一种用于下游游离DNA检测的标准化液体活检预分析方案

本方案是基于循环游离DNA的下游液体活检应用中血液样本处理与保存的标准操作流程。尽管该技术已应用数年，但这是首个公开发表的标准操作流程。本方案易于实施，仅需大多数转化医学或科研实验室常见的标准设备即可完成。

所有实验室工作人员均可执行该方案。该方案有助于标准化样本的采集和储存流程，最终将影响临床应用，并减少不同中心在执行相同或类似下游分析时的变异性，而精确性在这些分析中至关重要。该方法在肿瘤学研究以及临床应用中尤为有用。

然而，该方法也可应用于其他使用液体活检的非癌症疾病。在血液样本离心后，确定应移除多少血浆或血清可能较为困难，但遵循本具体指南将有助于解决这一问题。其余实验步骤非常简单，即使在实验室经验有限的情况下也易于操作。

演示该操作的将是本实验室的技术员 Jorge。首先，在室温下将含有新鲜血液的离心管以1600 × g离心10分钟，并启用最大刹车。小心地从离心机中取出离心管。

血清上清液的上层将呈现清澈的淡黄色。检查样本是否出现溶血迹象，并在适当时记录溶血的存在情况。在II级生物安全柜中，将血清以250 µL的等分试样转移至收集管中。

分装样品必须正确标记。立即将血清在储存盒中直立放置于零下80摄氏度条件下冷冻，并记录样本储存时间。确认样本已在规定的4小时内完成处理。

将EDTA管在室温下以1600 × g离心10分钟，并应用最大刹车。离心后，血浆上清液应呈现清澈的淡黄色。检查样本是否出现溶血迹象，并使用一次性移液管将血浆转移至15毫升离心管中，注意不要扰动细胞层。

在细胞层上方保留约五毫米的少量血浆残留体积。若观察到溶血现象，应弃去该样本，不再用于后续分析。将血浆与15毫升离心管一同离心，以去除在初次离心步骤中可能残留的完整血细胞。

小心地将离心管从离心机中取出，注意不要扰动管底的细胞沉淀，使用一次性移液管将1至4毫升血浆转移至1至4毫升的聚丙烯冻存管或Eppendorf管中。管底需保留一定残余血浆体积，以避免血细胞污染血浆。立即将血浆在储存盒中直立放置于-80摄氏度条件下冷冻，并记录样本储存时间。

确认样本已正确标记，并在规定的四小时内完成处理。使用 P1000 加样器和带滤芯吸头收集细胞层，并转移至一个 2 毫升离心管中。立即在 -80 摄氏度下冷冻保存。

此处展示了一个高质量cfDNA提取的示例，可用于下游应用；而该图像则代表了一个不合适的样本示例，其基因组污染程度较高。血浆或血清组分必须呈黄色，颜色深浅可能因个体样本而异。

出现溶血的样本应予以弃用。在移除血浆组分时，注意不要去除任何细胞沉淀物。本方案也可用于其他基于核酸和蛋白质的应用，例如利用免疫检测技术检测血清和血浆样本中的非编码 RNA 或蛋白质。

这是一种在许多实验室中广泛使用的技术。本方案有助于研究人员标准化分析操作流程，因为这是未来临床应用所必需的关键环节。