La determinación de la reactividad y el título de suero utilizando un ensayo de hemaglutinación

Determinación de la reactividad y título de suero mediante un ensayo de hemaglutinina. Una reacción de aglutinación es un proceso que ocurre entre anticuerpos solubles y antígenos particulados. Estos pueden incluir células o moléculas portadoras.

Los epítopos en la superficie del portador permiten que un anticuerpo se una y entrecruce con el portador, lo que lleva a la formación de una red compleja denominada complejo antígeno-anticuerpo. La hemaglutinación es una forma específica de aglutinación en la que los anticuerpos se unen a los glóbulos rojos, que actúan como el antígeno particulado. Los glóbulos rojos son dianas útiles porque son fácilmente disponibles y los resultados pueden observarse fácilmente a simple vista.

Las muestras de suero se diluyen seriadamente y luego se colocan en una placa de 96 pocillos en forma de U. A continuación, se añade una suspensión de glóbulos rojos, células Riva. Cuando hay anticuerpos presentes en alta concentración, se une a los glóbulos rojos formando una red tridimensional extensa.

Mientras esta red se sedimenta por gravedad, adopta la forma de la placa ubo. Cuando se observa desde arriba, se ve una capa amplia de glóbulos rojos. Esta es una reacción positiva de hemaglutinina.

Cuando los niveles de anticuerpos son bajos, no puede formarse una red y los glóbulos rojos adoptan la forma de la placa UBO y se concentran en la base, formando un pequeño pellet. Esta es una reacción negativa de hemaglutinación. Este diagrama muestra una reacción positiva.

Las células forman una red mientras se sedimentan y se adaptan a la forma de la placa con fondo en U. A la izquierda y a la derecha, vemos la vista superior donde se observa una lámina amplia de glóbulos rojos. Si hay una cantidad intermedia de anticuerpos presentes, se observará alguna formación de letras.

La hemaglutinación también permite probar la reactividad de diferentes muestras de suero frente al antígeno conocido. También se puede determinar el título del suero. El título es la última dilución en la que se observó una reacción positiva.

Normalmente, cuanto mayor sea la concentración de anticuerpos en la muestra de suero, mayor será el título. Este diagrama muestra una reacción negativa de hemaglutinación. Hay una cantidad insuficiente de anticuerpos presente para entrecruzar los glóbulos rojos.

A medida que las células sedimentan por gravedad, se deslizan hacia abajo por el costado del pocillo, formando un sedimento compacto en el fondo. El diagrama de la derecha muestra los glóbulos rojos vistos desde arriba. Para este experimento, necesitará 1 placa de fondo redondo de 96 pocillos.

Es esencial utilizar una placa de fondo en U, ya que las placas de fondo plano no permitirán que las células sedimenten formando un botón, lo que haría imposible la interpretación. Un pipeta capaz de dispensar 50 microlitros agrega suero, una suspensión al 1% de células Riva y una solución tamponada salina verona a cada pocillo de la fila. De uno a doce, agregue 50 microlitros de solución tamponada salina verona.

Esto se utiliza como su diluyente. Ahora coloque 50 microlitros de suero en el pocillo A1. Esta es su primera dilución uno en dos.

Utilizando el perpet, asegúrese de que la muestra de suero esté completamente mezclada. Una vez mezclada, retire 50 microlitros del pozo A1 y transfiera al pozo A2. Esta es su segunda dilución uno a dos, lo que le proporciona una dilución cuádruple.

Continúe esta serie de diluciones utilizando los pozos del tres al 11. No coloque ningún suero en el pozo 12, ya que este es su control negativo de tampón salino. Ahora tome su suspensión al 1% de células de Riva, que ha sido mezclada completamente, y transfiera 50 microlitros desde el pozo A1 hasta el pozo A12.

Una vez que se hayan agregado las células, cubra la placa y golpee suavemente la placa para asegurar que las muestras y las células se mezclen. Incube ahora a 37 grados durante 60 minutos. Es adecuado un incubador humedecido.

Durante el período de incubación de 60 minutos, se producirán interacciones entre antígenos y anticuerpos y las células comenzarán a sedimentar. Las imágenes que está viendo son una fotografía de intervalos que abarca todo el período de 60 minutos. Esta es una vista ampliada de los pozos cinco al diez.

Ya hemos examinado, bueno, el pozo 12, que era su control VBS en este caso. Bueno, las células habían formado un sedimento compacto, lo que indica que el ensayo funcionó adecuadamente. Los pozos cinco y seis son ejemplos de hemaglutinación positiva.

Bueno, el pozo siete es un ejemplo de un resultado intermedio de aglutinación, mientras que los pozos ocho, nueve y diez son negativos para la hemaglutinación. Según este resultado, el título se determinaría en función de la dilución del pozo siete, ya que fue el último pozo en el que se observó una reacción positiva.