评估长期单侧输尿管梗阻解除后结构与功能长期转归的小鼠模型

本实验室致力于研究改善肾损伤后长期预后的机制与治疗方法，本方案的具体目标是开发一种用于研究解除尿路梗阻后长期预后情况的工具。我们建立了一种单侧可逆性输尿管梗阻的小鼠模型，可用于评估肾脏在解除尿路梗阻后长期的功能与结构变化。其他方法通常需要多次手术或显微外科技术，而大多数实验室并不具备这些条件。此外，由于本模型为单侧梗阻，大多数其他方法无法在不进行分肾功能检测的情况下对功能恢复情况进行评估。该模型的关键要点仅有两个：第一，每次实验中需将血管夹以一致的位置放置于输尿管近端；第二，数天后移除血管夹时，不得对输尿管或肾脏造成损伤。

[Rachel] 首先，用消毒剂准备已麻醉小鼠的手术侧。使用剪刀和镊子沿中线在皮肤和皮下层做一条1.5厘米长的纵向背侧切口。在左肾上方的腰部肌肉和筋膜处做一个小切口。然后用一对镊子将左肾牵出体外。使用钝头镊子，小心分离肾下极的脂肪组织以及输尿管附近的结缔组织。定位输尿管区域，随后将输尿管及其结缔组织从肾蒂中分离出来，以避免夹闭时包含肾静脉和肾动脉。使用血管夹施加器打开血管夹，并将其直接置于肾盂下方的输尿管处。利用血管夹上的刻度标记，确保所有小鼠所受压力一致。现在用浸有生理盐水的无菌棉签轻轻将带有夹子的肾脏推回腹膜后间隙。然后使用可吸收缝线缝合肌肉层，用皮肤夹闭合皮肤层。为移除输尿管夹，先取下伤口夹，随后在不改变切口形态的前提下，通过原切口清洁手术区域以暴露夹子。重新打开肌肉层，暴露腹膜后间隙。使用镊子小心地在腹膜后间隙中定位血管夹，注意不要将肾脏牵出体外。使用夹子施加器轻轻打开夹子，同时用镊子将周围组织向后牵拉，安全取出夹子。随后将肾脏牵出体外，检查肾盂是否存在梗阻。肾盂肿胀可确认为肾积水。用浸有生理盐水的无菌棉签将肾脏轻轻推回腹膜后间隙，并按前述方法缝合切口。为进行对侧肾切除术，使用原始皮肤切口重新打开背部切口。切开右肾上方的腰部肌肉和筋膜。然后用镊子将右肾牵出体外。用光滑的弯头镊子夹住右肾，将其上下极从周围组织中游离出来。在完全游离肾脏后，使用双外科结在肾血管和输尿管周围结扎一根Foro丝线缝线。等待约30秒，直至肾脏颜色变暗。然后用光滑的弯头镊子夹住肾脏，并用弯剪在结的远端剪断，将其切除。用浸有生理盐水的无菌棉签轻轻将残留的肾蒂推回腹膜后间隙，随后使用缝线和皮肤夹闭合肌肉层和皮肤层。在可逆性单侧输尿管梗阻术后84天，采集典型存活率和肾功能测量数据。功能研究比较了可逆性单侧输尿管梗阻联合肾切除术与单纯肾切除术在血尿素氮、经皮肾小球滤过率以及18小时限水后的尿渗透压方面的差异。在相同时间点，可逆性单侧输尿管梗阻组小鼠的尿渗透压值明显低于单纯肾切除对照组小鼠。