部分坐骨神经结扎：一种用于研究新型疗法镇痛效果的慢性神经病理性疼痛小鼠模型

随着大量创新疗法正在被研究用于治疗慢性疼痛，本方案为诱导神经病理性疼痛所需手术的标准化提供了关键概念。坐骨神经部分结扎（PSNL）是研究神经病理性疼痛的一种优势模型，因其可重现人类神经病理性疼痛中的多种症状。由于PSNL能够重现人类神经病理性疼痛中的多种症状，本方案为研究和开发新的疼痛管理疗法提供了重要的基础。

演示该操作的是我实验室的医学博士在读生 Kevin Cheng。开始前，将小鼠置于透明聚碳酸酯盒中，放置在与测试房间相同的房间内的金属丝网上，适应冯·弗雷测试装置一小时。将一系列校准过的精细单丝纤维垂直施加于坐骨神经慢性压迫损伤（PSNL）模型小鼠对侧后肢足底表面，小鼠需固定于悬空的金属丝网笼中。

通过依次增加或减少与细丝尺寸相对应的刺激强度来确定缩足阈值。当无反应时，增加细丝的尺寸；当动物出现缩足反应时，减小细丝的尺寸。在数据表中记录阴性和阳性反应，并在首次出现阳性反应后，使用不同的细丝对同一足爪重复测试四次。

在测试前一小时，将小鼠置于与测试室相同的房间内的透明聚碳酸酯盒中，使其适应Hargreaves测试装置。使用Hargreaves装置测定基础的足爪回缩潜伏期。将辐射热源聚焦于PSNL同侧后足底表面，并开始刺激。

当动物缩回其足爪时，等待运动检测器停止刺激并关闭计时器。调节热源强度，使足爪回缩潜伏期的基线值约为 10 秒。随后，将回缩时间记录在表格中。

将加热板温度设为 52 摄氏度。将动物放入测试舱内，并启动计时器。观察其伤害性防御行为，一旦观察到伤害性防御行为，立即停止计时器。

然后将动物从实验装置中移出，并记录该行为的潜伏期。每次测试不同动物之间，务必清除装置内残留的尿液，以避免影响热刺激的温度。每只动物测试后，用70%乙醇清洁测试箱，以减少气味对行为的干扰。

制作神经玻璃钩时，先打开本生灯。用一只手握住玻璃棒的一端，将其置于火焰上。当玻璃棒开始熔化时，用另一只手中的玻璃棒引导并拉伸第一根玻璃棒上熔化的部分。

将第一根玻璃棒从火焰中取出，利用第二根玻璃棒使熔化端自然向内卷曲，形成一个小球状。用镊子夹住后肢足趾，确认无足趾反射，并在涂抹润滑性眼膏前检查角膜眨眼反射。确定手术侧后，将动物后肢在大腿区域塑形，下端朝向髌骨，上端朝向髋部并位于股骨上方。

接着，使用三块独立的纱布，分别蘸取氯己定，沿同一方向擦拭三次，每次擦拭之间交替使用温热的无菌生理盐水。然后将腿部穿过一块10厘米×10厘米无菌铺巾上的切口，以在选定的腿部周围建立无菌区域。使用精细的手术剪，在大腿外侧中线处做一个约2毫米的小切口。

将剪刀以环形动作滑入皮肤下方，切开筋膜并建立通路，扩大切口空间。接着，使用结扎镊在大腿肌肉上垂直进行深度约一厘米的锐性切开，角度为90度。然后将精细的小剪刀以同样90度角插入同一切口，轻轻张开剪刀以分离肌肉组织，直至暴露出坐骨神经。

找到与大腿垂直部分平行、从髋部向膝部走行的坐骨神经。在继续操作前，将打结镊子中的剪刀从体内取出。使用神经玻璃钩上的超细镊子从下方分离神经。

在靠近髋部且距离膝关节最远的股骨转子附近，仔细分离神经与其周围结缔组织。将神经置于玻璃棒上，确保玻璃棒末端可防止神经滑脱。在坐骨神经分出腓总神经、胫神经和腓肠神经分支之前，使用9-0尼龙缝线对坐骨神经宽度的三分之一处打外科结进行结扎。

打结完成后，小心地将神经从玻璃棒上滑下，并将其放回分离肌肉下方的原始位置。接着，使用可吸收的5-0聚乙醇酸缝线缝合肌肉切口。另外，使用不可吸收的6-0聚丙烯缝线缝合皮肤。

然后记录手术和麻醉结束时间。将小鼠单独置于恢复笼中使其苏醒，之后再转移到新的清洁笼具中。使用Von Frey、Hargreaves或热板实验评估热痛觉和机械性痛觉过敏及其可能的逆转情况。

在术后28天内，接受PSNL手术的小鼠对机械刺激的阈值低于假手术组动物。热超敏反应评估也获得了类似结果。在暴露于辐射热刺激后，PSNL组小鼠的足爪回缩潜伏期延长，当小鼠被放置在52摄氏度的加热板上时，其回缩潜伏期也有所增加。

注射两种不同剂量吗啡的小鼠表现出痛觉过敏的逆转，持续时间为一到两个小时。注射吗啡四小时后，机械性痛觉过敏恢复至基线水平。当向小鼠腹腔注射两种不同剂量的布洛芬时，与注射生理盐水的小鼠相比，机械性痛觉过敏程度降低。

限制对神经的额外损伤至关重要，因为这可能影响疼痛感觉阈值。实验人员应特别注意，使用玻璃钩以减少意外损伤。通过此操作，该慢性神经病理性疼痛模型可用于识别和表征药物的抗伤害效应，从而推动新型疼痛管理疗法的开发。