2. Juli 2011
Fopius arisanus ist ein Ei-Larven-Parasitoiden von Tephritid Fruchtfliegen, die erfolgreich in der biologischen Bekämpfung dieser wichtigen tropischen Schädlinge eingesetzt wird. Wir beschreiben hier ein optimiertes Protokoll für die Aufzucht von F. arisanus im kleinen Maßstab mit leicht verfügbaren Materialien.
FOIA Aus ist ein wichtiger biologischer Kontrollagent in Hawaii, da es Fruchfliegen befällt, die ernsthafte wirtschaftliche Schädlinge in den Tropen und besonders hier in Hawaii darstellen. Die Besonderheit von FOIA Aus liegt darin, dass es die Ei-Phase des Schadinsekts befällt und so das Insekt in einem frühen Stadium bekämpft. In den folgenden Clips können Sie Nahansichten davon sehen, wie wir FOIA Aus unter Laborbedingungen züchten.
Am Ende dieses Programms sehen Sie einige Diskussionen darüber, wie dieser bestimmte Parasitoid in einem erfolgreichen Freisetzungsprogramm in Französisch-Polynesien eingesetzt wurde. Wir beginnen unseren Protokollabschnitt mit adulten Parasiten, die bereit sind, in Eier einer Wirtsfruchtfliege einzunisten. Der erste Schritt besteht darin, die Eier der Fruchtfliege für die Präsentation gegenüber dem Parasiten vorzubereiten.
Anschließend werden Fruchtfliegenlarven zum Schlüpfen, Wachsen und Verpuppen gebracht. Sobald die Fruchtfliegen das Puppenstadium erreichen, werden sie nach Größe sortiert, um Parasiten anzureichern. Schließlich schlüpfen die Parasiten und werden bis zur Reifung weitergepflegt.
Dann paaren sie sich und sind erneut bereit, in eine neue Fruchtcharge zu legen. Fliegen-Eier. Damit ist der Zyklus abgeschlossen.
Bereiten Sie ein Substrat für die Frucht vor, indem Sie Kolben mit einer Kantenlänge von etwa 10 Zentimetern herstellen. Der Kolben wird in einer Konzentration von neun Gramm Kolbenpulver pro Liter Wasser hergestellt.
Unter Verwendung einer ebenen Oberfläche die Schalen bis zum Rand mit flüssigem Agar füllen und mindestens 45 Minuten lang erstarren lassen. Sobald die Agarblöcke fest sind, eine einzelne Lage Papiertuch über die Oberseite jedes Agarblocks legen. Das Papier sollte aufgrund der Oberfeuchtigkeit leicht am Agar haften.
Ein zweiter Rollvorgang. Tragen Sie die Fruchtfliegen-Eier auf die mit Gewebe bedeckte Oberfläche der Schneckenblöcke auf. Ein Volumen von 0,5 Milliliter Fruchtfliegen-Eier in Suspension ergibt etwa 6.000 Eier pro Block.
Eine 2,5 cm breite, in Wasser getränkte Pinselbürste wird verwendet, um die Fruchtfliegeneier gleichmäßig auf der Gewebeoberfläche zu verteilen. Die Fruchtfliegeneier werden nun unter dem unteren Sieb der Parasitenkäfige platziert, damit die Parasiten darauf ablegen können; durch Antippen der Unterseite des Siebs werden tote Parasiten entfernt, die die Frucht behindern könnten. Die Fruchtfliegeneier ermöglichen es den Parasiten, über Nacht darauf zu oviposieren.
Ungefähr 21 Stunden sind ausreichend, damit ein hoher Prozentsatz der Taufliegen-Eier parasitiert wird. Eine längere Exposition birgt das Risiko einer Superparasitierung. Die wichtigsten Bestandteile, die zur Aufzucht der Eier nach der Exposition gegenüber Parasiten benötigt werden, sind Taufliegen-Larvennahrung, Behälter für die Larvennahrung und Pupationsbehälter.
Platzieren Sie drei bis dreieinhalb vorbereitete Bohrblock-Präparate mit parasitierten Eiern auf eineinviertel Liter Fruchtfliegen-Larvalnahrung. Stellen Sie den Nahrungsbehälter mit den Eiern auf einen Erhöher und einen Pupationsbehälter über eine eineinhalb Zentimeter dicke Schicht aus feinem Vermiculit oder gewaschenem Sand.
Verkleben Sie die Kanten des Pupationsbehälters mit Malerklebeband. Stellen Sie sicher, dass zwischen der Oberseite des Nährbodenbehälters und dem Deckel des Pupationsbehälters ausreichend Platz vorhanden ist, damit die Larven herauskriechen und in die darunterliegende Vermiculitschicht fallen können. Stellen Sie die Pupationsbehälter für eine Woche in einen Raum mit 27 Grad Celsius und 80 % relativer Luftfeuchtigkeit.
Bedecken Sie die Behälter nach einer Woche vier Tage lang mit einem schweren Tuch. Öffnen Sie die Verpuppungsbehälter und entfernen Sie die Larvalnahrung. Wir verwenden Bre Dorsals als Wirtsfruchtfliege, um foia Airis aufzuziehen.
Andere Arten der Gattungen Asfa und Sitis sind ebenfalls potenzielle Wirte. Wenn sich ungehäutete Larven im Vermiculit befinden, lassen Sie diese über Nacht verpuppen. Die Puppen werden aus dem Vermiculit mithilfe eines groben Siebs und eines großen Behälters gewonnen.
Als Nächstes verwenden Sie ein Handsieb, um verbleibende Klumpen aus Vermiculit Eria, die Opia enthalten, zu entfernen. Ais können teilweise von nicht parasitierten Fruchtfliegen getrennt werden. Basierend auf früheren Untersuchungen sammeln wir daher nur die Aria mit einem Durchmesser zwischen 1,65 und 2,26 Millimetern, die kleiner sind und hauptsächlich unterentwickelte Parasitoide enthalten.
Größere Aria enthalten hauptsächlich Fliegen. Es können verschiedene Methoden zur Größensortierung der Puppen eingesetzt werden. Wir werden eine mechanische Methode beschreiben, die einen speziell angefertigten Sortierer für die gesammelten parasitierten Aria verwendet.
Der Anteil weiblicher Tiere steigt mit der Größe. Platzieren Sie den Puy in den Trichter an der Oberseite des mechanischen Größenseparators. Ein Vibrationstrichter befördert sie nach oben zu einem Paar leicht auseinanderlaufender Rollstangen in einem Winkel von 30 Grad. Die Tiere fallen einzeln in eine Anordnung von Schlitzen, die über Trichter in 10 getrennte Behälter münden.
Stellen Sie Puppen im Größenbereich von 1,65 Millimetern bis 2,26 Millimetern sieben weitere Tage lang in einen Schlupfkäfig, bis die meisten Fliegen aus den parasitierten Puppen geschlüpft sind. Verwenden Sie anschließend einen Ventilator, um leere Fliegenpuppen von solchen zu trennen, die noch lebende Parasitoide enthalten. Um die Kolonie von Opia Aus aufrechtzuerhalten, verwenden Sie einen Parasiten-Aufbewahrungskäfig mit auswechselbarer Glasscheibe vorne, mit einer Kantenlänge von etwa 25 Zentimetern.
Der Käfig verfügt über eine ein Quadratmillimeter große Masche an der Oberseite und an zwei Seiten. Die Rückseite des Käfigs ist mit einer Gummifolie abgedeckt, die eine neun Zentimeter durchmessende Öffnung für den Zugang aufweist. Der Boden des Käfigs hat eine Aussparung, die innen mit einem ein bis zwei Quadratmillimeter großen Maschendraht abgedeckt ist.
Groß genug, um die Platzierung von zwei Bohrblock-Einheiten mit Früchten und Fliegen-Eiern für den Parasitoiden an der entsprechenden Position zu ermöglichen. Die Aufzuchtkäfige sollten außerdem im unteren Viertel der Glasfront einen getönten Bereich aufweisen, um eine Ansammlung der Parasitoide an der Vorderseite des Käfigs zu minimieren. Geben Sie etwa 11 Gramm der ausgewählten Aria in Plastikbehälter, die etwa neun Zentimeter im Durchmesser messen.
Dies sollte etwa 600 bis 700 Parasiten pro Käfig ergeben. Die Größenselektion sollte etwa 60 % Weibchen ergeben. Befestigen Sie Siebe mit Abdeckungen an den Behältern. Die Abdeckungen sollten mit einem zwei Quadratmillimeter großen Sieb bedeckt sein, das es den Imagines ermöglicht, die Behälter beim Schlüpfen zu verlassen, aber alle verbleibenden Fruchtfliegen zurückhält.
Halten Sie die Parasiten bei 24 Grad Celsius und einer relativen Luftfeuchtigkeit von etwa 45 % bei einem 12:12-Licht-Dunkel-Rhythmus und guter Belüftung. Tragen Sie mindestens dreimal pro Woche gesponnenen Honig in dünnen Streifen entlang der Oberseite der Käfige auf oder immer dann, wenn der verfügbare Honig trocken ist. Tragen Sie den gesponnenen Honig mit der Fingerspitze in schmalen Streifen auf. Beachten Sie, dass der Honig in den Käfig tropfen wird, wenn die Streifen zu dick sind, und dass der Honig schnell austrocknet und häufig erneuert werden muss, wenn die Streifen zu dünn sind. Stellen Sie Schneckenblöcke, die 10 Zentimeter breit und vier Zentimeter tief sind, auf die Oberseite der Käfige, um den Parasiten Feuchtigkeit bereitzustellen.
Diese Blöcke sollten zweimal pro Woche gewechselt werden. Im Jahr 2001 erhielten wir eine kleine Startfinanzierung, um zu prüfen, ob wir biologische Kontrollmaßnahmen in Französisch-Polynesien einführen könnten, um die Situation zu verbessern, da die Orientalische Fruchtfliege zu jener Zeit gerade eine unglaubliche Befallung aller tropischen Früchte verursachte. Das Labor hier in Hawaii hat zehn Sendungen verschickt.
Jede dieser Sendungen umfasste gewöhnlich etwa hunderttausend Exemplare von Opia air Sayings, tatsächlich waren es sogar deutlich mehr, aber wir verschickten die PPE der Orientalischen Fruchtfliege mit dem Parasitoiden im Inneren, und anschließend ließen wir sie schlüpfen. Daher richteten wir ein kleines Labor auf Tahiti ein, um die Sendungen entgegenzunehmen und dann die FOIA Air Sanus schlüpfen zu lassen. Über einen Zeitraum von etwa einem Jahr setzten wir nahezu eine Million FOIA Aans frei.
Insgesamt ist dies außerhalb von Hawaii der erfolgreichste Fall. Als FOIA Aus ursprünglich in Hawaii eingeführt wurde, stellte es das beste Beispiel für die biologische Bekämpfung von Fruchtfliegen im gesamten pazifischen Raum dar. In den letzten 10 Jahren hat sich der Bactrocera Dorsals-Komplex weltweit enorm ausgebreitet.
So hat sich Bactrocera Carbo in Südamerika, in Surinam, ausgebreitet und ist nun im Norden Brasiliens anzutreffen. Dann gibt es eine weitere Art namens Bacter Inance, die sich über ganz Afrika verbreitet hat und alle möglichen Schäden verursacht. Außerdem hat sich auch Bacter Papaya ausgebreitet.
Dieser Erfolg eröffnet nun die Möglichkeit, diese FOIA Aus in Südamerika, Afrika und in anderen Teilen Asiens freizugeben.
Fopius arisanus ist eine Schlupfwespe, die die Ei-Larven-Entwicklungsstadien von Tephritiden-Obstfliegen befällt, welche bedeutende landwirtschaftliche Schädlinge in tropischen Regionen darstellen. Dieser Artikel beschreibt ein optimiertes Protokoll zur kleinskaligen Zucht von F. arisanus unter Verwendung leicht zugänglicher Materialien.
Die Einrichtung zuverlässiger Laborkolonien von parasitischen Schlupfwespen wie Fopius arisanus ist entscheidend, um biologische Bekämpfungsprogramme gegen wirtschaftlich schädliche Fruchtfliegen der Familie Tephritidae voranzutreiben. Optimierte Aufzuchtprotokolle erhöhen die Vorhersagesicherheit bei der Zielvalidierung, indem sie eine gleichmäßige Produktion biologischer Wirkstoffe ermöglichen, um mechanistische Risiken in Schädlingsbekämpfungsstrategien auszuschließen. Dies gewährleistet eine translationale Kontinuität von der Entdeckung bis zur präklinischen Bewertung in den Entwicklungsabläufen der Agrarbiotechnologie.
Die Aufzucht-Methode ist in den Entdeckungsprozess integriert, indem sie die Hypothesenprüfung in der frühen Entdeckungsphase unterstützt, die Assay-Entwicklung durch standardisierte Parasitoide-Produktion ermöglicht und die translationale Forschung durch die Validierung des Wirtsspektrums voranbringt.