卵丘-卵母细胞复合体的即时部分去除：一种用于快速观察体外受精的优化方法

我们的研究重点是通过评估立即部分去除卵丘-卵母细胞复合物是否能够提高受精率，从而改善体外受精（IVF）的结局。观察效率影响受精过程及胚胎质量，并有助于优化实验室操作流程。我们的目标是改进IVF技术，以获得更佳的临床效果。

我们已证实，在卵丘细胞部分去除过程中，对卵母细胞进行适度加压可显著提高体外受精（IVF）中受精情况观察的效率。该方法有助于更准确地判断受精时机，并可能优化胚胎质量及IVF结局。本方案通过缩短操作时间、减少胚胎的环境暴露，从而提升IVF效率，并可能改善胚胎质量。

与传统技术相比，它提供了一种更简便高效的方法。首先，将卵母细胞拾取皿放入37摄氏度的培养箱中过夜。将12毫升卵泡操作培养基加入14毫升圆底试管中，于37摄氏度下过夜培养。

然后在取卵前30分钟，将试管转移至预热的试管架中。接着，在一个14毫升的圆底试管中加入9毫升卵泡操作培养基，并在37°C下孵育过夜。在取卵当天，将4.5毫升培养基转移至预先孵育的取卵皿中，该取卵皿表面覆盖有2毫升100%石蜡油。

然后向一个卵母细胞采集皿中加入 4.5 毫升受精培养基，并在 37 摄氏度下过夜孵育。随后，向一个覆盖有 100% 石蜡油的 6 厘米培养皿中加入 1 毫升受精培养基。为使玻璃巴斯德移液管的尖端变钝并呈圆滑状，将其在酒精灯上灼烧约 5 秒钟。

将吸头连接到巴斯德移液管的尖端，使其能够接触培养皿底部而不造成划伤。用滤泡操作培养基冲洗玻璃巴斯德移液管，并将其置于10厘米培养皿中。简而言之，在经阴道超声引导下，使用17号针头获取卵母细胞。

将收集在14毫升圆底试管中的卵泡液倒入10厘米培养皿中。将培养皿置于恒温平台上。在体视显微镜下观察卵冠丘复合体（OCCC），以确认卵母细胞的存在并评估其成熟度。

确认卵丘-卵母细胞复合体（OCCC）中是否存在卵母细胞，并对卵母细胞的成熟度进行初步评估。预先准备好带有圆形火焰抛光的巴斯德吸管制成的硅胶抽吸吸管。用左手无名指轻轻抬起培养皿至9点至10点位置，同时将其向左倾斜约15度，然后进行OCCC的抽吸。

在将吸出的卵冠状复合体（OCCC）吐到培养皿11点钟位置的同时，轻轻向右水平拉长。随后观察扩张的OCCC周围颗粒细胞的大小。接着，使用巴斯德吸管在拉长的OCCC适当位置快速向下切割，轻柔地去除多余的颗粒细胞。

将切割后的OCCC转移至含有OCCC冲洗液的收集皿中。将剩余的卵泡液倒入无菌样本容器中。首先，在光学显微镜下评估所采集精液样本的精子浓度、活力和形态。

然后将精子沉淀转移至新的离心管中，用受精培养基洗涤两次。在需要使用前，于6%二氧化碳和37摄氏度条件下孵育。去除多余的颗粒细胞后，向受精培养皿中加入6至8个卵丘-卵母细胞复合体（OCCC）以及1毫升受精培养基。

在受精培养皿中，取出卵丘-卵母细胞复合体（OCCCs）后约两到三小时，用正常形态的精子在单滴培养液中进行受精。对于短期受精，将OCCCs与精子共孵育四到六小时。孵育结束后，机械去除包围卵母细胞的卵丘细胞。

使用内径略小于卵母细胞的移液器吸取卵母细胞，以确保完全去除细胞。为确认受精情况，需观察是否存在两个极体。出现第二极体的卵母细胞被视为已受精。

常规受精时，在精卵共孵育18至20小时后，使用移液管去除卵丘细胞，以评估受精情况。取卵后将受精卵继续培养3至5天。在授精后20小时评估受精情况，以确定原核数目。

随后，将每个受精卵单独培养于培养液滴中，并在受精后将胚胎转移至卵裂期培养液。将第3天的胚胎转移至囊胚培养液，并于第5天进行评估。连续性数据以均值和标准差表示，有序数据以比例表示。

在接受短期受精的47名患者中，两组在患者年龄和获卵数方面均未观察到显著差异。尽管在卵裂率、优质胚胎率和优质囊胚率方面未发现显著差异，但与对照组相比，部分去除卵丘复合体（OCC）组的平均操作时间显著缩短。在接受传统体外受精（IVF）的患者中，两组在患者年龄和获卵数方面也表现出相似性。

尽管在OCCC组的部分切除中观察到平均手术时间略短，但差异无统计学意义。与前一组相似，卵裂率、优质胚胎率和优质囊胚率均未发现显著差异。