Multiespectrales en tiempo real imágenes de fluorescencia para la detección intraoperatoria del ganglio centinela en Oncología Ginecológica

El objetivo general del siguiente experimento es la detección intraoperatoria del ganglio linfático centinela en cáncer de cuello uterino o cáncer de vulva. El ganglio linfático centinela es el primer ganglio linfático de drenaje de un tumor. En este procedimiento, se inyecta un agente fluorescente, incy y verde o ICG, junto con el colorante azul estándar alrededor del tumor primario.

La solución será impulsada hacia el primer ganglio linfático de drenaje. Un sistema personalizado de cámara intraoperatoria de fluorescencia multiespectral, instalado en el quirófano antes de la cirugía, registra en tiempo real eventos in vivo del flujo linfático basándose en la señal fluorescente, así como en resultados in vivo y ex vivo que indican la intensidad de la señal fluorescente y el método clásico de detección por discoloración azul. El cirujano se guía durante la extirpación del ganglio linfático centinela.

La principal ventaja de esta técnica frente a los métodos existentes es que se trata de un procedimiento en un solo paso en el que la visualización y la extirpación de los ganglios linfáticos tienen lugar durante la cirugía. Esta tecnología de plataforma podría mejorar los conceptos actuales en oncología quirúrgica, no solo al proporcionar al cirujano información anatómica, sino también al ofrecer simultáneamente un rastreo dinámico de fluorescencia en tiempo real in vivo. Para llevar a cabo este protocolo, configure la cámara intraoperatoria de fluorescencia multiespectral, que normalmente es personalizada.

El sistema que se muestra aquí fue desarrollado en el Instituto de Imagen Biológica y Médica de Múnich. En estrecha colaboración con SEARCHs, se utiliza un láser para la excitación de la sonda fluorescente. Los filtros de la cámara se ajustan a la fluorescencia en el infrarrojo cercano con una longitud de onda de excitación de 750 nanómetros y una longitud de onda de emisión de 800 ± 20 nanómetros; tras la emisión, la luz atraviesa el sistema óptico, donde se separa en luz visible, fluorescencia intrínseca y fluorescencia en el infrarrojo cercano.

Las cámaras CCD están alineadas para detectar los haces de luz separados, de modo que las señales multi-espectrales de todas las cámaras se procesen para obtener una biodistribución cuantitativa verdadera de cuatro fluorocromos. La configuración también corrige los artefactos. Los monitores del ordenador en el escritorio de control y dentro del quirófano pueden mostrar las señales de color y fluorescentes como imágenes separadas, así como superpuestas en una sola imagen, bajo condiciones estériles.

Prepare el agente de contraste fluorescente indocianina verde a una concentración de 0,5 miligramos por mililitro en agua destilada estéril. No utilice solución salina, ya que esto precipita inmediatamente el reactivo; almacene la solución en un lugar oscuro y fresco para evitar su decoloración y preservar la integridad del reactivo de ICG, con el fin de minimizar interferencias con el procedimiento quirúrgico estándar. Coloque e inicie el sistema de cámara en el quirófano antes de la cirugía y verifique las conexiones con las pantallas de alta definición para su uso durante la intervención. Cubra la cámara con campos estériles estándar utilizando procedimientos y condiciones estériles, tal como se muestra en el video.

Antes de inyectar el agente fluorescente, coloque la cámara sobre el paciente y exponga el campo de interés. Ajuste el zoom para enfocar la cámara y apague las luces del quirófano para una mejor detección de la señal fluorescente.

Jeringa tipo loto con un mililitro de ICG al 0,5 miligramos por mililitro y un volumen igual de colorante azul estándar. Inyecte cuidadosamente el agente fluorescente en cuatro cuadrantes alrededor del tumor primario y trate de evitar derrames; en caso de que el ICG manche los guantes quirúrgicos, simplemente cámbielos durante el procedimiento.

Maniobre la cámara para asegurar la grabación continua del área de interés. Adquiera imágenes fijas o videos en tiempo real del flujo linfático y de la aparición del ganglio linfático centinela fluorescente. Un tiempo de exposición de 180 a 200 milisegundos producirá buenos videos.

Guarde todos los datos en el ordenador de forma adecuada para análisis futuros. Se realiza una inspección visual en busca de decoloración azul causada por la inyección de azul de patente, como parte estándar del procedimiento, utilizando las imágenes de fluorescencia registradas simultáneamente como guía. Se lleva a cabo la escisión en tiempo real del ganglio linfático centinela.

La imagen en tiempo real ayuda a detectar nódulos fluorescentes en localizaciones inesperadas y a obtener imágenes ex vivo de todos los nódulos linfáticos extirpados de forma secuencial para verificar la presencia de fluorescencia. Pueden utilizarse tiempos de exposición más largos al capturar imágenes fijas. El nódulo linfático centinela se envía para análisis histopatológico con el fin de detectar la presencia o ausencia de células tumorales.

Se demuestra la potencia de la detección intraoperatoria de un ganglio linfático centinela mediante este protocolo de imagenología fluorescente multiespectral en este ejemplo de una imagen fluorescente multiespectral in vivo de un ganglio linfático en cáncer de vulva. El ganglio linfático fluorescente en la región inguinal antes de la extirpación se visualiza claramente. En este breve video, mostramos la detección en tiempo real del ganglio linfático centinela basada en la fluorescencia en una paciente con cáncer de cuello uterino.

Aquí mostramos una imagen ex vivo de un ganglio linfático en cáncer cervical. La imagen en color del ganglio linfático se superpuso con la imagen de fluorescencia del mismo ganglio linfático utilizando una escala de colores falsos para producir una imagen clara con una alta relación señal-fondo. Esta técnica no solo allanó el camino para los investigadores en el campo de la oncología quirúrgica hacia la resección guiada por imagen del ganglio centinela, sino que también ofrece posibilidades para la obtención de imágenes específicas dirigidas al tumor, para la evaluación del margen tumoral y para intervenciones personalizadas en pacientes con tumores sólidos y posible metástasis local regional.

Después de ver este video, debería tener una buena impresión de la imagenología fluorescente intraoperatoria en tiempo real de los ganglios linfáticos centinela en el cáncer ginecológico.I.