Orthotopen Aorten-Transplantation: Ein Rattenmodell die Entwicklung von chronischen Vaskulopathie Study

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, ein genaues Modell und eine leicht durchführbare Methode zur Untersuchung der Entwicklung einer Transplantatvaskulopathie zu etablieren. Dies wird durch die Verwendung der PVG-zu-CI-Stamm-Kombination erreicht. Der zweite Schritt des Verfahrens ist die Entnahme der Spenderaorta.

Der dritte Schritt des Verfahrens besteht darin, den Empfänger vorzubereiten. Der letzte Schritt des Verfahrens ist die Anastomosierung der Spenderaorta mit der Aorta des Empfängers. Letztendlich können Ergebnisse erzielt werden, die mittels pathohistologischer Untersuchung die Neointimabildung zeigen.

Hallo, ich bin Sonya Schwefel, Professorin für Transplantationsimmunologie im TS Eye Lab am UniversitätsHerzzentrum in Hamburg, Deutschland. Und ich bin Manish Duboff, ebenfalls vom TS Eye Lab.

Unser Labor beschäftigt sich mit der Transplantationsimmunologie. In diesem Video stellen wir Ihnen das orthotopische Aortentransplantationsmodell vor, ein einfaches und aussagekräftiges Modell zur Untersuchung der Entwicklung einer Transplantatvaskulopathie in Wes. Wir verwenden dieses Verfahren in unserem Labor, um die chronische Abstoßung bei kardiovaskulären Fragestellungen zu erforschen.

Im orthotopen aortalen Transplantatmodell kann die Aorta leicht histologisch beurteilt werden. Darüber hinaus eignet sich das PVG-zu-CI-Modell besonders für Studien zur Transplantatvaskulopathie, da die akute vaskuläre Abstoßung kein wesentlicher störender Faktor ist und die Entwicklung der Vaskulopathie den klinischen Befunden ähnelt.

Beginnen wir nun. Als Spender für die ORTHOTOPE aortale Transplantation wird eine PVG-Ratte mit einem Gewicht von etwa 250 bis 300 Gramm verwendet. Nachdem das Tier anästhesiert wurde, entfernen Sie das Bauch- und Brusthaar.

Legen Sie die Ratte auf den Rücken und setzen Sie eine Gesichtsmaske über Nase und Mund. Zur Aufrechterhaltung der Anästhesie desinfizieren Sie den Bauch- und Brustbereich großflächig mit Provo-Jod, gefolgt von 80 % Ethanol. Überprüfen Sie anschließend die Reflexe des Tieres, indem Sie in die Hinterpfoten kneifen.

Um zu bestätigen, dass die Anästhesie ausreichend ist. Exsanginieren Sie die Ratte, indem Sie den Bauch öffnen und ein Loch in die A. abdominalis aorta schneiden. Öffnen Sie vorsichtig den Thorax, um die absteigende Aorta thoracica zu finden.

Lösen Sie die Aorta thoracica von umgebenden Geweben wie Fett, Nerven und der Speiseröhre ab. Entnehmen Sie ein 1,5 cm langes Stück der Aorta mit der Schere, ohne das Gefäßgewebe zu beschädigen. Spülen Sie das Aortentransplantat gründlich mit kalter Kochsalzlösung durch und lagern Sie das Transplantat bei vier Grad Celsius.

Der Empfänger für diese orthotopische Aortentransplantation ist eine ACI-Ratte mit einem Gewicht von etwa 250 bis 300 Gramm. Um mit dem Verfahren zu beginnen, rasieren Sie den Bauchbereich der anästhesierten Ratte und tragen Augensalbe auf, um ein Austrocknen der Augen während der Anästhesie zu verhindern. Legen Sie die Ratte auf den Rücken und platzieren Sie eine Gesichtsmaske über Nase und Mund, um die Anästhesie aufrechtzuerhalten.

Als Nächstes desinfizieren Sie den Bauchbereich mit Prov-Jod, gefolgt von 80 % Ethanol. Nachdem Sie die Hinterpfoten zwicken, um sicherzustellen, dass die Ratte ausreichend anästhesiert ist, öffnen Sie den Bauchraum durch einen medianen Bauchschnitt und Trennen von Haut und Muskulatur. Zwei Schritte.

Wenn der Bauchraum geöffnet ist, legen Sie die Därme in den mit Salzlösung benetzten Handschuh. Falten Sie den Handschuh um die Därme, um Feuchtigkeitsverlust zu verhindern. Entfernen Sie das Fettgewebe, das die Bauchaorta bedeckt.

Lösen Sie die Aorta vom infrarenalen Bereich bis zur Bifurkation, wobei darauf geachtet werden muss, die Seitenäste der Gefäße nicht zu beschädigen. Gegebenenfalls können Äste der Aorta nach der Präparation ligiert werden. Zunächst wird ein mikrochirurgischer Klemmverschluss am infrarenalen Teil der Aorta angebracht, um den Blutfluss zu stoppen.

Bringen Sie als Nächstes eine zweite Klemme nahe der Aortenbifurkation an. Nachdem der Blutfluss gestoppt wurde, entfernen Sie ein kurzes Segment der Aorta. Nehmen Sie dann das Spender-Aortentransplantat, das in 0,9%iger Kochsalzlösung auf Eis aufbewahrt wurde.

Kürzen Sie ihn auf die geeignete Länge und positionieren Sie ihn in der Lücke der Aorta. Verbinden Sie die Spenderaorta mit der Empfängeraorta, indem Sie laufende acht-null-Prolen-Nähte anfertigen, beginnend mit der kranialen End-zu-End-Anastomose. Wenn die distale End-zu-End-Anastomose abgeschlossen ist, öffnen Sie vorsichtig die distale Klemme.

Öffnen Sie anschließend vorsichtig die Schädelklemme. Am distalen Ende der Aorta sollte ein sichtbarer Puls zu erkennen sein. Bringen Sie nun die Eingeweide zurück in die Bauchhöhle und spülen Sie die Bauchhöhle mit vorgewärmter steriler Kochsalzlösung aus.

Schließen Sie die Muskelschicht der Bauchwand mit fortlaufenden Seiden-Nähten der Stärke 6-0. Anschließend schließen Sie die Haut mit fortlaufenden Seiden-Nähten der Stärke 5-0, während sich die Ratte noch unter Narkose befindet. Injizieren Sie vier bis fünf Milligramm pro Kilogramm Carprofen subkutan.

Bringen Sie das Tier in seinen Käfig zurück. Fügen Sie drei Tage lang Methimazol ins Trinkwasser für die Schmerzmedikation hinzu. Nach der Transplantation.

Die histopathologischen Ergebnisse nach 120 Tagen werden an unserem Histologiemikroskop gezeigt. Die Bilder werden die Entwicklung einer Transplantatvaskulopathie deutlich zeigen. Die ausgeprägte Lumeneinengung wird durch eine Computeranimation hervorgehoben.

Wir haben Ihnen soeben gezeigt, wie man eine orthotrope aortale Transplantation bei Ratten durchführt. Außerdem haben wir die erfolgreiche Entwicklung einer Transplantatvaskulopathie nach 120 Tagen mittels histopathologischer Untersuchung demonstriert. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung der anfänglichen Wirkungen von Arzneimitteln auf die chronische Allograft-Vaskulopathie.