用于子宫内膜蜕膜化研究的去卵巢小鼠人工蜕膜化模型的建立

去神经化功能障碍可导致子宫内膜疾病的发生，如严重情况下反复流产。该方法为研究子宫内膜去神经化提供了一种良好且可靠的动物模型。通过卵巢切除术建立的人工去神经化模型，可避免神经激素的影响，通常可获得高度可重复的结果，且组内差异较小。

手术前一天，使用高温高压灭菌器对手术器械进行灭菌。涂抹眼药膏于眼球表面，以防止麻醉期间眼球干燥。待小鼠完全麻醉后，开始手术操作。

将小鼠俯卧位放置于手术台面上，用肥皂水润湿背部后剃除毛发。使用70%乙醇对皮肤进行消毒。在两侧后肢大腿根部上缘距脊柱0.5厘米处平行定位手术切口位置。

以切口部位为中心，用碘伏对切口区域消毒三次。使用剪刀做一条长约0.5至1厘米的纵行切口。剪开筋膜，并用镊子被动分离肌肉。

通过薄的肌层，在靠近肾脏下极的切口区域找到一块白色脂肪垫。用止血夹夹住脂肪组织，并将被脂肪垫包裹的卵巢拉出切口。用弯头镊子夹住卵巢与输卵管的连接处，沿卵巢蒂用剪刀将卵巢切除。

使用电凝笔或在酒精灯上加热的一毫升注射器针头止血。用生理盐水冲洗手术切口，以防止组织粘连。分别使用4-0缝线缝合肌肉和皮肤，并再次用碘伏对手术切口进行消毒。

将小鼠俯卧位放置于笼中，并在25摄氏度的培养箱中复苏约两小时，培养箱需配备光源和通风系统。术后注意观察小鼠状态。

将它们单独放回原来的饲养位置，直至完全恢复，并提供充足的水和食物。连续三天，每天向每只小鼠皮下注射含100纳克雌激素的50微升芝麻油溶液，随后休息两天。再连续三天，每天向每只小鼠注射含1毫克孕酮和10纳克雌激素的50微升芝麻油溶液。

在第三次雌激素-孕激素联合注射后6小时，对小鼠进行手术以建立人工残留化模型。在输卵管远端找到子宫角，沿子宫角缓慢注入20 µL芝麻油。将组织推回原位，缝合切口，并让小鼠恢复。

取3至5毫升子宫组织，用10%福尔马林固定，石蜡包埋并切片。切片经苏木精和伊红染色，以观察形态学变化。另取3至5毫米子宫组织，置于最佳切割温度化合物中，液氮冷冻后，于-80°C冰箱中保存。

将组织冷冻切片至10微米厚度，并通过偶氮偶联法检测子宫组织中的碱性磷酸酶活性。由油诱导产生的小鼠人工去分化子宫在总体形态上更接近妊娠期子宫，其子宫体增厚，宫腔较未诱导侧更小。

诱导侧子宫角的体积和重量显著高于未诱导侧。子宫组织的苏木精和伊红染色显示，腺体消失，诱导侧的子宫内膜基质细胞分化为胞质较大、多核且细胞边界不清的蜕膜细胞。未诱导侧切片显示子宫内膜组织处于正常生理状态下的形态。

偶氮偶联法结果显示，经诱导侧的碱性磷酸酶含量显著高于未诱导侧。qPCR结果表明，诱导角中PRL-8-A-2、ALPL和IGFBP-1的mRNA表达水平显著高于未诱导侧，提示油脂可诱导小鼠产生人工去中心化现象。同窝补充是一个耗时较长的过程，需特别注意同窝个体间的污染问题，这是成功的关键。

根据该模型，可进行腺病毒的子宫角注射，以研究特定分子调控残留过程的相关机制。