Klinische Tests und Rückenmark Removal in einem Mausmodell für Amyotrophe Lateralsklerose (ALS)

Hallo, mein Name ist Lar Turner. Ich bin Postdoktorand an der Abteilung für Neurologie der Universität Ingham, Deutschland. Hallo, mein Name ist Lin Gunda.

Ich bin Medizinstudent und führe meine Abschlussarbeit in diesem Labor durch. Heute werden wir Ihnen die klinische Untersuchung des SODG 93, eines Mausmodells der amyotrophen Lateralsklerose, zeigen. Außerdem demonstrieren wir einen Test der motorischen Funktion mit einem sogenannten Rotarod-Test und zusätzlich einen weiteren Test der motorischen Funktion mit dem Hängegriff an einem Draht, um eine immunologische Analyse durchzuführen.

Nach der funktionellen Untersuchung der a s Mäuse besteht ein notwendiges Verfahren in der Entfernung des Rückenmarks, des STIC-Nervs und des Gastrocnemius-Muskels. Wir möchten dieses chirurgische Vorgehen detailliert darstellen und am Ende einige beispielhafte immunologische Befunde präsentieren. Gut, aber beginnen wir zunächst mit der klinischen Untersuchung.

Dies ist ein frei beweglicher Wildtyp-MOE, der in unserem klinischen Klassifizierungssystem keine klinischen Symptome wie Muskelzittern oder Parsis zeigt. Das entspräche der Wertung vier. Dies ist ein transgener A LS-moe.

In einem frühen Krankheitsstadium zeigt es ein starkes Zittern des rechten Hintergliedmaßes, das es als SCORE drei E klassifiziert. Die schweren Gangstörungen klassifizieren dieses Tier als Score zwei. Das Schleifen mindestens eines Hintergliedmaßes wird im Hängedrahttest als klinischer Score eins eingestuft, wobei die grobe Muskelkraft der Rumpfmuskulatur bewertet wird. Jede Maus wird auf einen speziell angefertigten Draht gesetzt und vorsichtig verkehrt herum über der mit Stroh bedeckten Unterlage gedreht.

Nachdem dreimal hintereinander mindestens 180 Sekunden trainiert wurde, wird die Latenz bis zum Herunterfallen gemessen. Jeder Maus wird maximal dreimal der Versuch ermöglicht, sich bis zu 180 Sekunden an dem umgedrehten Deckel festzuhalten, und die längste Dauer wird aufgezeichnet im Vergleich zur weißen Drahtmaus auf der rechten Seite. Die Plaque-transgene Maus auf der linken Seite ist sehr schwach und fällt vom Deckel ab, bevor sie das Maximum erreicht.

Die Rotorstange wird verwendet, um die motorische Koordination, das Gleichgewicht und die motorische Lernfähigkeit zu messen. Eine gute Leistung erfordert ein hohes Maß an sensorisch-motorischer Koordination. Sie besteht aus einer computer­gesteuerten, motorbetriebenen rotierenden Spindel und fünf Bahnen für fünf m.

Fehler der Mäuse werden automatisch durch Druck auf die untere Kunststoffplatte erfasst. Nachdem das Tier dreimal hintereinander für jeweils mindestens 180 Sekunden bei einer konstanten Geschwindigkeit von 15 Umdrehungen pro Minute trainiert wurde, wird die Zeit gemessen, die das Tier auf dem sich drehenden Rotarod verbleiben kann. Jedes Tier durchläuft drei Versuche, und die längste Latenzzeit ohne Herunterfallen wird dokumentiert.

Die gesunde Wildtyp-Maus auf der linken Seite läuft problemlos auf der Rotorstange. Im Gegensatz dazu hat die transgene a s Maus auf der rechten Seite erhebliche Schwierigkeiten, überhaupt auf der Rotorstange zu verbleiben, und rutscht nach einer Weile ab, wie von hinten beobachtet. Sie sehen die schweren Laufschwierigkeiten der linken Retre-Maus.

Im Vergleich mit der gesunden Wire-Tap-Maus ist sie nicht in der Lage, mit der Rotorgeschwindigkeit Schritt zu halten und sich mit den HIN-Gliedmaßen nach oben zu drücken. Um eine immunchemische Analyse des Rückenmarks durchzuführen, müssen die Tiere getötet werden. Es ist sehr wichtig, stets strikt den lokalen Richtlinien für die ordnungsgemäße Durchführung von Tierversuchen zu folgen.

In diesem Zusammenhang zeigt diese stark vereinfachte Übersicht über die Wirbelsäule und das umgebende Gewebe die wichtigsten anatomischen Strukturen. Wir werden das Tier auf seine Bauchseite legen und mit der Präparation der Muskulatur aus dem dorsalen Bereich beginnen. Nachdem das Muskelgewebe entfernt wurde, gelangen wir zur Wirbelsäule, die das Rückenmark umschließt.

Nachdem das Tier getötet und mit einer Lösung, die Paraform enthält, perfundiert wurde, kann das Rückenmark entfernt werden. Das Tier wird auf einen Operationstisch platziert, und alle Gliedmaßen werden an den Seiten fixiert, um die Rückseite der Maus freizulegen. Das Tier wird angefeuchtet, um den Haarflaum zu glätten und den anschließenden Hautschnitt zu erleichtern.

Hierfür wird ein scharfes Skalpell verwendet. Achten Sie darauf, die Haut nach beiden Seiten zu dehnen. Um das Schneiden zu erleichtern, sollte der Beinmuskel präpariert werden.

Ihre Haut muss ebenfalls eingeschnitten werden. Nachdem der Hautschnitt vollständig ist, wird sie vorsichtig zur Seite gezogen. Mit einer Pinzette, nachdem die Beinmuskulatur und der Ischiasnerv entfernt wurden, nähern wir uns weiter dem Rückenmark und legen das Tier auf einen neuen Operationsplatz.

Nun lassen sich Schädelhals, Muskulatur und Wirbelsäule leicht identifizieren. Nachdem alle diese Strukturen erkannt wurden, ist es einfach, mit dem nächsten Schritt fortzufahren. Die Muskeln des Halses und das nu-Ligament müssen entfernt werden.

Achten Sie darauf, nicht zu tief einzuschneiden und die Wirbelsäule zu verletzen. Im nächsten Schritt werden die paravertebralen Muskeln vollständig entfernt, um die Wirbelsäule freizulegen. Um auf die Wirbelsäule zuzugreifen, müssen mehrere Exzisionen durchgeführt werden.

Wir beginnen am Halsbereich der Wirbelsäule, einschließlich des atlanto-occipitalen Gelenks. Um die Laminektomie durchzuführen, müssen wir den Wirbelbogen durchtrennen, um alle Wirbelanhänge vom Wirbelkörper entfernen zu können. Wie zuvor erläutert, beginnt die Laminektomie mit dem Durchtrennen der Wirbelbögen.

Dann kann die Laina abgezogen werden. Achten Sie erneut darauf, das Rückenmark nicht zu verletzen, da noch viele weitere Ral entfernt werden müssen. Es ist sehr hilfreich, gekröpfte Scheren zu verwenden und jeweils mehrere Wirbelbögen beider Seiten gleichzeitig zu incisieren.

Ziehen Sie dann an den Dornfortsätzen, um die Wirbelbögen und die Vergrößerung vollständig zu entfernen. Beachten Sie, dass das Skalpell vorsichtig möglichst seitlich an der Seite des Spinalkanals eingeführt werden muss. Verbleibende seitliche Teile der Wirbelsäule müssen entfernt werden, um die spätere vollständige Entnahme des Rückenmarks zu erleichtern.

Ein anatomisches Leitmerkmal des Rückenmarks sind die sogenannten zervikalen und lumbalen Verdickungen. Nachdem Sie die Enukleation des gesamten Rückenmarks abgeschlossen haben, vergewissern Sie sich, dass Sie auch alle ventralen Wurzeln des Rückenmarks durchtrennt und es von der Dura mater der Meningen gelöst haben. Anschließend wird das zervikale Rückenmark durchtrennt.

Kranial wird die Entnahme erneut begonnen. Das Rückenmark sehr vorsichtig berühren, um dieses Gewebe nicht zu schädigen, da dies erhebliche Einschränkungen für spätere immunchemische Analysen verursachen könnte. Die Entnahme des Rückenmarks wird im Bereich der Brustwirbelsäule fortgesetzt und anschließend im lumbalen Abschnitt fortgeführt.

Jetzt wird erneut geschnitten, diesmal an der Seite des Cauda-equina-Strangs. Nun können wir ihn vollständig freilegen. Hier sehen Sie das Rückenmark direkt neben seiner ursprünglichen Position in der RAL-Säule.

Schließlich wird es in eine Paraformaldehyd-Fixierungslösung eingebracht. Als klassisches Beispiel für die immunhistochemische Analyse des Rückenmarks können Sie einen Antikörper gegen Cholinacetyltransferase verwenden, um Motoneurone im Vorderhorn des Rückenmarks nachzuweisen. Hier sehen Sie eine große Anzahl von Motoneuronen in einem gesunden Wildtyp-Tier.

Im Gegensatz dazu weist das transgene a LS-Tier im Endstadium eine deutlich geringere Anzahl von Motoneuronen im Vorderhorn auf. Nach dem Anschauen dieses Videoartikels sollten Sie die grundlegende klinische Untersuchung des SODG 93. A Mausmodells der amyotrophen Lateralsklerose kennengelernt haben.

Es wurden zwei motorische VerhaltensTests vorgestellt: der Rotor-Rod-Test und der Hängedraht-Test. Sie bieten eine gute Möglichkeit, die grundlegenden motorischen Funktionen zu bewerten. Beide Tests sind einfach durchzuführen, empfindlich bei der Erkennung motorischer Defizite und zeiteffizient.

Der Hauptteil dieses Videos besteht in einer Demonstration der Präparationstechnik des Rückenmarks. Diese kann natürlich auf jedes andere Maus-Krankheitsmodell angewendet werden und ist ein wesentlicher Schritt für die spätere immunchemische Analyse der Krankheitspathologie im Rückenmark. Vielen Dank fürs Zuschauen.

Wir hoffen, dass dieser Videoartikel für Ihre zukünftigen Experimente hilfreich sein wird.