利用互补方法评估鱼类饲料中的矿物质可利用性——以大西洋鲑鱼饲料中锌为例

我们研究了在饲料成分变化的背景下，锌、硒等微量金属以不同化学形态或来源（即所谓的）溶解度的可利用性。在放射性核素实验组中，称取约0.2克粉碎的大西洋鲑鱼饲料样品，加入已知比活度的锌放射性示踪剂，置于5毫升体积的样品管中混合。另准备六份等量缓冲液，并向每份中分别加入此处所示的一种氨基酸，使其终摩尔浓度达到5毫摩尔。

加入淡水肠道腔内缓冲液以孵育样本。接着，将淡水肠道腔内缓冲液加入含有氨基酸的缓冲液等分试样中。盖紧管盖，并在旋转仪上以25 RPM转速旋转30分钟。

然后，在 1,157 × g 条件下离心 10 分钟，以分离可溶性和非可溶性组分。使用γ计数器测定可溶性和非可溶性组分中锌放射性示踪剂的每分钟计数。用一毫升 EDTA 溶液将源自虹鳟鱼的肠道细胞系清洗两次，每次清洗后用移液器吸出溶液。

用0.25%胰蛋白酶溶液处理洗涤后的细胞。将培养瓶轻轻以锐角旋转两分钟，然后加入10毫升含5%胎牛血清（FBS）的L-15培养基以中和胰蛋白酶。

使用无菌移液管将所得的细胞悬液转移至锥底离心管中。在130 × g条件下离心3分钟。然后使用血细胞计数板通过手动计数测定收获细胞的密度。

将细胞以每毫升50,000个细胞的密度接种到24孔板中，每孔接种一毫升，实验前将培养板置于19摄氏度、正常大气条件下孵育48小时。喂养鱼类11天并实施安乐死后，通过从腹鳍向肛门方向刮取收集鱼类粪便的混合样本，并将其置于培养皿上。使用刮铲将粪便从培养皿转移至50毫升锥形管中。

立即将样品储存在 20 摄氏度条件下。本研究采用多种互补方法评估鱼饲料中矿物质的可利用性。通过尺寸排阻色谱-电感耦合等离子体质谱法对大西洋鲑鱼饲料进行代表性分析，可获得可溶性组分中锌化学形态的相关数据。

在此组分中可观察到五个含锌的峰，每个峰具有不同的分子量。可溶性组分中发现的锌化学形态可能来源于多种途径，因为所使用的饲料包含海洋来源和植物来源的成分，并额外添加了补充成分。这些物质的分子量范围表明，它们可能是金属结合蛋白。

尽管添加的锌65的溶解度会增加所有被检测氨基酸的存在量，但组氨酸和赖氨酸的存在使锌的溶解度更高。在Arteca GC细胞中，顶端锌吸收受到2毫摩尔浓度L-蛋氨酸或DL-蛋氨酸存在的显著影响。此外，BCH的存在会负向影响蛋氨酸对锌吸收的作用。

本方案的主要优势在于，我们尝试将视觉、分析以及体内研究中的不同方法相结合，以在研究矿物质可利用性时实现相互比较与补充。