大鼠胫神经瘤移位模型中的手术操作与行为学检测

该方法有助于寻找治疗神经瘤疼痛的更佳疗法。此技术的优势在于，可在同一重复模型中独立测量神经瘤疼痛和广泛性疼痛。TNT 模型特别适用于神经瘤疼痛的检测，因为可直接使用 von Frey 单丝对神经瘤本身进行机械刺激。

首先将麻醉后的大鼠仰卧放置，头部朝左或朝右。将需要手术的腿置于术者附近。外旋后肢下部，使内踝朝上。

在将大鼠置于6倍放大倍率的体视手术显微镜下之前，使用碘伏和酒精交替消毒剃毛区域，至少进行三轮。定位膝关节，用手术刀从后肢小腿中部至踝关节内侧做2至3厘米的纵向切口。必要时，用显微剪进一步切开皮肤和皮下组织，直至肌肉层可见。

识别浅层神经血管束，其表现为两到三条可在肌层上自由移动的白色、紫色或红色条索状结构。保持神经血管束完整，从此束上分离后方组织。

接下来，解剖以切开腓肠肌之间的筋膜。在肌肉筋膜之间，可找到较深的神经血管束，其中包含胫神经，其直径约为浅层神经血管束的三倍。可将胫骨作为另一个解剖标志，因为胫神经恰好位于胫骨后方走行。

为了从周围血管束中游离胫神经，应使用钝性操作移动胫神经，并切断在移动胫神经时出现牵拉的暴露组织。当整个胫神经完全暴露后，将肌肉层复位，以防止神经脱水，直至完成胫前皮肤与皮下肌肉层的分离。为了从皮下肌肉层分离胫前皮肤并建立皮下隧道，使用钝性显微外科工具，提起皮肤，将钝头端平行于皮肤推入组织中。

确保隧道末端位于胫骨前或外侧，以便于检测神经瘤时易于接触该区域。在踝关节附近远端切断胫神经后，将显微镜放大倍数调整至10倍或16倍，并识别踝关节附近切断处近端的胫神经外膜。或者，若胫神经分叉位置更靠近近端，则识别踝关节附近切断处近端的内侧和外侧足底支的外膜。

用镊子夹住近端神经断端的神经外膜，将8-0尼龙缝线从神经与神经外膜之间穿入，进针深度约为0.5毫米，小心地将缝线穿过神经外膜。将缝针在皮下隧道末端的皮下组织进针，然后牵拉缝线，将神经横向移入皮下隧道内。打结固定缝线。

使用一根颜色较深的4-0粗缝线，将其紧贴固定好的神经断端打结，但不穿透皮肤。确保缝线在皮肤外可见。移动足部和肌肉后，检查神经是否保持在原位。

用剪刀剪断缝线，4-0缝线留稍长线尾，随后剪断8-0缝线。将显微镜放大倍数调回6倍，使用8-0缝线进行表皮内缝合关闭皮肤。用棉签蘸取0.9%氯化钠溶液轻轻清洁皮肤。

如果房间温度较低，可在清洁笼具的一部分下方放置加热垫，并将大鼠置于笼内，用纸巾覆盖，保持其体位舒适。确保大鼠能方便地接触到食物和水。为刺激无菌神经以诱导高敏感性，应将单丝纤维施加于接近毛发边缘的外侧区域，注意不要接触足垫。

为了刺激胫神经以检测感觉减退，应将单丝纤维施加于后肢足底表面的中点。进行神经瘤部位测试时，应使大鼠的鼻部朝向肘窝方向握持。若用右手握持大鼠，则其左后肢应自由悬垂于右手拇指与食指之间。

在基线状态下，确认大鼠在抓持过程中保持安静且舒适后，将15克单丝纤维轻轻置于暴露的后肢胫前表面。术后，将15克单丝纤维置于可见缝合处，并对单丝纤维施加足够的力量，使纤维弯曲并维持一秒钟。神经瘤部位的Von Frey测试显示，在基线状态下，大鼠对15克单丝纤维刺激的反应率为10%至15%。

胫神经瘤移位手术后一周，反应率从45%上升至50%。在对侧，术后反应率与基线水平相似。约20%的大鼠未形成疼痛性神经瘤，其反应率与基线相比未升高。手术12周后，在切断并移位的胫神经残端末端，所有大鼠均形成了神经瘤。

胫神经横断手术降低了由胫神经支配的后足底中部的机械敏感性。术后一周出现的低敏感性与对侧及基线水平相比具有显著差异，并从术后三周开始持续至术后12周。在由完整的腓肠神经支配的后足底外侧区域，大鼠从术后一周起即出现与对侧及基线水平相比显著不同的机械性痛觉过敏。

术后持续存在12周。在对侧足部，与基线相比，由腓肠神经或胫神经支配区域的机械敏感性均未受到影响。请务必为胫神经预留适当的长度，以保证外侧移位时的活动范围。

同时请用深色缝线标记此神经瘤位置。