Evaluierung eines Point-of-Care-Testanalysators zur Messung peripherer Blutleukzyten
22. März 2022
Ein Protokoll zur Messung peripherer Blutleukozyten mit einem POCT-kartenbasierten Leukozytenanalysator wird hier vorgestellt. Dieselben Blutproben wurden von zwei automatisierten Hämatologie-Analysatoren getestet, um die Konsistenz und Genauigkeit der Ergebnisse zu bewerten. Die Ergebnisse zeigten, dass der ausgewertete Analysator eine gute Korrelation mit dem Referenzsystem hatte.
Eine detaillierte Beschreibung der standardisierten Funktionsweise des Analysators im Protokoll kann einer Person, die den Analysator noch nie bedient hat, helfen, die Experimente meist wichtig, genau und mit zuverlässigen Ergebnissen durchzuführen. Die Verwendung der innovativen Technologie von Jove bietet Vorteile wie die Verfügbarkeit eines Einzelpersonen-Detektionskits, die Abwesenheit von flüssigen Abfällen, die Schnelligkeit, die Routinewartung und die benutzerfreundliche Bedienung. Man sollte zuerst das Erkennungsprinzip des Analysators verstehen und dann mit mehreren kritischen Schritten im Protokoll vertraut sein, wie Blutentnahme, Reagenzienlifting und so weiter.
Um den Analysator zu starten, schalten Sie den Aus- oder Einschaltschalter auf der Rückseite des Analysators ein und stellen Sie sicher, dass die Kontrollleuchte des Analysators leuchtet. Geben Sie Benutzername und Passwort in das Anmeldedialogfeld ein und klicken Sie auf Anmelden. Das System sollte eine Selbstprüfung durchführen und die Initialisierung automatisch starten und die Beispielanalyseseite anzeigen.
Starten Sie die Testvorbereitung, indem Sie auf Nächste Probe klicken, geben Sie dann das Geschlecht, den Namen und andere klinische Informationen korrekt ein und wählen Sie die entsprechende Referenzgruppe aus. Klicken Sie später auf OK, um die Informationen zu speichern. Reißen Sie den dünnen Film des Blutzellerkennungsmoduls, drücken Sie die Taste zum Verlassen des Lagers und platzieren Sie das Blutzellerkennungsmodul korrekt im Maschinenlager mit seiner nach außen gerichteten Öffnung.
Durchstechen Sie die Deckenfolie des hämolytischen Reagenzes mit der Spitze einer quantitativen Pipette. Für die Kapillarblutentnahme desinfizieren Sie den linken Ringfinger einmal mit einem in Alkohol getauchten Wattestäbchen in eine Richtung. Nachdem der Alkohol auf natürliche Weise ausgetrocknet ist, verwenden Sie eine Blutlanzette, um die Haut des linken Ringfingers zu punktieren.
Drücken Sie den ersten Tropfen Blut vorsichtig aus und wischen Sie ihn mit einem Wattestäbchen ab. Drücken Sie genug Blut aus, um einen vollen Wassertropfen zu bilden, und sammeln Sie fünf Mikroliter der Blutprobe mit dem Kapillarröhrchen in der quantitativen Pipette. Zum Reagenzienmischen die quantitative Pipette in das hämolytische Reagenz einführen und fest drücken, um die Blutprobe aus dem Kapillarröhrchen freizusetzen.
Mischen Sie das Blut in der Kapillarröhre und dem hämolytischen Reagenz, indem Sie es 15 bis 20 Mal mit konstanter Geschwindigkeit auf den Kopf stellen, bis kein rotes Blut mehr in der Kapillarröhre verbleibt. Beginnen Sie mit der Probenanalyse, indem Sie den Deckel öffnen und die Lösung in das Blutzellerkennungsmodul drücken. Drücken Sie als Nächstes die Schaltfläche Entry Exit Warehouse.
Nachdem das Blutzellerkennungsmodul das Lager betreten hat, drücken Sie den Zählknopf. Klicken Sie auf der Benutzeroberfläche des Analysators zweimal auf die Schaltfläche "Okay", um zu bestätigen, dass das Blutzellerkennungsmodul entfernt wurde. Klicken Sie auf der Benutzeroberfläche des Analysators auf die Schaltfläche Drucken, um die Testergebnisse auszudrucken.
Um den Analysator auszuschalten, klicken Sie auf die Schaltfläche zum Herunterfahren auf der Benutzeroberfläche des Analysators und wählen Sie Ja im Dialogfeld, das auf der Benutzeroberfläche angezeigt wird. Überprüfen Sie, ob das System mit der Ausführung der Abschaltsequenz beginnt. Stellen Sie den Aus- oder Einschaltschalter auf der Rückseite des Mainframes auf Aus, nachdem die Abschaltsequenz abgeschlossen ist.
Die Abbildung zeigt das Streudiagramm und die Spearman-Korrelationsanalyse der ausgewerteten und Referenzsysteme. Die Anzahl der weißen Blutkörperchen und die Anzahl der Granulozyten weisen die stärkste Korrelation auf. Während die Lymphozytenzahl die schwächste Korrelation zwischen dem ausgewerteten und dem Referenzsystem aufweist.
Ein Bland-Altman-Plot wurde erhalten, um die Konsistenzanalyse zu visualisieren. Die vom ausgewerteten System nachgewiesenen Ergebnisse der weißen Blutkörperchen stimmen mit dem Referenzsystem überein. Die Durchschnittswerte der Unterschiede in den Leukozytenindizes liegen über Null, was darauf hindeutet, dass die Testergebnisse des ausgewerteten Systems etwas höher sind als die des Referenzsystems.
Während des Experiments sollten wir unser Bestes geben, um sicherzustellen, dass der von uns gesammelte Blutbefehl genau 5 Mikroliter beträgt und die Raumseite durch das hämolytische Reagenz vollständig aufgelöst wird.
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Übersicht
In diesem Artikel wird ein Protokoll zur Messung von Leukozyten im peripheren Blut mithilfe eines POCT-Karten-basierten Leukozyten-Analysators vorgestellt. Die Genauigkeit und Konsistenz dieses Analysators wurde gegenüber zwei automatisierten Hämatologie-Analysatoren bewertet.
Wesentliche Studienkomponenten
Bereich der Wissenschaft
- Hämatologie
- Klinische Diagnostik
- Bettseitige Testung
Hintergrund
- Die Leukozytenanalyse ist entscheidend für die Diagnose verschiedener medizinischer Zustände.
- Automatisierte Analysatoren liefern schnelle und genaue Ergebnisse.
- POCT-Geräte verbessern den Zugang und erhöhen den Testkomfort.
- Das Verständnis der Funktionsweise dieser Geräte ist entscheidend für zuverlässige Ergebnisse.
Zweck der Studie
- Die Leistung eines neuen Leukozyten-Analysators bewerten.
- Ergebnisse mit etablierten automatisierten Hämatologie-Analysatoren vergleichen.
- Eine detaillierte Anleitung zur effektiven Nutzung des Analysators bereitstellen.
Verwendete Methoden
- Standardisierter Betrieb des Leukozyten-Analysators.
- Blutprobenentnahme und -vorbereitung.
- Probentestung sowohl am neuen als auch an Referenz-Analysatoren.
- Statistische Analyse zur Beurteilung von Korrelation und Genauigkeit.
Hauptergebnisse
- Der neue Analysator zeigte eine gute Korrelation mit Referenzsystemen.
- Die Ergebnisse waren über verschiedene Testmethoden hinweg konsistent.
- Die betriebliche Effizienz wurde als entscheidender Vorteil hervorgehoben.
- Benutzerfreundliche Funktionen erleichterten die Handhabung.
Schlussfolgerungen
- Der POCT-Leukozytenanalysator ist ein zuverlässiges Instrument für die Blutanalyse.
- Er bietet erhebliche Vorteile hinsichtlich Geschwindigkeit und Benutzerfreundlichkeit.
- Es wird empfohlen, weitere klinische Validierungen durchzuführen.
Häufig gestellte Fragen
Ausschlaggebende Bedeutung für die Industrie
Leukozyten-Analysatoren für die Point-of-Care-Diagnostik schließen entscheidende Lücken in der Diagnostik der primären Gesundheitsversorgung, indem sie eine schnelle und genaue Differenzierung der weißen Blutkörperchen ermöglichen, ohne auf eine zentralisierte Laborinfrastruktur angewiesen zu sein. Diese Fähigkeit unterstützt die frühzeitige Triagierung von Infektionen und ein verantwortungsvolles Vorgehen beim Einsatz von Antimykotika in ressourcenarmen Umgebungen und wirkt sich direkt auf Arbeitsabläufe zur Validierung präklinischer Biomarker aus, bei denen korrelative hämatologische Veränderungen die Relevanz von Krankheitsmodellen belegen. Die nachgewiesene Korrelation mit Referenz-Hämatologie-Analysatoren schafft eine verlässliche Vorhersagekraft für translationale Anwendungen in Modellen entzündlicher Erkrankungen.
Strategische Anwendungen in der Biopharma-Forschung und -Entwicklung
Frühe Entdeckung und Zielvalidierung
- Wissenschaftlicher Wert: Ermöglicht die Untersuchung leukozytenvermittelter entzündlicher Signalwege in Krankheitsmodellen durch quantifizierbare Verschiebungen der Neutrophilen-, Lymphozyten- und Zwischenzellpopulationen.
- Operativer Wert: Liefert reproduzierbare hämatologische Messgrößen für Target-Validierungsstudien, bei denen die Infiltration von Immunzellen als pharmakodynamischer Biomarker dient.
Screening und Assay-Entwicklung
- Wissenschaftlicher Wert: Erzeugt standardisierte Daten zur Leukozytendifferenzierung, die für die Prüfung der Assay-Bereitschaft immunmodulatorischer Substanzen in Ganzblutsystemen unerlässlich sind.
- Operativer Wert: Beseitigt flüssige Abfälle und komplexe Probenvorbereitung und ermöglicht die Kompatibilität mit Hochdurchsatz-Screenings bei minimalem technischem Aufwand.
Translationale und präklinische Forschung
- Wissenschaftlicher Wert: Unterstützt die Validierung krankheitsrelevanter Systeme durch die Korrelation peripherer Leukozytendynamik mit gewebespezifischen entzündlichen Endpunkten in präklinischen Modellen.
- Operativer Wert: Ermöglicht die longitudinale Überwachung in präklinischen Studien durch minimale Blutvolumen-Anforderungen (5 µL Kapillarprobenahme) und schnelle Ergebnisgenerierung.
Pipeline- und Workflow-Integration
Der Analyzer fungiert als ein Tool zur kontinuierlichen Begleitung von der Entdeckung bis zur präklinischen Phase und positioniert das Leukozyten-Profiling zwischen der frühen Hypothesentestung bezüglich eines Zielmoleküls und der Optimierungsphase von Leitsubstanzen, in der eine Immunmodulation einen zentralen Wirkmechanismus darstellt.
- Entdeckungsbiologie: Unterstützt die mechanistische Entrisikung durch Quantifizierung der Immunzellreaktionen auf Signalweg-Modulatoren und verringert so falsch-positive Ergebnisse in der Zielvalidierungsabfolge.
- Screening: Liefert quantitative, korrelierte Leukozyten-Parameter (Leukozytenzahl, Granulozyten, Lymphozyten), die einen Vergleich der Wirkstoffeffekte zwischen Behandlungsgruppen ermöglichen.
- Analytik: Bietet durch Spearman-Korrelation validierte Messungen (rs = 0,972 für Leukozyten/Granulozyten, rs = 0,851 für Lymphozyten), die eine zuverlässige Vergleichbarkeit zwischen Systemen für datenbasierte Entscheidungen sicherstellen.
- Translationale Forschung: Verbindet die Leukozytenprofilerstellung in der Entdeckungsphase mit präklinischer Kontinuität durch Bland-Altman-bestätigte Übereinstimmung mit Referenz-Hämatologiesystemen.
- Unternehmensweite Wiederverwendung: Stellt eine einsetzbare Kompetenz über mehrere therapeutische Bereiche hinweg dar, die eine Immunüberwachung erfordern, und reduziert so redundante Validierungsaufwendungen.
Operative und unternehmerische Auswirkungen
- Wissenschaftlicher Wert: Vorhersagegenauigkeit hinsichtlich leukozytenvermittelter Wirkmechanismen, Verringerung mechanistischer Unschärfen bei der Immunmodulator-Screening.
- Operationaler Wert: Standardisierung durch wartungsfreien Betrieb, Reproduzierbarkeit anhand von 95-%-Übereinstimmungsgrenzen und Skalierbarkeit durch Einzelpersonen-Nachweiskits.
- Strategischer Wert: Verbesserte Go/No-Go-Entscheidungen in Immunmodulator-Programmen, Kapitaleffizienz durch Vermeidung von Abhängigkeiten von Kernlaboren und reduziertes biologisches Risiko in späteren Entwicklungsstadien durch frühes Immunprofil.
- Portfolio-Wirkung: Risikoadjustierte Priorisierung von Wirkstoffen basierend auf Leukozyten-Antwortprofilen, wodurch Entscheidungen über Weiterentwicklung auf Grundlage übertragbarer hämatologischer Biomarker möglich werden.
Durchführungsaspekte
- Erfordert grundlegende Kenntnisse der Hämatologie zur genauen Interpretation von Leukozytendifferentialen (Neutrophile, Lymphozyten, intermediäre Zellen).
- Erfordert Schulung in der Kapillarblutentnahme und Beherrschung quantitativer Pipettierverfahren für ein exaktes Probenvolumen von 5 µL.
- Benötigt eine standardisierte, übergreifende Auswahl der Referenzgruppe (Alters-/Geschlechts-angepasste Normwerte), um eine konsistente longitudinale Nachverfolgung zu gewährleisten.
- Erfordert eine Validierung der Anpassung, wenn die Anwendung über menschliches Vollblut hinaus auf präklinische Modellsysteme (z. B. murin, nichtmenschliche Primaten) ausgedehnt wird.
- Praktische Einschränkung: Die geringere Korrelation bei Lymphozyten (rs = 0,851) erfordert eine orthogonale Validierung bei lymphozytenfokussierten Immuntherapien.
