精液中过氧化物酶阳性白细胞的检测

男性生殖医学是我的主要研究方向，本方案主要解决了精液中过氧化物酶阳性白细胞分析的速度和成本问题。精液本身具有高度异质性，这会显著影响精液分析结果的稳定性。因此，在检测前必须确保精液完全液化并充分混匀。

本方案结合手动与自动方法，利用精子浓度计算白细胞浓度，与传统的白细胞分级计数法相比，节省时间且更具成本效益。首先，准备配制工作液所需的试剂，并将其置于室温下。同时，准备一个不透光的瓶子用于储存工作液，避免光照。

然后使用200微升移液器将100微升氯化铵溶液转移至不透光试剂瓶中。同时将100微升EDTA钠溶液转移至该试剂瓶中，并通过移液操作混匀。接着，加入900微升邻甲苯胺底物溶液至不透光试剂瓶中，并轻轻吹打混匀。

然后将5 µL过氧化氢溶液转移至试剂瓶中。使用1000 µL移液器，通过反复吹打轻轻混匀溶液。为制备精液样本，打开恒温台并加热至37 °C。

同时，将聚合物材质的容器放在电子天平上归零去皮。收到精液样本后，称量样本重量，并在容器外壁记录详细信息，如识别编号、采集时间、禁欲时长。随后，将精液样本置于恒温架上，使其液化。

将精液样本吸入基于聚合物的移液管中，并在30分钟内每5分钟检查一次液化情况，直至精液样本完全液化。首先，使采集的人类精液样本液化，并使用巴斯德移液管充分混匀。然后将100 µL精液样本转移至离心管中。

向该离心管中加入 900 微升染色液。通过反复移液混合，充分均质化反应物。将离心管置于二维摇床，在室温下以 200 转/分钟持续振荡 30 分钟。

在等待静置反应的同时，使用CASA系统进行精子浓度分析。开启系统后，双击SCA显微镜图标以打开应用程序软件。然后通过移液充分混匀精液样本，并将最多10微升样本转移至SCA计数池中。

等待60秒，直至精液样本停止流动。接着，将SCA计数板放置于CASA系统的样本架上。在应用程序软件中，于对话框内输入患者信息。

点击开始按钮，记录精液中精子的浓度。30分钟染色反应完成后，停止摇床。分析前，用移液器吹打混匀离心管中的内容物。

将最多10微升反应物转移至精子计数室，并用专用的玻璃盖玻片覆盖。将精子计数室放置在显微镜载物台上，打开光学显微镜。然后等待60秒，使反应物样本停止漂移。

在10倍物镜下，调节粗调和微调旋钮以选择视野。然后切换至40倍物镜，观察精子和过氧化物酶阳性的白细胞。使用电子计数系统计数至少200个精子以及呈棕色的过氧化物酶阳性白细胞的数量。

利用该技术，精液样本中的过氧化物酶阳性白细胞被染色。过氧化物酶阳性白细胞呈棕色，与未染色的普通圆形细胞形成对比。