱导程序之前，将氮气罐固定在低氧舱附近，并将氧气控制器设定在10%氧气的水平。接下来，将新配制的SU5416溶液装入一支1毫升注射器中，注射器需配备25号针头，然后手动固定第一只待注射的动物。

捏住皮肤，形成与脊柱平行的帐篷状褶皱，同时务必紧紧抓住头部后方，以防止小鼠咬伤。将针头沿侧腹部皮肤褶皱处以平行于皮肤的方向皮下插入，并注入注射器内 100 微升的内容物。10 秒后，拔出针头并将动物放回笼中。

所有动物完成注射后，将小鼠放入通风的低氧箱中。进行低氧暴露时，需确认低氧箱配备有氧气传感器以监测氧气浓度，并且每三天仅可打开箱体不超过20分钟，用于清洁以及补充食物和水。每天检查动物是否有应激表现，并在连续三周内每周重复注射一次 SU5416。

在开始压力测量程序之前，准备好Y型管连接器，并使用手动模式检查呼吸机的功能。将吸气压设置为低于1厘米水柱，以避免气压伤，并将呼吸频率设置为每分钟110次。剪裁一根20号血管内导管以制作气管插管，并打开压力容积控制单元。

启动数据采集软件，将压力容积导管置于盛有 PBS 的 15 毫升离心管中，并将离心管放入 37 摄氏度的水浴锅内。随后根据制造商的说明书对导管进行校准。将小鼠放置于加热垫上，并插入直肠探头以监测体温。

接着，确认麻醉小鼠对脚趾夹捏无反应，并剃除颈部和胸部区域的毛发。用手术胶带固定小鼠的四肢，在颈中部皮肤做一处1厘米长的切口。使用棉签轻轻分离腮腺和颌下腺，以暴露气管下方的肌肉组织。

仔细剪开肌肉以充分暴露气管，并用剪刀在气管软骨环之间做一小切口。插入预先准备好的气管插管，移除血管内导管的金属导丝。然后将导管连接至呼吸机，并通过手动轻柔地充气肺部来确认气管插管的位置。

用胶带固定位置。进行右心室压力测量时，在剑突和上腹部上方做一厘米长的皮肤切口，从剑突远端的中线开始，小心地向两侧横向分离胸壁和腹壁的皮肤。打开腹腔后，仔细剪开膈肌，注意不要损伤跳动的心脏或肺组织。

使用棉签轻轻去除心包膜。将压力导管移近小鼠，并用带有针头的棉签在右心室非典型的远端部位刺出一个小孔。小心地将针头替换为压力导管，将压力导管平行于右心室方向插入，导管尖端朝向肺动脉。

观察压力波形以确保导管位置正确。待压力信号稳定后，暂停呼吸，并至少获取三次测量值。当所有测量值记录完毕后，小心地将导管放回水浴中盛有磷酸盐缓冲液（PBS）的离心管内。

此处展示了具有代表性的压力曲线，以及观察期结束时右心室压力的定量分析结果。经低氧联合SU5416处理后，重塑的肺动脉组织学分析显示，其中膜壁厚度较常氧动物增加。采用麦芽凝集素（Wheat germ agglutinin）染色评估心肌细胞肥大，结果表明，低氧联合SU5416暴露可导致心肌细胞尺寸显著增大，并引发右心室肥厚。

此外，通过测量富尔顿指数对右心室肥厚进行形态计量学评估，证实低氧动物的右心室肥厚程度增加。进行功能测量时需注意避免出血，因为出血可能对研究结果产生负面影响。本方案也可用于诱导大鼠肺动脉高压，仅需进行轻微修改即可。

值得注意的是，在大鼠中仅需一次 Sugen 注射就足以诱导肺动脉高压。