Immunotherapy

Este video ilustra un método para aislar células T asesinas naturales invariantes, también conocidas como células iNKT. El procedimiento comienza con la inyección de un glicolípido sintético en un ratón para estimular la activación y proliferación de las células iNKT en el bazo. Posteriormente, se preparan suspensiones unicelulares a partir del bazo y se incuban con complejos de reconocimiento de células iNKT marcados con fluoróforos, seguidos de una separación basada en perlas magnéticas, para...

Este video muestra una técnica para fabricar células T con receptor de antígeno quimérico (CAR) ex vivo. Las células T humanas se incuban con perlas magnéticas recubiertas con anticuerpos anti-CD3 y anti-CD28, junto con un medio suplementado con interleucina-2 (IL-2), lo que conduce a la activación y proliferación de las células T. Se introducen vectores lentivirales transgénicos, lo que permite que el ARN transgénico se integre en el genoma del huésped y exprese el transgén. Esto da como...

Este video muestra un ensayo para la transducción viral mediada por polímeros catiónicos en células asesinas naturales (NK). Las células se incuban con vectores lentivirus transgénicos que codifican una proteína fluorescente. La adición de un polímero catiónico permite que el virus se adhiera a las células e integre su ARN en el genoma del huésped, expresando la proteína fluorescente. La fluorescencia se cuantifica para evaluar la mejora de la transducción inducida por polímeros.

Este video demuestra el proceso de transfección de macrófagos primarios con ARNm modificado que codifica proteína fluorescente verde. Estos ARNm modificados, diseñados para reducir la inmunogenicidad y mejorar su estabilidad, aseguran el éxito de la transfección y posterior expresión de proteínas verdes fluorescentes, que se confirma mediante microscopía de fluorescencia.

Este video muestra una técnica para eliminar selectivamente células específicas de un cultivo celular 3D mixto a través de fotoinmunoterapia de infrarrojo cercano. En este método, las células objetivo se identifican con precisión utilizando un anticuerpo conjugado con un fotoabsorbente NIR. La irradiación posterior con luz infrarroja induce la muerte celular, eliminando eficazmente las células objetivo del cultivo 3D.

Este video muestra una técnica basada en ARN interferente pequeño (siRNA) para interferir con el flujo autofágico. Un siRNA dirigido al ARNm de FIP200 se introduce en células dendríticas inmaduras (iDC) derivadas de monocitos mediante electroporación, lo que provoca la eliminación de la expresión de FIP200 y conduce a la inhibición de la disrupción de la lámina nuclear mediante autofagia. Al agregar el virus del herpes simple (VHS), la salida nuclear de la progenie viral se inhibe debido a la...

El video muestra un ensayo que utiliza células T CD8+ derivadas de células madre pluripotentes inducidas humanas (iPSC) para inhibir la replicación del virus de la hepatitis B (VHB) en ratones. Estas células T, modificadas con receptores específicos del VHB, se transfieren a ratones transgénicos. A continuación, los plásmidos del genoma del VHB competentes para la replicación se inyectan directamente en el hígado, lo que permite la absorción del ADN viral. Una vez que los antígenos virales son...

Este video muestra una técnica para la generación ex vivo de células T con receptor de antígeno quimérico (CAR) específico de antígeno tumoral. Los vectores retrovirales portadores de ARN transgénico se mezclan con células de bazo en un medio suplementado con interleucina-2 para promover la supervivencia y proliferación de las células T. A continuación, la mezcla se transfiere a una placa recubierta con fragmentos de fibronectina humana recombinante y se centrifuga para facilitar la fusión del...

El video describe un proceso para crear células CAR-T modificadas genéticamente a través del sistema CRISPR-Cas9. La infección de las células T con lentivirus CRISPR y CAR da lugar a modificaciones en el gen diana y a la síntesis de un receptor de antígeno quimérico o CAR, lo que en última instancia conduce a la formación de células CAR-T modificadas genéticamente.

Este video muestra un ensayo para realizar la edición de genes en células T humanas utilizando la tecnología CRISPR-Cas9. Una mezcla de linfocitos T primarios CD4+ y CD8+ se combina con un complejo de ribonucleoproteínas CRISPR-Cas9, dirigiéndose a genes específicos para su eliminación. Tras la electroporación, el sgRNA guía a Cas9 a la secuencia de ADN objetivo, creando cortes precisos. Estos cortes son reparados por el mecanismo de unión de extremos no homólogos de la célula, lo que lleva a...

Este video muestra una técnica para la modificación genética mediada por la ribonucleoproteína Cas9 de células asesinas naturales primarias (NK). Una ribonucleoproteína Cas9, que consiste en una endonucleasa Cas9 unida a un ARN guía (ARNg) formado por el emparejamiento de bases de un ARN CRISPR (ARNcr) y un ARNc transactivador (ARNtrac), se introduce en las células asesinas naturales primarias mediante electroporación. La ribonucleoproteína se dirige y escinde el ADN del huésped en el sitio...

Este video muestra un ensayo in vitro que evalúa los efectos citotóxicos de las células CAR-T en esferoides tumorales 3D que expresan proteínas fluorescentes. Esta evaluación utiliza la sonda fluorescente roja de anexina V, que se une a los residuos de fosfatidilserina expuestos en la valva externa de las células cancerosas apoptóticas después de las interacciones con las células CAR-T. La fluorescencia roja emitida por la sonda ayuda a distinguir estas células de las sanas que emiten...

Este video muestra un método para establecer un cocultivo tridimensional de esferoide tumoral y células T. Se prepara un molde de agarosa con micropocillos que contienen esferoides tumorales, seguido de la adición de células T. Después de la incubación, esta configuración permite estudiar la interacción de las células T con los esferoides tumorales en un entorno tridimensional controlado.

Este video muestra un ensayo in vitro para validar la actividad de las células T con receptor de antígeno quimérico (CAR). Las células de linfoma de células B que expresan el antígeno CD19 y la luciferasa citoplasmática se cultivan conjuntamente con células CAR-T específicas de CD19. La unión de CAR a CD19 en un tumor induce a las células CAR-T a liberar citocinas y toxinas que causan citotoxicidad en las células tumorales. La actividad de las células CAR-T se evalúa cuantificando la citocina...

Este video muestra la realización de un ensayo de liberación de lactato deshidrogenasa para determinar la citotoxicidad de las células asesinas naturales (NK) contra las células cancerosas objetivo. El ensayo cuantifica la liberación de la enzima lactato deshidrogenasa citoplasmática de las células cancerosas midiendo la absorbancia del producto de color rojo formado.

Este video muestra una técnica para generar células T con receptor de antígeno quimérico (CAR) específico de antígeno a través de la transducción retroviral. Los linfocitos T CD8+ murinos activados se añaden a una placa de micropocillos recubierta con fragmentos de fibronectina recombinante. A continuación, se introducen vectores retrovirales que contienen ARN transgénico que codifica un receptor de antígeno quimérico (CAR) específico del antígeno, y se centrifuga la placa para facilitar la...

Este video muestra un método para generar vesículas de membrana plasmática a partir de células madre de médula ósea haciéndolas pasar rápidamente a través de un filtro de membrana. Estos PMV muestran potencial para la terapia de reemplazo de citoplasma.

Este video muestra un ensayo para generar neutrófilos asociados a tumores (TAN) antiangiogénicos. Al tomar un tumor de melanoma murino que contiene TAN proangiogénicos, las células individuales se aíslan mediante clasificación celular activada por fluorescencia (FACS) y se tratan con un inhibidor de la nicotinamida fosforribosil transferasa (NAMPT) para reducir la capacidad de estimular la angiogénesis.

Este video muestra un ensayo in vitro que utiliza β-glucanos para activar las células microgliales para la producción de radicales superóxido, una especie reactiva de oxígeno. En las células de cáncer cerebral, los oxidantes reactivos generados suprimen activamente la proliferación de células tumorales e inducen la muerte celular.

Este video muestra un procedimiento para la transferencia adoptiva de células dendríticas presentadoras de antígenos (CD) tratadas con alto contenido de sal a ratones. Las células dendríticas (CD) murinas CD11c+ se exponen a un medio que contiene altas cantidades de sodio, formando aductos de proteína isolevuglandina (IsoLG) en las células. Estos aductos sirven como neoantígenos y se presentan en la superficie de las CD. Las células tratadas con alto contenido de sal se inyectan en ratones a...

Este video muestra un ensayo para generar células T CD8αβ+ derivadas de células madre pluripotentes inducidas (iPSC) específicas de antígeno tumoral. Las iPSC específicas del antígeno tumoral se cultivan en una monocapa de células estromales y se diferencian en células progenitoras hematopoyéticas (HPC). Las HPC se diferencian en linfocitos T CD4+ CD8+ doble positivo mediante un medio de diferenciación. A continuación, estas células se estimulan para generar células T monopositivas que expresan...

Este video muestra una técnica de fotoinmunoterapia de infrarrojo cercano para tratar el cáncer de pulmón en un modelo de ratón diseñado que exhibe células tumorales que expresan luciferasa. Al inyectar un conjugado anticuerpo-fotosensibilizador (APC) que se une a antígenos específicos en las células tumorales, el ratón se expone a la radiación infrarroja cercana, lo que induce cambios fotoquímicos en la APC y conduce a la muerte necrótica de las células tumorales unidas. La eficacia del...

Este video muestra una técnica para generar ratones del sistema inmunológico humano (HIS). Las células madre hematopoyéticas (HSC) CD34+ se aíslan de las células de la capa leucitaria de la sangre del cordón umbilical humano mediante perlas magnéticas recubiertas de anticuerpos. Las HSC CD34+ se expanden en un medio de crecimiento enriquecido con citocinas y criopreservado. Finalmente, las HSC descongeladas se inyectan en una cría de ratón inmunodeficiente para establecer el modelo de ratón HIS.

Este video ilustra las pruebas de terapia adyuvante o adicional en un modelo de ratón con tumores subcutáneos resecados incompletamente. El ratón parcialmente resecado del tumor se trata con un anticuerpo dirigido a la proteína anticitotóxica de las células T reguladoras, lo que podría reducir el recrecimiento del tumor y sugerir una terapia adyuvante eficaz.

Este video muestra un ensayo para evaluar la efectividad de la terapia antirretroviral combinada oral (cART oral) en un modelo de ratón humanizado infectado con el virus de inmunodeficiencia humana-1 (VIH-1). Se administra una combinación de fármacos dirigidos al VIH-1, incluidos los inhibidores de la transcriptasa inversa análogos y los inhibidores de la transferencia de la cadena de integrasa, junto con un suplemento nutricional y antibióticos. Tras el consumo de esta mezcla por parte de los...

Este video muestra un método para injertar piel humana en un ratón inmunodeficiente con una respuesta de neutrófilos suprimida. El método consiste en aplicar piel humana de espesor dividido al lecho de injerto del ratón, sellarlo y cubrirlo para su recuperación. Eventualmente, la piel humana se adhiere a la piel del ratón, estableciendo la vascularización y la circulación, lo que resulta en un xenoinjerto de piel exitoso.

Este video muestra un ensayo para generar un modelo de ratón xenoinjerto humanizado. A un ratón inmunodeprimido se le inyecta ciclofosfamida para provocar el agotamiento de las células inmunitarias. Las células tumorales derivadas del paciente mezcladas con células mononucleares de sangre periférica humana (PBMC) en un hidrogel se inyectan subcutáneamente en el ratón, formando un tumor con células T infiltrantes.

Este video presenta un procedimiento para la implantación de cánulas intracraneales en un modelo de ratón con tumor cerebral, para facilitar la administración de un agente inmunoterapéutico. La administración de células T del receptor de antígeno quimérico específico del glipican-2 en el microambiente tumoral desencadena la activación de las células T, lo que da lugar a la lisis tumoral y la regresión tumoral.

El video muestra la administración locorregional de virus oncolíticos a través de la inyección arterial hepática como enfoque terapéutico para el carcinoma hepatocelular. Estos virus se replican selectivamente en las células tumorales, induciendo la lisis celular y liberando antígenos asociados a las células tumorales. Este proceso desencadena la muerte celular inmunogénica, induciendo una respuesta antitumoral.

Este video muestra una técnica para evaluar la actividad antitumoral de la proteína activadora de neutrófilos Helicobacter pylori, o HP-NAP, en un modelo de cáncer de vejiga de ratón. HP-NAP interactúa con los neutrófilos de las células tumorales para producir citocinas proinflamatorias, induciendo la diferenciación de las células T vírgenes en fenotipos de células T auxiliares de tipo 1 (Th1) y citotóxicas de tipo 1 (Tc1). Las células Th1 y Tc1 secretan interferón gamma, inhibiendo la...

Este video muestra una terapia basada en células para la artritis autoinmune en ratones. Las células T reguladoras derivadas de iPSC que expresan receptores específicos de ovoalbúmina se inyectan con albúmina sérica bovina metilada (mBSA) emulsionada en un adyuvante. Las células presentadoras de antígenos murinos (APC) procesan y presentan la mBSA a las células T, lo que provoca la activación de las células T y la migración a la membrana sinovial de la articulación de la rodilla. Las...

Este video muestra una técnica de inyección estereotáxica para administrar linfocitos T efectores humanos en un modelo murino portador de un tumor cerebral humano. Al colocar un ratón anestesiado portador de tumor en un marco estereotáctico y crear un orificio en el lugar de la inyección en el cráneo, se inyectan linfocitos T efectores en el sitio del tumor.

Este video demuestra el método para generar un ratón BLT (médula, hígado y timo) óseo doble humanizado con un sistema inmunológico humano funcional y un microbioma intestinal estable injertado similar al humano.

Este video muestra la generación de aerosoles de drogas y la administración dirigida de estos aerosoles solo por nariz a ratones utilizando una unidad de inhalación equipada con un generador de aerosoles. El ratón se sujeta en un sistema de retención solo para la nariz y se conecta a la unidad de inhalación, que administra el medicamento directamente en la cavidad nasal del ratón. Posteriormente, el fármaco pasa a través de la tráquea y entra en los pulmones.

Este video muestra un método para generar un modelo de interposición aórtica de ratón para estudiar el rechazo vascular inducido por aloimno. Después de colocar un ratón donante anestesiado en posición supina, la aorta abdominal infrarrenal (AAI) se aísla cuidadosamente de las estructuras circundantes. Los vasos ramificados se ligan y ambos extremos del AAI se sujetan para evitar el flujo sanguíneo antes de la resección. Posteriormente, el AAI donante se implanta en un ratón receptor alogénico...

El video muestra un método quirúrgico para generar un modelo de ratón de trasplante de bazo heterotópico vascularizado. La cavidad abdominal de un ratón donante anestesiado se abre quirúrgicamente para extirpar el bazo. Se identifican la vena cava inferior y la aorta infrarrenal, se ligan sus ramas lumbares y se hacen aberturas para el trasplante heterotópico de un bazo de un ratón donante congénito. Una vez completada la anastomosis vascular y restableciendo el flujo sanguíneo al bazo...

El video muestra un método para generar un modelo de rata con desmielinización cortical cerebral generalizada. Esto implica la interrupción de la barrera hematoencefálica mediante la inyección de citoquinas proinflamatorias en ratones preparados con proteína de vaina de mielina recombinante. Este proceso facilita la infiltración de células inmunitarias, lo que da lugar a una desmielinización cortical cerebral generalizada.

El video muestra la generación de un modelo de piel ovina ex vivo infectado con Staphylococcus aureus. Esto implica tratar una sección de biopsia de piel de frente de cordero con antibióticos, establecer un lecho de herida, colocarlo en una membrana permeable en una placa de pocillos múltiples con medio libre de antibióticos y establecer una infección bacteriana en la herida de la piel.

El video muestra un método para transferir directamente el ADN plásmido que codifica la interleucina-15 al tejido de la piel de un modelo de ratón con deficiencia de interleucina-15 a través de la acupuntura usando microagujas. Estas microagujas generan micropunciones en la capa más externa de la piel, lo que facilita la absorción y transfección del ADN plasmídico en las células epidérmicas, incluidos los queratinocitos, dentro del tejido cutáneo.

Este vídeo muestra un procedimiento de trasplante de microbiota fecal en un ratón con deficiencia de interleucina-10 e inflamación del colon. Los microbios fecales colonizados en el intestino liberan metabolitos secundarios, lo que provoca la liberación de citocinas antiinflamatorias y reduce la inflamación del colon.

Este video muestra un método para generar un modelo de ratón humanizado dual con un sistema inmunológico humano y células hepáticas. Consiste en el trasplante de células hepáticas humanas y células madre y progenitoras hematopoyéticas en un ratón transgénico inmunodeficiente mediante inyección intraesplénica, lo que conduce al injerto de células hepáticas y al desarrollo de células inmunitarias humanas.

El video muestra la técnica de terapia con fagos dirigida a la infección por Pseudomonas aeruginosa en embriones de pez cebra con fibrosis quística. La terapia con fagos disminuye eficazmente la carga bacteriana y mitiga las respuestas inmunitarias proinflamatorias en los embriones de pez cebra con FQ infectados con bacterias, lo que reduce la letalidad de los embriones con FQ.

Este video muestra una técnica para inyectar plasma rico en plaquetas (PRP) en el tendón de Aquiles seccionado de ratas. Se extirpa un pequeño segmento del tendón de Aquiles de una rata receptora, se sutura el sitio y se permite que la rata se recupere. Al mismo tiempo, se recolecta sangre completa de una rata donante y se centrifuga para obtener PRP, que luego se activa y se inyecta en el sitio suturado de la rata receptora para inducir la reparación del tendón.

El video muestra una técnica para generar un modelo de ratón humanizado con inmunidad de ingeniería basada en células madre contra el virus de inmunodeficiencia humana (VIH). El tejido del timo fetal humano y las células madre hematopoyéticas (HSC) modificadas genéticamente se implantan en la cápsula renal de un ratón gravemente inmunodeprimido. Las HSC, que expresan receptores de antígenos quiméricos (CAR) contra el VIH, se mezclan en una mezcla de proteínas gelatinosas que promueve su...

Este video muestra la administración oral de células de levadura transformadas en un modelo de ratón. Las células de levadura transformadas se administran por vía oral mediante una técnica de sonda nasogástrica, llegando al estómago del ratón. Más tarde, las células migran al intestino delgado, donde las células de los micropliegues las engullen y facilitan su transferencia a los parches de Peyer y acceden al sistema inmunitario intestinal.

Este video muestra la canalostomía, un procedimiento que permite la administración local de fármacos en el oído interno de un ratón a través del canal semicircular con un daño mínimo a la audición y la función vestibular. Este método permite la inoculación de vectores virales, productos farmacéuticos y moléculas pequeñas en el oído interno del ratón.

Este video muestra un método basado en imágenes para visualizar células beta trasplantadas que expresan luciferasa en un ratón diabético inmunodeficiente no obeso. La introducción de esplenocitos de un ratón diabético conduce a la destrucción progresiva de las células beta, confirmada visualmente por la disminución de la luminiscencia después de la introducción del sustrato.

Este video muestra un ensayo de vacunación tumoral basado en células. Un ratón, inyectado por vía intradérmica con células de melanoma B16-F10 para la formación de tumores, es vacunado con células B16-F10 que secretan citocina Flt3L cerca del tumor desarrollado. El Flt3L secretado por la vacuna promueve la maduración y proliferación de las células dendríticas que luego presentan antígenos tumorales a las células T en los ganglios linfáticos, desencadenando una respuesta inmunitaria antitumoral...

Este video muestra un método para generar vacunas de vesículas de membrana externa (OMV) de visualización multivalente. Las células de mamíferos se transfectan para expresar y secretar antígenos virales fusionados a un SpyTag y un tag de polihistidina. A continuación, estos antígenos se purifican utilizando una columna de afinidad de ácido níquel-nitritriacético (Ni-NTA). El antígeno purificado se mezcla con vesículas de membrana externa que expresan la proteína SpyCatcher (SC) unida a la...

Este video muestra la producción de vacunas tumorales con nanoemulsión. Los depósitos estables de los depósitos de petróleo que transportan péptidos sintéticos y adyuvantes se producen mediante nanoemulsión de baja energía, lo que ofrece una gran promesa para la inmunoterapia tumoral.

Este video muestra la inmunización intranasal con BCG en ratones, activando tanto las respuestas inmunitarias innatas como las adaptativas, lo que lleva al desarrollo de células T de memoria residentes en el pulmón y células B efectoras, mejorando así la protección contra las infecciones por Mycobacterium.

El video muestra un método para crear virus de influenza recombinantes adaptados al frío. Consiste en transfectar células humanas con plásmidos bidireccionales, seguido de una incubación a baja temperatura para producir virus adecuados para la producción de vacunas, caracterizada por una replicación reducida en condiciones más cálidas.

Este video muestra un método para la generación de una plataforma novedosa basada en burbujas de polímero o poliburbujas que permite la liberación de ráfagas retardadas. Los polímeros a base de poliéster se utilizan para formar las poliburbujas con estructura de núcleo-cáscara, y las moléculas pequeñas y los antígenos se pueden utilizar como carga.

Este video muestra un ensayo in vitro para estudiar los efectos anticancerígenos del sobrenadante libre de células de Lactobacillus (LCFS). Al exponer a los esferoides del cáncer colorrectal a dosis variables de LCFS, la interacción con los metabolitos bacterianos en el LCFS induce la apoptosis en las células cancerosas, alterando la estructura del esferoide y provocando la muerte celular de una manera dependiente de la dosis.

Este video muestra un método para generar una vacuna candidata de ARNm utilizando nanopartículas poliméricas. El polímero catiónico interactúa con el ARNm cargado negativamente, formando poliplexos. La formación de poliplexos estabiliza el ARNm, lo que lo convierte en un candidato potencial para futuras vacunas de ARNm en aplicaciones inmunoterapéuticas.

Este video muestra la purificación de nanopartículas de proteínas autoensambladas marcadas con histidina o SAPN utilizando cromatografía líquida de afinidad. Las fracciones de SAPN purificadas resultantes son adecuadas para el desarrollo de vacunas, lo que promete posibles aplicaciones inmunoterapéuticas.

El video muestra una técnica de inyección guiada por ultrasonido para administrar medicamentos terapéuticos en las glándulas salivales de un paciente humano.

El video muestra una técnica para cargar antígenos en Mycobacterium bovis BCG para mejorar sus propiedades inmunogénicas. El método utiliza el sistema avidina-biotina para recubrir la superficie bacteriana con antígenos exógenos.

El video muestra un ensayo in vitro para la detección de interferones con actividad antiviral contra el virus del Zika, un patógeno humano. Dentro de la célula huésped, el virus del Zika se multiplica al internalizarse, infectando a las células vecinas y creando zonas distintas o placas virales. El interferón tipo I, que actúa como agente antiviral, dificulta la multiplicación del virus, evitando así la formación de placas virales en la monocapa de la célula huésped.

Este video muestra un ensayo para inmunizar un modelo de ratón con esporozoítos vivos atenuados. Los esporozoítos de Plasmodium atenuados por radiación se inyectan en la cara dorsal de la oreja del ratón. Después de las inyecciones en múltiples ubicaciones en ambos oídos, se permite que el ratón se recupere.