Contracción de la arteria mesentérica y Estudios de relajación con miografía cable automático

Este procedimiento utiliza ratas sensibles y resistentes a la sal para comparar la reactividad de las arterias de resistencia mesentéricas frente a la tensión inducida por fenilefrina en presencia de calcio extracelular. Esto se logra primero aislando el arco mesentérico de los animales y diseccionando las ramas de las arterias de resistencia. A continuación, se introduce un primer alambre de acero inoxidable a través de un segmento corto de la arteria diseccionada y se monta el vaso en la cámara del miógrafo.

Luego, se introduce un segundo alambre de acero inoxidable a través de la luz del vaso sanguíneo en paralelo al primer alambre. A continuación, se estira el vaso montado hasta alcanzar una circunferencia interna normalizada. El paso final del procedimiento consiste en reactivar el vaso mediante aplicaciones repetidas de fenilefrina y relajarlo con aplicaciones acumulativas de calcio.

En última instancia, los resultados muestran cambios en la tensión del vaso, que pueden convertirse en una curva de respuesta al calcio y utilizarse para determinar los valores de CE 50. Para comparación. Tuvimos la idea inicial de usar este método cuando descubrimos que la red nev de baterías Masonry de rata expresaba un receptor sensible al calcio acoplado a proteína G.

Esto puede estudiarse de la misma manera que los receptores AIC amargos, que se activan mediante un agonista. Por lo general, las personas nuevas en este método pueden tener dificultades porque las capas de endotelio y músculo liso son pequeñas. Los vasos se dañan fácilmente.

Si esto ocurre, las propiedades mecánicas de estos vasos pueden verse comprometidas. Para comenzar, prepare el área de trabajo y los instrumentos quirúrgicos. Coloque un animal anestesiado en posición supina y limpie el abdomen con alcohol.

Después de realizar una laparotomía media, use tijeras para extraer aproximadamente 85 centímetros de intestino, incluyendo la arteria mesentérica superior. Corte el extremo proximal cerca del píloro y el extremo distal cerca de la unión ileocecal. Coloque el segmento extirpado en una placa de Petri recubierta que contenga solución salina fisiológica o PSS a temperatura ambiente.

Sujete el extremo proximal del intestino hacia la derecha y luego sujete el resto del intestino en sentido antihorario. A continuación, seccione un segmento de la arteria mesentérica que contenga las ramas dos y tres, junto con un fragmento del intestino desde el extremo proximal. Identifique el punto de bifurcación en forma de V de la arteria mesentérica y sépárelo de la vena.

Utilice pinzas para retirar suavemente el tejido adiposo y conectivo, evitando el contacto directo con la arteria. Para comenzar el montaje del vaso, corte dos segmentos de arteria de aproximadamente dos milímetros de longitud. Se puede utilizar la punta de un alambre de acero inoxidable libre de tungsteno de cuatro centímetros y 40 micrómetros para abrir la luz de la arteria.

Luego, use pinzas finas para insertar el alambre en la luz de cada arteria. Teniendo cuidado de no dañar el endotelio, llene la cámara del injerto miográfico con PSS a 37 grados Celsius. Use pinzas para transferir el segmento vascular ensartado a la cámara.

A continuación, transfiera el segmento vascular proximal resecado a la cámara del miógrafo y deslice el extremo a lo largo del alambre para introducirlo en el vaso. Evite estirar el vaso. Fije el extremo cercano del alambre en sentido antihorario debajo del tornillo de fijación cercano en la mordaza derecha conectada al micrómetro.

Sujete el extremo libre del alambre con pinzas y fíjelo en sentido horario debajo del tornillo de sujeción distal en la mandíbula derecha; asegúrese de que el segmento del vaso a lo largo del alambre se sitúe en el espacio entre las mandíbulas sin tener contacto alguno con la mandíbula misma. Separe las mandíbulas girando el tornillo. Alinee el segundo alambre paralelamente al vaso e insértelo en el extremo distal de la luz.

Introduzca suavemente el alambre a través de la luz del segmento vascular en un solo movimiento, utilizando el alambre ya montado como guía. Sujete el alambre aproximadamente un centímetro apartado del vaso para evitar estirarlo durante la maniobra y evite tocar el endotelio. Enrosque las mordazas entre sí y asegúrese de que el segundo alambre de montaje pase por debajo del primero, que ya está fijado en el lado derecho.

Sujete el extremo cercano del segundo alambre en sentido horario debajo del tornillo de fijación cercano de la mandíbula izquierda conectada al transductor. Sujete el extremo lejano del alambre debajo del tornillo de fijación en la mandíbula izquierda y apriete para estirar el alambre. Una vez completada la instalación, espere 30 minutos para la equilibración a 37 grados Celsius.

Tras la equilibración, se reinicia el motor desde el menú de montaje y se inicia el procedimiento de normalización, que estira el vaso hasta una circunferencia interna normalizada. Para comenzar, abra el menú de normalización y establezca la presión transmural objetivo en 13,3 kilopascales. A continuación, establezca la duración de cada uno de los pasos de normalización en 60 segundos.

La relación entre IC uno y IC 100 debe ser igual a 0,9 y la calibración de IP debe ajustarse a dos estrellas delta. Mida la longitud de la arteria mesentérica montada utilizando las lecturas del ocular del microscopio cuando las líneas finas estén sobre los extremos y las neuronas del segmento del vaso. Después de la normalización, los vasos se reactivan realizando un inicio estándar que consiste en una serie de estimulaciones y períodos de lavado.

Primero, reemplace la tapa de la cámara mió y comience la aeración con 95% de aire y 5% de dióxido de carbono. Llene la cámara con PSS fresco que contenga 100 micromolar de ácido ascórbico. Contraiga el vaso con cinco micromolar de fenilefrina, rina o PE durante cinco minutos y lave cuatro veces con tampón PSS. Después del último lavado, rellene nuevamente la cámara con PSS y espere tres minutos antes de volver a llenar la cámara con PSS y contraer con PE. Como se mostró previamente, la arteria ya está lista para el experimento.

Mida la relajación de los vasos contraídos mediante la adición acumulativa de concentraciones crecientes de cloruro de calcio. Esta tabla muestra que las tensiones basales tras la aplicación de fenilefrina variaron entre las ratas Wistar DS o Doll sensibles a la sal y las ratas DR o Doll resistentes a la sal. Este trazado de una rata Wistar muestra la relajación de arterias contraídas con PE mediante adiciones acumulativas de calcio, con una relajación gravemente comprometida en tejidos de ratas DS en comparación con ratas Wistar y en comparación con ratas DR. Como se observa aquí, las diferencias en la sensibilidad al calcio pueden verse en las curvas de respuesta al calcio y nuevamente al calcular los valores de CE 50.

Por último, las ratas DS muestran una reducción en la expresión del receptor sensor de calcio en las arterias en comparación con las ratas Dr. Una vez dominada, esta técnica puede realizarse en dos horas si se lleva a cabo correctamente. Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo comparar la reactividad vascular de pequeñas arterias entéricas frente a compuestos exógenos bajo condiciones isométricas.