利用双极电极通过杏仁核电点燃建立颞叶癫痫小鼠模型

本方案提出了一种以杏仁核为起源的癫痫模型。该模型为研究内侧颞叶结构奠定了基础，可被视为本实验的理论依据。

由于该方案成本较低且效率高，因此可在大多数实验室快速开展。演示该实验操作的是本实验室的研究生Yongchang Lu。首先准备预先制备好的组件，包括长度为2厘米、涂有聚四氟乙烯的钨丝，其线径为76.2 µm。

取一段长度相同的直径为127微米的银丝，以及一组2×2规格的绳状插针。使用打火机灼烧每根钨丝的一端，以去除五毫米长的绝缘涂层。剥离一段超细多股导线的绝缘层。

从底部开始向上端解开，直至颜色变深并继续延伸至顶端。通过夹住一端并轻轻扭转另一端，将这种超细金属丝与钨丝结合，使两种材料易于相互缠绕。轻轻拉拽以确保金属丝紧密缠绕，并剪去多余的超细金属丝。

在整个过程中尽量保持钨丝笔直。将绳状引脚固定在焊接台的夹具上，引脚较长的一端朝外。用注射器针头取适量焊膏，并将其涂抹到引脚上。

将焊接烙铁加热至 320 摄氏度。用烙铁尖端熔化并涂抹一些无铅锡丝。将钨丝的上端与绳状针的一根针重叠，并利用烙铁上的焊料将钨丝焊接到针上。

以相同方式将另一根钨丝和另一根银丝焊接至绳状针脚，使每根导线对应一根针。剪取两段略长于钨丝上端的热缩管，套在两根钨丝的焊点上，确保导电部分完全被热缩管覆盖，从而使两根钨丝的电路不会串联在一起。

将电极从焊接台夹具上取下，并用大钳子轻轻夹住电极，因为在加热热缩管时电极易变形。使用导热性能良好的夹具，并稍加用力夹紧。打开通风装置并加热，直至温度达到320摄氏度。

用热风枪吹热缩管数秒钟，直至其收缩紧固。使用热熔胶加固电极。捏住两根钨丝，将其相互绞合，但保持末端彼此分离。

将扭曲的钨丝剪至约10毫米长，使末端间距不超过0.5毫米。使用万用表检测电极：将万用表的一个表笔接触绳状引脚未焊接的一端，轻轻将钨丝或银丝的末端接触另一个表笔，检查电路是否通畅。

确保线路不要串联。将每根导线末端的绝缘外皮剥离五毫米，以露出内部的金属导线。在每根起始导线上套入一段热缩管。

将每根导线与脑电图设备连接器插头焊接。使用热风收缩热缩管。在每个转子导线上加一段热缩管。

将红色和橙色电线的导电部分拧在一起，并焊接至接头和接线端子，以适配绳状插脚。将另外两根电线分别焊接在接线端子的每个接头上。称量小鼠的体重。

当小鼠完全麻醉后，用剃刀剃除从眼睛到耳朵区域的毛发。将小鼠固定在立体定位仪上，将上门齿放入门齿杆中，并将双侧耳棒以相同的深度插入耳朵中。

涂抹红霉素眼膏以防止手术期间因强光照射导致的眼睛干燥和失明。使用碘伏和75%酒精交替擦拭，至少对手术区域进行三次消毒。作纵向切口以充分暴露手术区域，或作三角形切口，只要能暴露前囟和后囟以及电极植入位置即可。

将一小块棉花揉成球状，用3%过氧化氢润湿。用棉球轻轻擦拭暴露的颅骨区域，去除附着的软组织，直至观察到前囟和后囟。调整前部和后部高度，使前囟和后囟处于水平位置。

以前囟的位置作为坐标轴的原点。将不锈钢螺钉固定于左侧小脑颅骨处。根据前囟确定杏仁核点燃的坐标，并调整立体定位仪以定位该位置，做好标记。

使用直径为0.5毫米的颅骨钻头在标记位置钻孔。将电极固定在立体定位仪的定位杆上。将电极垂直置于孔上方，并缓慢下降至负4.9毫米位置。

将银丝在螺丝上缠绕三圈，操作时注意不要晃动电极主体。混合牙科水泥，并轻轻涂抹于电极和颅骨表面。

当牙科水泥硬化后，修整其外部，直至包埋固定电极的水泥呈圆锥形。然后将电极从立体定位仪上松开。取出小鼠并放回笼中。

将其与其他小鼠分开放置。将小鼠放入一个定制的盒子中，盒内有滑环电缆连接小鼠头部的电极和脑电图（EEG）设备。将电缆从盒盖上的孔中穿过，并调整盒内电缆的长度，以允许小鼠自由活动。

打开脑电图设备并确保其正常工作。将刺激器参数设置为在10次刺激周期中，以60赫兹频率、持续1秒的串脉冲，输出持续时间为1毫秒的单相方波脉冲。首次刺激的电流强度从50微安开始。

监测脑电图（EEG）中是否出现以高频尖波为特征的发作后放电。若未观察到发作后放电，则在下一次刺激时增加25微安电流，并每10分钟重复此过程，直至观察到持续至少五秒的发作后放电为止。以确定的电流强度每15分钟对小鼠进行一次刺激，每日刺激次数不超过20次。

监测动物对刺激的行为反应。对六只健康的成年雄性C57黑6小鼠进行了电极植入手术，并在术后两周开始进行电刺激。随着刺激次数的增加，行为性癫痫发作程度逐渐加重，并记录达到完全点燃所需的刺激次数。

放电后的脑电图持续时间为5到15秒。随后，颅内自发性放电增强，并开始出现行为学症状。癫痫发作持续时间通常少于一分钟，这降低了因严重抽搐导致呼吸暂停而引发的死亡风险。

完全点燃后两小时，通过免疫组织化学法检测脑组织中 c-Fos 的表达。结果显示，同侧杏仁核中 c-Fos 的表达显著增加，验证了该模型的可行性。钨丝末端的间距不应超过半毫米，否则将无法穿过脑部小孔。

电极的长度不应过长，否则会影响小鼠的活动能力。