Vorbereitung und Pathogeninaktivierung von Double Dose Buffy Coat Platelet Produkte, die INTERCEPT Blood System

In diesem Video wird ein Thrombozytenkonzentrat mit doppelter Dosis aus einem Pool von sieben Buffy-Coats hergestellt und anschließend mit Intercept behandelt. Nach dem Ansehen dieses Videos sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie ein pathogen-inaktiviertes Thrombozytenkonzentrat mit doppelter Dosis hergestellt wird. Zunächst zeigen wir eine schematische Übersicht, gefolgt von einer Demonstration.

Die ersten sieben Einheiten gespendeten Vollbluts werden zentrifugiert und aufgetrennt, um sieben Buffy-Coat-Einheiten zu gewinnen, die die vorgegebenen Werte für Volumen und Hämatokrit erreichen. Die Buffy Coats werden verbunden, gepoolt und erneut zentrifugiert. Anschließend wird die Thrombozytensuspension von den restlichen roten Blutkörperchen getrennt, um ein Doppel-Dosis-Thrombozytenkonzentrat herzustellen, mit dem Pathogene und Leukozyten inaktiviert werden.

Der Doppel-Dosis-Thrombozytenkonzentrat wird mit dem Intercept-System behandelt, das Nukleinsäuren vernetzt. Letztendlich ergibt dieses Verfahren zwei therapeutische Thrombozytendosen mit akzeptabler In-vitro-Qualität über sieben Tage Lagerung, wie durch die Bestimmung von pH, Glukose, Laktat, PO₂ und PCO₂ sowie Shallot Doru festgestellt wurde. Ein Techniker meines Blutspendezentrums wird das Verfahren sowie die beschriebenen Aufbereitungsanforderungen demonstrieren.

Zunächst sicherstellen, dass das Doppelkonzentrat an Thrombozyten die Anforderungen für die Inaktivierungsbehandlung erfüllt: ein Volumen von 300 bis 420 Milliliter, eine Thrombozytenkonzentration von 2,5 bis 7 × 10¹¹ pro Dosis und weniger als 4 × 10⁶ pro Milliliter rote Blutkörperchen. Beginnen Sie dieses Verfahren mit sieben Einheiten Vollblut, die in 450-Milliliter-Top-Bottom-Sammelsystemen gesammelt wurden.

Stellen Sie die Bluteinheiten in Zentrifugenröhrchen und führen Sie eine harte Zentrifugation bei 4.880 RCF für 11 Minuten bei Raumtemperatur mit Bremseinstellung B fünf gemäß den Herstelleranweisungen durch. Nach der Zentrifugation trennt sich das Blut in drei Schichten: rote Blutkörperchen, Buffy Coat und Plasma. Leiten Sie das Plasma in den oberen Satellitenbeutel und die roten Blutkörperchen in den unteren Satellitenbeutel ab, wobei der Buffy Coat mit einem Volumen von etwa 48 Millilitern und einem Hämatokrit von 37 % im Sammelbehälter verbleibt.

Stellen Sie die Buffycoats über Nacht auf einen Thrombozytenaggregator bei Raumtemperatur. Steril verbinden Sie sieben Buffycoats und 300 Milliliter SSP-Plus-Thrombozyten-Additivlösung in einer Zuganordnung mit der Additivlösung an der Spitze. Klemmen Sie die Leitung zwischen der Additivlösung und dem ersten Buffycoat wie hier gezeigt ab. Öffnen Sie die Schweißnähte zwischen den Buffycoat-Einheiten und lassen Sie sie in den letzten Buffycoat-Behälter ablaufen.

Öffnen Sie als Nächstes die Klemme und die Verbindung zwischen der Additivlösung und dem ersten Buffy-Coat und lassen Sie etwa ein Drittel der Additivlösung, ungefähr 100 Milliliter, nacheinander durch jeden der Buffy-Coat-Behälter spülen, bevor Sie die Klemme schließen. Wiederholen Sie diesen Waschvorgang noch zweimal, wobei jedes Mal ungefähr 100 Milliliter der Additivlösung verwendet werden. Trennen Sie den Behälter mit dem gepoolten Buffy Coat von den leeren Behältern. Das Volumen des Buffy-Coat-Pools einschließlich der Additivlösung sollte ungefähr 600 Milliliter betragen.

Stellen Sie die gepoolten Buffycoats eine Stunde lang bei Raumtemperatur auf einen Schüttler. Anschließend verbinden Sie einen Thrombozyten-Speicherbehälter mit integriertem Leko-Reduktionsfilter mit dem Beutel, der den Buffycoat-Pool enthält. Geben Sie die gepoolten Buffycoats und den Thrombozyten-Speicherbehälter in eine Zentrifuge und zentrifugieren Sie sie 9 Minuten und 20 Sekunden bei 462 RCF.

Nach der Zentrifugation wird die Thrombozytensuspension durch den Luca-Reduktionsfilter in den Thrombozyten-Speicherbehälter abfiltriert. Das Ergebnis ist ein Doppel-Dosis-Thrombozytenkonzentrat mit etwa sieben mal 10 hoch 11 Thrombozyten in 420 Milliliter, das einer Pathogeninaktivierung mit Intercept zur Pathogeninaktivierung unterzogen werden kann. Das Doppel-Dosis-Thrombozytenkonzentrat wird mithilfe eines Intercept-Verarbeitungssets behandelt, das aus einem Antoin-Behälter, einem Bestrahlungsbehälter und zwei Speicherbehältern besteht.

Verbinden Sie den Behälter mit der Thrombozytensuspension mit dem Amin-Behälter am Intercept-Verarbeitungsset. Hängen Sie anschließend die Thrombozyten auf. Brechen Sie die untere Kanüle am Amin-Behälter ab, um den Fluss der Lösung in den Beleuchtungsbehälter zu ermöglichen.

Dann brechen Sie die obere Kanüle am Amin-Behälter, um den Thrombozyten den Durchfluss durch den Amin-Behälter in den Beleuchtungsbehälter zu ermöglichen. Mischen Sie vorsichtig die Mischung aus Thrombozyten und Amotosin. Drücken Sie leicht auf den Beleuchtungsbehälter, um die Luft aus dem Beleuchtungsbehälter herauszupressen.

Versiegeln Sie den Schlauch zwischen der Beleuchtungseinheit und der Amato- und der Behältereinheit, sodass nicht mehr als vier Zentimeter Schlauch aus der Beleuchtungseinheit herausragen. Entfernen und entsorgen Sie die leeren Behälter. Stellen Sie das Verarbeitungsset in den Beleuchter, wobei sich die Beleuchtungseinheit im großen Fach auf der linken Seite und der Organisator im kleineren Fach auf der rechten Seite befindet.

Scannen Sie die Spenden-ID. Produktcode und Verarbeitung. Geben Sie die Chargennummer in den Beleuchter ein.

Schließen Sie die Metallabdeckung und die Schublade. Drücken Sie auf Start, um die Beleuchtung zu beginnen. Der Beleuchter liefert eine kontrollierte Dosis an UVA-Licht an die Plättchenaminmischung im Beleuchtungsbehälter.

Amin dockt zwischen den Nukleinsäure-Basenpaaren von Krankheitserregern ein, die in der Thrombozyten-Einheit vorhanden sein können. Bei Beleuchtung entstehen dauerhafte Vernetzungen, die die DNA oder RNA miteinander verbinden, sodass die Erreger sich nicht mehr vermehren und beim Empfänger des Blutpräparats eine Erkrankung verursachen können. Nach der Beleuchtung entfernen Sie das Verarbeitungsset.

Als Nächstes entfernen Sie die Behälter vom Organizer, hängen die Thrombozyten und das Verarbeitungsset auf. Brechen Sie die Kanüle am Auslass des Beleuchtungsbehälters ab und lassen Sie die Thrombozyten in den CAD-Behälter fließen. Im Inneren des CAD-Behälters befindet sich ein Wafer mit immobilisierten makroporösen Polystyrolkügelchen, die die Restmengen von Amin im Blutprodukt reduzieren.

Darauf achten, dass die CAD-Wafer nicht verbogen wird. Die Luft aus dem CAD-Behälter in den Beleuchtungsbehälter auspressen. Den Schlauch nahe dem Einlassstutzen des CAD-Behälters verschließen.

Entfernen und entsorgen Sie den leeren Beleuchtungsbehälter. Stellen Sie den CAD-Behälter mit den angebrachten Speicherbehältern sechs bis 16 Stunden lang auf einen Thrombozyten-Agitator. Dadurch wird die Konzentration des restlichen Amlin auf weniger als oder gleich zwei Mikromolar reduziert.

Nach der CAD-Behandlung die Thrombozytenkonzentrate vom Schüttler nehmen, die Thrombozyten aufhängen, die Kanüle am Auslass des CAD-Behälters abbrechen und die Thrombozyten in die beiden Lagerungsbehälter abfließen lassen. Anschließend die Luft aus den Lagerungsbehältern herausdrücken. Das Schlauchsystem oberhalb des Y-Stücks verschließen und den CAD-Behälter entfernen.

Das Ergebnis sind zwei pathogeninaktivierte Thrombozytenkonzentrate zur Beurteilung der in-vitro-Thrombozytenfunktion. Die Thrombozytenkonzentratdosis pH PO zwei PC O2-Laktatproduktion und Glukoseverbrauch des Achsenabschnitts. Die Thrombozytenkonzentrate wurden bis zum siebten Tag der Lagerung untersucht.

Diese Abbildung zeigt die mittlere anfängliche Thrombozyten-Dosis des Doppelkonzentrats vor der Intercept-Behandlung sowie die mittlere Thrombozyten-Dosis in jedem der behandelten Teilprodukte bis zum siebten Tag der Lagerung. Wie hier zu sehen ist, betrug der Thrombozytenverlust während der Lagerung etwa 9 %. Diese Verringerung unterscheidet sich nicht signifikant vom erwarteten Verlust von Thrombozyten bei der Lagerung konventioneller Thrombozytenkonzentrate. Gemäß den europäischen Anforderungen muss der pH-Wert der Thrombozyten bis zum Ende der Haltbarkeitsdauer über 6,4 liegen.

Während der Verarbeitung sinkt der pH-Wert von Thrombozytenkonzentraten geringfügig, abhängig von der Thrombozytenkonzentration, dem Volumen und der Gaspermeabilität des Lagerbehälters für Thrombozyten. Diese Abbildung zeigt den pH-Wert der aufgeteilten Thrombozytenprodukte über sieben Tage Lagerung; dabei bleibt der pH-Wert stabil und wird innerhalb der Anforderungen der Verarbeitung gut aufrechterhalten. Der aerobe Stoffwechsel sollte in den gelagerten Thrombozyten weiterhin stattfinden und ist ein Indikator für die Fähigkeit der Thrombozyten, nach der Transfusion in einen Patienten im Körper zu funktionieren.

Der Sauerstoffverbrauch und die CO2-Produktion der Thrombozyten weisen auf eine anhaltende Atmung der Thrombozyten im PL 24 10-Behälter während der sieben Tage Lagerung hin. Ebenso sollte der anaerobe Stoffwechsel in gelagerten Thrombozyten fortgesetzt werden. Daher sind auch der Glukoseverbrauch und die Laktatproduktion Indikatoren für die Fähigkeit der Thrombozyten, nach einer Transfusion zu funktionieren.

Diese beiden Abbildungen zeigen die Lactat- und Glucosespiegel über sieben Tage Lagerung. Der Glucoseverbrauch durch Thrombozyten und die Lactatproduktion stimmen gut überein. Während der sieben Tage Lagerung wiesen fünf Einheiten Glucosespiegel unter 1,11 Millimol pro Liter auf, was der unteren Grenze für den Glucose-Assay entspricht.

Die Buffy-Code-Präparation und die Validierung der Poolbildung ergaben Thrombozytenkonzentrate, die die Eingabekriterien für die Intercept-Behandlung erfüllen, insbesondere Volumen, Thrombozytenzahl, Plasmaanteil und Erythrozytenkontamination. Die endgültigen Einheiten erfüllen die Validierungskriterien über sieben Tage Lagerung, einschließlich Thrombozytendosis und pH-Wert. Der Hauptvorteil dieser Technik gegenüber der herkömmlichen Buffy-Code-Präparationsmethode, die ein Einzeldosis-Thrombozytenkonzentrat erzeugt, liegt darin, dass sie die Komponentenausbeute aus Blutspenden maximiert, die Betriebskosten durch Anwendung einer Doppeldosistechnik senkt und die Patientensicherheit verbessert, indem transfusionsübertragene Krankheitserreger inaktiviert werden.